Twenty apple germplasm accessions from the Korean Genebank were successfully cryopreserved using two-step freezing to back up genetic resources maintained by field collections. This study examined the morphological and genetic stability of cryopreserved dormant apple buds that were stored in liquid nitrogen, and then rewarmed and regrown. Whole plants were regenerated directly from dormant buds through budding without an intermediary callus phase. The cryopreserved buds produced high levels of shoot formation (76.2-100%), similar to those of noncryopreserved buds (91.3-100%), with no observed differences between cryopreserved and noncryopreserved materials. Three of the twenty cryopreserved apple germplasm accessions were used to assess morphological and genetic stability. No differences in morphological characteristics including shoot length, leaf shape, leaf width/length ratio, and root length were observed between controls (fresh control and noncryopreserved) and cryopreserved plantlets. The genetic stability of regenerants (before and after cryopreservation) was investigated using inter simple sequence repeat (ISSR) markers. The ISSR markers produced 253 bands using four primers, ISSR 810, SSR 835, ISSR 864, and ISSR 899. These markers showed monomorphic banding patterns and revealed no polymorphism between the mother plant and regenerants before and after cryopreservation, suggesting that cryopreservation using two-step freezing does not affect the genetic stability of apple germplasm. These results show that two-step freezing cryopreservation is a practical method for long-term storage of apple germplasms.
사과를 가해하는 나방류 해충은 그 종류가 많고, 피해도 크므로 경제적으로 중요한 위치를 차지하는 해충의 무리이다. 그러나 우려나라에서는 그들에 대한 종류 조사 및 생활사를 비롯한 생태조사가 1940년후로는 별로 이루어 진 바가 없는 실정이다. 피자들은 최근 몇 년간 실시된 작물해충 분포조사에서 얻었던 자료와 수원을 중심으로 1975-1976년 사과해충 특히 타방류에 대한 집중조사를 실시하였다. 본 조사를 통하여 그 피해가 직접 관찰되었던 나방류 해충으로 14종의 잎말이 나방류를 비롯하여 심식나방류 3종, 굴나방류 4종, 기타잎을 가해하는 나방류 28종 등 49종(흡아류제외)을 사과해충으로 재확인하고 그 우점종들을 밝힘과 동시에 그들의 생활사 개략을 기술하였다.
본 실험은 '후지'/M.9 사과나무의 갈색무늬병에 의한 낙엽 정도가 수체생장과 과실품질에 미치는 영향을 조사하고자 실시하였다. 갈색무늬병에 의해 9월말 수관 전체 낙엽율이 10% 이상 되면 가용성고형물 함량이 감소되었고, 30% 이상이면 평균과중이 감소되었다. 과실의 착색과 전분 함량은 과실 주변 잎들의 낙엽 정도가 심해질수록 감소되는 경향을 나타내었다. 이듬해 개화율 및 과중, 총신초장은 전년도 낙엽율이 높을수록 감소되는 경향이 있었다. '후지'/M.9 사과나무의 과대지에서 갈색무늬병의 발생이 없는 잎은 9월 말에도 광합성속도를 약 $10{\mu}mol{\cdot}m^{-2}{\cdot}s^{-1}$ 이상 유지하여 9월 말 이후의 과실비대 및 가용성고형물 함량 증가에 영향을 미쳤다. 9월말 갈색무늬병반이 전체 잎면적의 50% 이상을 차지한 잎의 광합성속도는 건전한 잎의 30% 수준이었다. 결론적으로 낙엽구들의 과실품질 감소는 과실 내 전분 감소에 의해서 이며, 과실 내 전분 감소는 갈색무늬병에 의해 과실주변 잎들의 광합성속도가 8월 이후부터 감소되었기 때문이었다.
