2009년 4월 제주도의 운진항에서 채집한 해양 해면 Spirastrella abata와 Cinachyrella sp.의 공생 세균의 주요 군집구조를 16SrDNA-denaturing gradient gel electrophoresis (DGGE) 방법을 이용하여 비교 분석하였다. S. abata와 Cinachyrella sp.는 각각 7개와 8개의 DGGE 밴드를 나타내었으며 이들을 적출하여 염기서열을 분석한 결과, NCBI에 등록된 서열들과 92-100%의 유사도를 나타내었다. S. abata의 주요 공생세균은 Alphaproteobacteria와 Deltaproteobacteria에 속하였으며, Cinachyrella sp.의 경우 Alphaproteobacteria, Gammaproteobacteria와 Actinobacteria에 속하는 세균으로 구성되었다. 두 종의 해면에서 공통되는 공생세균 그룹은 Alphaproteobacteria였으며 이 세균 그룹은 두 종의 해면 모두에서 우점하였다. Deltaproteobacteria는 S. abata에서, Actinobacteria와 Gammaproteobacteria는 Cinachyrella sp.에서만 관찰되었다. 동일지역에서 채집한 서로 다른 두 종의 해면은 각각 다른 공생세균 군집구조를 나타내었다.
제주도에서 채집한 해양 해면 Halichondria panicea의 공생세균 군집구조를 배양에 의한 ARDRA와 비배양에 의한 DGGE 분석 방법에 의하여 조사하였다. 16S rRNA gene-ARDRA 분석을 위해 변형된 Zobell 배지와 Marine agar를 이용하여 120균주를 선별하고 제한효소, HaeIII와 MspI을 사용하여 ARDRA type을 구분하였다. ARDRA type으로부터 유래한 16S rRNA gene 염기서열 분석 결과, 알려진 세균 종과 96% 이상의 유사도를 나타내었으며 Alphaproteobacteria, Gammaproteobacteria, Bacteroidetes, Firmicutes 등 3문 4강이 관찰되었다. 그 중 Alphaproteobacteria가 우점하였다. 같은 해면, H. panicea의 DGGE 분석을 위해 total genomic DNA로부터 16S rRNA gene를 증폭하여 DGGE fingerprinting을 수행한 결과 14개의 밴드가 관찰되었다. 각 밴드의 16S rRNA gene 염기서열은 알려진 세균의 염기서열과 100%의 유사성을 나타내었으며 대부분의 염기서열은 uncultured bacteria에 속하였다. DGGE 분석으로부터 미생물의 군집은 Alphaproteobacteria, Gammaproteobacteria, Acidobacteria, Actinobacteira, Bacteroidetes, Cyanobacteria, Chloroflexi 등 6문 7강으로 나타났다. ARDRA와 DGGE 방법에 의해 Alphaproteobacteria, Gammaproteobacteria, Bacteroidetes가 공통적으로 발견되었으나 전체적인 공생세균의 군집구조는 분석방법에 따라 차이를 나타내었다. 배양에 의한 방법보다 비배양 방법에서 더 다양한 세균군집구조를 나타내었다.
비배양에 근거한 16S rDNA-DGGE fingerprinting 방법을 적용하여 공생세균 군집구조를 조사하였다. Zobell 배지와 천일염 배지를 사용하여 총 164균주를 선별하였다. 이들 균주로 부터 증폭한 16S rDNA를 제한효소 HaeIII와 MspI을 사용하여 절단한 후 각각의 다른 RFLP 패턴으로 구분하였다. RFLP패턴으로부터 유래한 16S rDNA의 염기서열 분석 결과, 알려진 염기서열들과 95% 이상의 유사도를 나타내었으며 Proteobacteria (Alphaproteobacteria, Gammaproteobacteria), Actinobacteria, Firmicutes, Bacteroidetes의 4개의 문이 나타났으며 우점 군집은 Alphaproteobacteria였다. 해면에서 분리한 total gDNA로 부터 증폭한 16S rDNA의 DGGE 분석 결과 5개의 DGGE band가 확인 되었고, 각각의 band의 염기서열 분석 결과 알려진 염기서열들과 96% 이상의 유사도를 나타내었으며 band로부터 밝혀진 모든 서열들은 배양되지 않은 세균 클론들과 높은 상동성을 나타내었다. DGGE에 의한 공생세균 군집은 Proteobacteria (Alphaproteobacteria, Gammaproteobacteria), Actinobacteria, Spirochetes, Chloroflexi로 4개의 문(phylum)으로 나타났다. Spirastrella abata의 공생세균 군집에 대한 RFLP와 DGGE 적용 결과, Alphaproteobacteria, Gammaproteobacteria, Actinobacteria의 공통 세균 그룹이 발견되었으나 전체적인 공생세균 군집구조는 분석 방법에 따른 차이를 나타내었다.
