• Bulletin of the Korean Chemical Society
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• 제7권2호
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• pp.113-116
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• 1986

Spectral behaviors of cationic dyes, methylene blue(MB) and acridine orange(AO), with varying concentrations of sodium dodecylsulfate(SDS) were studied. At low concentration of SDS(<1mM), these dyes formed insoluble dye-surfactant aggregates. When [SDS] is 4-5 mM, the aggregates were dissolved into mixed micelles of constant composition. At higher concentration of [SDS], the composition of mixed micelles were changed with [SDS], resulting only monomeric form of dyes in micelles. AO-SDS system showed greater aggregating and less dissolving properties, and weaker effect of salt than MB-SDS system did. These were attributed to the greater hydrophobic nature of the former dye. The monomer/dimer ratios of dyes in mixed micelles at given [SDS] were greatest at $20^{\circ}C$, reflecting the dependency of CMC of the surfactant on temperature.

• The Korean Journal of Physiology and Pharmacology
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• 제19권6호
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• pp.507-514
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• 2015

Nitric oxide (NO) is important in the regulation of bone remodeling, whereas high concentration of NO promotes cell death of osteoblast. However, it is not clear yet whether NO-induced autophagy is implicated in cell death or survival of osteoblast. The present study is aimed to examine the role of NO-induced autophagy in the MC3T3-E1 cells and their underlying molecular mechanism. The effect of sodium nitroprusside (SNP), an NO donor, on the cytotoxicity of the MC3T3-E1 cells was determined by MTT assay and expression of apoptosis or autophagy associated molecules was evaluated by western blot analysis. The morphological observation of autophagy and apoptosis by acridine orange stain and TUNEL assay were performed, respectively. Treatment of SNP decreased the cell viability of the MC3T3-E1 cells in dose- and time-dependent manner. SNP increased expression levels of p62, ATG7, Beclin-1 and LC3-II, as typical autophagic markers and augmented acidic autophagolysosomal vacuoles, detected by acridine orange staining. However, pretreatment with 3-methyladenine (3MA), the specific inhibitor for autophagy, decreased cell viability, whereas increased the cleavage of PARP and caspase-3 in the SNP-treated MC3T3-E1 cells. AMP-activated protein kinase (AMPK), a major autophagy regulatory kinase, was activated in SNP-treated MC3T3-E1 cells. In addition, pretreatment with compound C, an inhibitor of AMPK, decreased cell viability, whereas increased the number of apoptotic cells, cleaved PARP and caspase-3 levels compared to those of SNP-treated MC3T3-E1 cells. Taken together, it is speculated that NO-induced autophagy functions as a survival mechanism via AMPK activation against apoptosis in the MC3T3-E1 cells.

• 생명과학회지
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• 제25권11호
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• pp.1230-1234
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• 2015

GATA binding protein 6 (GATA6)는 초기 배반포 단계에서 발현이 시작되어, 심장, 췌장, 장 등의 분화와 발달에 중요한 유전자 발현을 조절하는 전사인자이다. 본 연구에서는 GATA6의 세포 분화와 개체 발달 과정에서의 역할을 마우스 배아줄기세포와 zebrafish를 이용하여 확인하였다. 먼저, 마우스 배아줄기세포를 박동하는 pacemaker 심근세포로 분화 유도하였다. RT-PCR을 실시하여 심근세포 분화 과정에서 GATA6 유전자 발현 변화를 확인한 결과, Gata6의 발현이 분화 4일째부터 증가함을 확인하였다. GATA6 유전자의 발현 증가는 심장 발달에 필수적인 전사인자인 NK2 homeobox 5 (Nkx2.5)나 myocyte enhancer factor 2C (MEF2C)의 발현 증가에 앞서 나타났다. GATA6 유전자가 발달 과정에 미치는 영향을 확인하기 위하여 GATA6의 morpholino를 zebrafish 배아에 microinjection하여 발생 변화를 관찰하였다. GATA6의 발현을 knockdown시킨 zebrafish의 심장은 크기가 감소하였고, 심박동률 또한 감소하였다. 한편, 뇌에서는 전체적인 뇌 퇴행이 관찰되었는데, acridine orange로 염색 한 결과, 뇌 전체에서의 세포사멸의 증가를 나타내었다. 흥미롭게도, GATA6의 발현 감소는 초기 bud 단계에서는 오히려 세포사멸을 감소시켰다. 본 연구는 심장과 뇌 발달에서의 GATA6 유전자의 중요성을 시사한다.