Kim, Na-Kyeong;Lee, Hyo-Jeong;Ryu, Tae-Ho;Cho, In-Sook;Ju, Ho-Jong;Jeong, Rae-Dong
식물병연구
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제27권2호
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pp.79-83
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2021
The aim of the present study was to develop a sensitive and specific detection method for the rapid detection of apple scar skin viroid (ASSVd) in apple leaves. The resulting reverse transcription recombinase polymerase amplification (RT-RPA) assay can be completed in 10 min at 42℃, is 10 times more sensitive than conventional reverse transcription polymerase chain reaction, and can specifically amplify ASSVd without any cross-reactivity with other common apple viruses, including apple stem grooving virus, apple stem pitting virus, and apple chlorotic leaf spot virus. The reliability of the RT-RPA assay was assessed, and the findings suggested that it can be successfully utilized to detect ASSVd in field-collected samples. The RT-RPA assay developed in the present study provides a potentially valuable means for improving the detection of ASSVd in viroid-free certification programs, especially in resource-limited conditions.
Apple scar skin viroid (ASSVd), Apple chlorotic leaf spot virus(ACLSV), Apple stem pitting virus (ASPV), Apple stem grooving virus (ASGV)는 사과를 감염시키는 대표적인 바이러스로, 이러한 4종 바이러스에 복합 감염된 사과 '홍로'의 동절기 가지의 휴면아(측아)로부터 다양한 크기 (0.4 mm ~ 1.2 mm)와 발달단계 (이하 Stage 1, Stage 2, Stage 3라 칭함)의 경정 및 측부 분열조직을 절취하여 BA 3.0 mg/L 와 IBA 0.1 mg/L가 혼합된 배지에 배양하여 캘러스를 형성시킨 후, 감염 바이러스바이러스의 제거유무를 조사하였다. 직경 10 mm이상 증식된 캘러스 31 계통을 RT-PCR 분석으로 제거효율을 알아 본 결과, ACLSV는 100%, ASSVd와 ASPV는 93.5%의 높은 제거 효율을 보인 반면, ASGV는 25.8%로 상대적으로 제거효율이 낮았다. 4종 바이러스가 동시에 모두 제거되는 경우는 Stage 1의 휴면아의 분열조직을 배양하였을 때만 가능하였는데, 그 이유는 ASGV가 이 시기의 배양에서 주로 제거되었기 때문으로, ASGV는 다른 바이러스와는 달리 분열조직의 발달단계가 큰 영향을 미치는 것으로 나타났다. 휴면아의 분열조직을 배양하여 바이러스를 제거한 예는 세계적으로 보고된 바가 없는 것으로서, 본 연구결과는 향 후 사과의 무병묘 생산에 매우 유용한 자료로 활용될 것이다.
사과의 영양진단에서 사과잎 분석을 신속히 하기 위한 방법을 모색하기 위해 생잎과 건조잎을 이용해 근적의 스펙트럼을 측정하고 이를 질소 함량과의 최적의 상관관계를 도출하기 위해 부분소자승(PLS)과 주성분회귀(PCR)과 같은 다변량 분석법을 이용하여 비파괴 검량식을 작성하였다. 또한 검량식 작성에서 비파괴 측정 정확도를 향상시키기 위하여 smoothing, mean normalization, multiplicative scatter correction (MSC). derivative 등의 다양한 데이터 전처리 조작을 수행하여 정확도 향상 가능성을 조사하였다. 사과 건조잎의 비파괴 측정 가능성을 조사한 결과 PLS-1 모델에서 Norris first derivate하였을 태 RMSEP가 $0.6999g\;kg^{-1}$ 로 가장 좋았으며, 생잎은 Savitzky-Golay first derivate하였을 때에 RMSEP 가 $1.202g\;kg^{-1}$으로 가장 좋았다. 건조잎의 PCR 모델은 mean normalization 처리 후 Savitzky-Golay first derivative하였을 때가 RMSEP 가 $0.553g\;kg^{-1}$, 이었으며 생잎에서도 RMSEP는 $1.047g\;kg^{-1}$로 나타났다. 이와 같은 견과로서 사과의 생잎과 건조잎의 분석이 근적외분석기술에 의해 가능할 것으로 판단된다.