제주도 한라산에 위치한 국내 최대규모의 고산습지인 숨은물벵뒤 습지의 Alphaproteobacteria와 Gammaproteobacteria강에 속하는 세균 종의 다양성을 조사하였고, 신분류군 후보 균주 19종을 확보하였다. 신종후보 균주의 16S rRNA 유전자 염기서열을 분석하였을 때 표준균주와 98.7% 미만의 유사도를 보이는 균주들을 신종후보균주로 간주하였다. 총 19종의 세균이 Alphaproteobacteria와 Gammaproteobacteria 강에 속하는 신종후보 균주들로 발견되었다. Alphaproteobacteria 강에 속하는 균주들은 Sphingomonadaceae 과 Novosphingobium 속에 속하는 4종과 Rhizobiaceae 과 Rhizobium 속에 속하는 2종이 분리되었다. Gammaproteobacteria 강에 속하는 균주들은 Moraxellaceae 과 Acinetobacter 속에 속하는 2종, Pseudomonadaceae과 Pseudomonas 속에 속하는 3종, Enterobacteriaceae과의 Enterobacter 속에 속하는 1종, Erwinia 속의 2종, Leclercia 속의 1종, Rahnella 속의 1종, Serratia속의 1종, Yersinia 속의 2종이 분리되었다. 분리된 19개 후보신종에 대하여 배양학적 특징, 생리화학적 특징 및 지방산 분석 결과를 정리하였다.
울릉도 연안의 심해(1500 m)에 서식하는 미생물의 다양성을 조사하였다. Ultramembrane filter를 사용하여 해양미생물을 여과한 다음 미생물군집 DNA를 정제하여 16S rDNA를 증폭하였다. Pyrosequencing 방법으로 염기서열을 분석한 결과 총 13,029 reads를 얻었으며, 이중에 54.1%가 uncultured bacteria, 23.4%가 alphaproteobacteria, 22.3%가 gammaproteobacteria이었고 flavobacteria, actinobacteria, epsilonproteobacteria 등이 0.2%이내에서 분포하고 있었다. 울릉도 지역의 해양심층수에서 배양이 가능한 것으로 알려진 미생물로서는 alphaproteobacteria의 Rhodobacteraceae과 (family), gammaproteobacteria의 Alteromonadaceae, Halomonadaceae, Piscirickettsiaceae과가 주로 분포하였다.
Here we describe indigenous prokaryotic species in Korea, a total of 42 bacterial strains affiliated to the class Alphaproteobacteria isolated from various environmental samples: fermented vinegar, sea water, beach sand, fresh water, salt flats, moss, algae, activated sludge, and soil. From the high 16S rRNA gene sequence similarity (>98.7%) and formation of a robust phylogenetic clade with the closest species, it was determined that each strain belonged to predefined bacterial species. There is no official report that these 42 species included in Alphaproteobacteria in Korea: 15 species of 6 genera in the order Rhodospirillales, 12 species of 10 genera in the order Rhizobiales, 10 species of 8 genera in the order Rhodobacterales, 4 species of 4 genera in the order Sphingomonadales and 1 species of 1 genus in the order Caulobacterales. Gram reaction, colony and cell morphology, basic biochemical characteristics, isolation source, and strain IDs are also described in the species description section.
During a comprehensive investigation of indigenous prokaryotic species in Korea, 25 and 10 bacterial strains assigned to the classes Alphaproteobacteria and Betaproteobacteria, respectively, were isolated from diverse environmental habitats, including soil, mud, tidal field, sea water, sand, rusted iron, and leaf. Based on their high 16S rRNA gene sequence similarities (>98.7%) and the formation of robust phylogenetic clades with type species, each strain was assigned to an independent and predefined bacterial species. Since there were no published or official reports regarding these 35 isolates in Korea, they - 25 species of 14 families in the 5 orders of Alphaproteobacteria and 10 species of 3 families in the two orders of Betaproteobacteria - have been reported as unrecorded species in Korea. In addition, Gram reaction, colony and cell morphology, basic biochemical characteristic, isolation source, and strain ID of each species are also described in the species description sections.