• 한국발생생물학회지:발생과생식
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• 제2권1호
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• pp.1-8
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• 1998

본 연구에서는 자연세포사 (apoptosis)를 유발시키는 것으로 알려진 ceramide를 배양중인 생쥐 과립세포에 처리한 뒤 형광염색, in-situ 3'-end labeling(ISEL), 그리고 flow cytometry 기법을 이용하여, 자연세포사 및 세포주기에 미치는 ceramide의 영향을 조사하였다. Ceramide를 처리하지 않은 대조군에 비하여, ceramide를 처리한 실험군에서 세로의 생존율은 농도에 비레하여 유의하게 감소하였다. 또한 acridine orange에 의한 형광염색 결과, 자연세포사의 양상을 보이는 핵을 갖는 세포의 수가 ceramide의 농도가 증가함에 따라 현저하게 증가되었다. 또한 ISEL을 실시해 본 결과, 자연세포사가 ceramide의 처리농도가 증가됨에 따라 점차적으로 증가되었다. 한편, ceramide를 처리한 과립세포의 세포주기 분석을 위한 flow cytometry 결과도 자연세포사가 일어난 $A_{0}$기에 있는 세포들의 비율이 대조군에 비하여 농도 의존적으로 증가하였으며, $G_{0}$/$G_{1}$ 기에 있는 세포들이 비율은 현저하게 감소됨을 관찰할 수 있었다. 위의 결과로 보아 ceramide는 생쥐 과립세포의 $G_{0}$/$G_{1}$ 기에 특이저긍로 자\ulcorner하여 자연세포사를 유발하며, 난포의 폐쇄시 과립세포의 자연세포사를 유발할 것으로 사료된다.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제26권4호
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• pp.229-238
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• 1988

HL-60세포에서 Toxoplasma gondii의 in vitro배양과 HL-60세포를 DMSO로 처리하여 과립세포로 분화시킨 세포에서 Toxoplasma에 대한 세포매개성 면역 기능을 검토하였다. 먼저, HL-60 세포를 여러 농도의 DMSO로 처리하였는데, 1.3%(V/V)로 3일간 처리하였을 때, HL-60 세포 의 적정 분화가 이루어졌다. 분화의 정도는 형태적, 생리적, 및 기능적 관점에서 검사되었는데, DMSO를 처리한 경우, 3H-thymidine의 흡입이 감소하는 것으로 보아 DNA 합성이 억제됨을 알 수 있었으며, 기능적으로는 주화성 물질인 FMLP에 대해 이동하는 성질을 보였으며, 형태적으로는 핵1세포질의 비가 큰 promyelocyte에서 작은 비를 갖는 과립 세포로 변화하여 분화를 입증하였다. 이후, HL-60 세포나 DMSO로 분화를 유도한 HL-60 세포와 Toxoplasma를 같이 배양하면서 이들의 관계를 관찰하였다. Lysosome에 선택적으로 흡입되는 형광 물질(acridine orange)로 전처리한 표본은 형광현미경하에 서 관찰하였으며, 다른 표본은 Giemsa로 염색하여 광학 현미경하에서 관찰하여 비교하였다. HL-60 세포에서는 72시간의 배양으로 Toxoplasma가 세포질내에서 증식하여 rosette를 형성하였으며, DMSO로 분화시킨 HL-60 세 포에서는 배양 초기 1시간째에 phagocytosis가 일어났으며 이후 세포내 소화가 이루어져 72시간째에는 lysosome이 원상태로 되돌아오는 것이 관찰되었다. 이상의 결과들로 볼 때, Toxoplnsma의 숙주 세포내에서의 기생 혹은 면역 세포에 의한 감수성에 phagosome 과 Iysosome의 융합이 결정적인 인자임을 알 수 있었으며, 아울러 HL-60 세포에서의 Toxoplasma의 증식 가능성과 DMSO로 분화시킨 HL-60 세포의 Toxoplasma 파괴 효과가 원충 기생충과 숙주의 상호 관계를 규명하는 좋은 모델임을 제시하였다.