1992년부터 2001년까지 10년 간 경북 사과주산지 4-6개 시군의 일반대목 사과원과 1999-2001년까지 3년 5-6개 시군의 M.9왜성대목 사과원에서 은무늬굴나방의 발생동향과 피해정도를 조사하였다. 1992년과 1993년의 발생과원율은 각각 10%와 25%, 피해엽율은 0.15%와 0.06%로 매우 경미하였다. 그러나, 1994년부터 2001년까지는 피해엽율이 급증하여 조사된 모든 일반대목 사과원에서 발생하였으며, 특히, 1996-1998년의 피해엽율이 6.28%-7.78%로 가장 높았다. M.9왜성대목 사과원에서는 3년 모두 발생과원율이 100%였으며, 누적피해엽율은 99년은 15.3%로 같은 해의 일반대목 사과원의 3.68%에 비해 높았으며, 2000년과 2001년은 통계적 유의성은 없었으나 M.9왜성대목 사과원의 발생밀도가 높았다. 일반대목 사과원의 월별 발생과원율과 피해엽율을 조사한 결과, 9월의 발생밀도가 가장 높았으며, M.9왜성대목 사과원에서는 통계적 유의성이 없었다. 국내에서 육성된 홍로. 감홍, 추광, 화홍 등 4개 품종과 후지의 은무늬굴나방에 의한 피해정도는 차이가 없었다. 이상의 결과로 보아 M.9왜성대목 사과원의 증가가 최근의 은무늬굴나방의 다발생과 관련이 클 것으로 판단된다.
Apple (Malus domestica) is one of the most economically important fruits in Korea. But virus infection has decreased sustainable production of apple and caused the serious problems such as yield loss and poor fruit quality. Virus or viroid infection including Apple chlorotic leaf spot virus (ACLSV), Apple stem pitting virus (ASPV), Apple stem grooving virus (ASGV), Apple mosaic virus (ApMV) and Apple scar skin viroid (ASSVd) has been also reported in Korea, furthermore, its damages and economic losses have increased constantly. In our research, we tried to survey virus infection for commercial nursery trees of major apple cultivars, especially dwarfing rootstocks 'M.9' and 'M.26' as well as scions. Trees were collected from 11 locations which have produced a great amount of apple nursery stocks in Korea. Infection degree was investigated in apple cultivars, 'Hongro' and 'Fuji' using RT-PCR method. In the scion of cultivar 'Hongro', infection ratio of ACLSV, ASPV and ASGV were 100%, 81.8% and 100% respectively. In the rootstock of cultivar 'Hongro', infection ratio of ACLSV, ASPV, ASGV and ApMV were 90.9%, 81.8%, 100% and 9.1% respectively. In the scion of cultivar 'Fuji', infection ratio of ACLSV, ASPV and ASGV were 81.8%, 90.9% and 100% respectively. In the rootstock of cultivar 'Fuji', infection ratio of ACLSV, ASPV, ASGV and ApMV were 81.8%, 90.9%, 100% and 9.1% respectively. Infection of ASSVd was not detected in both cultivars. From our results, it was found that most of apple rootstocks and scions had multiple infections by apple viruses which have caused economic damage in fruit production.
Apple stem grooving virus (ASGV), Apple chlorotic leaf spot virus (ACLSV), and Apple stem pitting virus (ASPV) have been known to induce top working disease causing economical damage in apple. Occurrences of these three viruses in pome fruit trees, including apple, have been reported around the world. The transmission of the three viruses was reported by grafting, and there was no report of transmission through mechanical contact, insect vector, or seed except some herbaceous hosts of ASGV. As RNA extraction methods for fruit trees, Reverse Transcriptase-Polymerase Chain Reaction (RT-PCR) and multiplex RT-PCR techniques have been improved for reliability and stability, and low titer viruses that could not be detected in the past have become detectable. We studied the seed transmission ability of three apple viruses through apple seedling diagnosis using RT-PCR. Nineteen seeds obtained from commercially grown apple were germinated and two of the resulting plants were ASGV positive. Seven clones of the amplified ASGV coat protein (CP) genes of these isolates were sequenced. Overall sequence identities were 99.84% (nucleotide) and 99.76% (amino acid). Presence of a previously unreported single nucleotide and amino acid variation conserved in all of these clones suggests a possible association with seed transmission of these 'S' isolates. A phylogenetic tree constructed using ASGV CP nucleotide sequences showed that isolate S sequences were grouped with Korean, Chinese, Indian isolates from apple and Indian isolates from kiwi.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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