To study the biodiversity of bacterial species, here we report indigenous prokaryotic species of Korea. A total of 23 bacterial strains affiliated to the class Alphaproteobacteria were isolated from various environmental sources including seaweeds, seawater, fresh water, wetland/marsh, tidal sediment, plant roots, sewage and soil. Considering higher than 98.8% 16S rRNA gene sequence similarities and formation of a well-defined phylogenetic clade with named species, it was confirmed that each strain belonged to the predefined bacterial species of the class Alphaproteobacteria. There is no official report of these 23 species in Korea; 20 species of 16 genera (Mameliella, Yangia, Paracoccus, Ruegeria, Loktanella, Phaeobacter, Dinoroseobacter, Tropicimonas, Lutimaribacter, Litoreibacter, Sulfitobacter, Roseivivax, Labrenzia, Hyphomonas, Maricaulis, Thalassospira) in the order Rhodobacterales and 3 species of a single genus (Brevundimonas) in the order Caulobacterales. Gram-staining, cell morphology, basic biochemical characteristics, isolation sources, optimum temperature, growth media, and strain IDs are detailed in the species description as well as Table 1.
해양 해면 Asteropus simplex를 제주도에서 채집하여 배양에 의한 RFLP와 비배양에 의한 DGGE 분석 방법에 의해 세균군집 구조를 조사하였다. 16S rDNA-RFLP 분석을 위해 변형된 Zobell 배지와 MA를 이용하여 120균주를 선별하고 제한효소, HaeIII와 MspI을 사용하여 각각의 다른 RFLP 패턴으로 구분하였다. RFLP 패턴으로부터 유래한 16S rDNA 염기서열 분석결과, 알려진 세균 종과 94% 이상의 유사도를 나타내었으며 Alphaproteobacteria, Gammaproteobacteria, Actinobacteria, Bacteroidetes, Firmicutes, 5개의 문이 관찰되었다. 그 중 Gammaproteobacteria가 우점하였다. 같은 해면, A. simplex의 DGGE 분석을 위해 total genomic DNA로부터 16S rDNA를 증폭하여 DGGE fingerprinting을 수행한 결과 12개의 서로 다른 밴드가 관찰되었다. 각 밴드의 16S rDNA 염기서열은 알려진 세균의 염기서열과 90% 이상의 유사성을 나타내었으며 대부분의 염기서열은 uncultured bacteria에 속하였다. DGGE 분석으로부터 미생물의 군집은 Alphaproteobacteria, Betaproteobacteria, Gammaproteobacteria, Deltaproteobacteria, Actinobacteria, Chloroflexi, Nitrospira, 7개의 문으로 나타났다. RFLP와 DGGE 방법에 의해 Alphaproteobacteria, Gammaproteobacteria, Actinobacteria가 공통적으로 발견되었으나 전체적인 공생세균의 군집구조는 분석방법에 따른 차이를 나타내었다. 배양에 의한 방법보다 비배양 방법에서 더 다양한 세균군집구조를 나타내었다.
During an investigation of the biodiversity of bacterial species in Korea, we discovered many indigenous prokaryotic species. A total of 39 bacterial strains in the class Alphaproteobacteria were isolated from various environmental samples collected from marine organisms, sea water, fresh water, tap water, mud flats, activated sludge, mineral water, tidal flats, soil and decayed plants. From the high 16S rRNA gene sequence similarity (>98.7%) and formation of robust phylogenetic clades with the most closely related species, it was determined that each strain belonged to each independent and predefined bacterial species. There is no official report that any of these 39 Alphaproteobacteria species have been described in Korea. Specifically, 18 species in 11 genera in the order Sphingomonadales, 11 species in 10 genera in the order Rhizobiales, two species in two genera in the order Caulobacterales, six species in six genera in the order Rhodobacterales and two species in two genera in the order Rhodospirillales were found in Korea. Gram reaction, colony and cell morphology, basic biochemical characteristics, isolation source, and strain IDs are described in the species description section.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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