• 미생물학회지
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• 제52권3호
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• pp.313-318
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• 2016

Viable but nonculturable (VBNC) 상태에 들어간 세균은 일반적인 증균 배지에서는 집락을 형성하지 않지만, 죽은 것이 아니라 낮은 대사활성상태로 유지되고 있다. 본 연구에서는 $10^{\circ}C$의 저온 빈영양 해수에서 Edwardsiella tarda를 VBNC 상태로 유도한 후, 해수 온도를 10에서 $25^{\circ}C$로 상승시킬 때 첨가된 유기물의 종류에 따라 VBNC 상태인 균의 소생 가능성을 알아보고자 하였다. E. tarda가 접종된 빈영양 해수 microcosm을 $10^{\circ}C$에 유지하였을 때 VBNC 유도 기간은 42-84일까지 다양하였다. 유도 기간 동안 acridine orange direct counting법으로 계수한 총 균수는 초기 접종 농도인 약 $10^8cells/ml$로 일정하였으며, direct viable counting법으로 계수한 생존 균수는 약 $10^4cells/ml$로 감소되었다. VBNC E. tarda에 효모추출물, 넙치근육추출물 그리고 혈청을 첨가하여 $25^{\circ}C$에서 소생을 유도한 결과 전체 시료 개수의 37%, 23%, 37%에서 각각 소생이 확인되었으며 소생된 E. tarda의 특성은 VBNC 유도 전 원래의 세균과 일치하였다. 소생된 E. tarda를 넙치(Paralichthys olivaceus)에 복강 주사 하였을 때 접종 후 5일 이내에 시험어가 모두 사망함으로써 VBNC 상태의 E. tarda가 독력을 유지하고 있었음을 시사하였다. 그러므로 E. tarda는 우리나라 남해 연안 겨울의 저온 빈영양 해수에서 VBNC 상태로 유도되었다가 여름과 가을 시기에 수온 상승과 더불어 소생되어 양식 넙치에 지속적인 발병 요인이 되고 있는 것으로 생각된다.

• Tuberculosis and Respiratory Diseases
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• 제69권2호
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• pp.81-94
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• 2010

Background: Autophagy is an important adaptive mechanism in normal development and in response to changing environmental stimuli in cancer. Previous papers have reported that different types of cancer underwent autophagy to obtain amino acids as energy source of dying cells in nutrient-deprived conditions. However, whether or not autophagy in the process of lung cancer causes death or survival is controversial. Therefore in this study, we investigated whether nutrient deprivation induces autophagy in human H460 lung cancer cells. Methods: H460, lung cancer cells were incubated in RPMI 1640 medium, and the starved media, which are BME and RPMI media without serum, including 2-deoxyl-D-glucose according to time dependence. To evaluate the viability and find out the mechanism of cell death under nutrient-deprived conditions, the MTT assay and flow cytometry were done and analyzed the apoptotic and autophagic related proteins. It is also measured the development of acidic vascular organelles by acridine orange. Results: The nutrient-deprived cancer cell is relatively sensitive to cell death rather than normal nutrition. Massive cytoplasmic vacuolization was seen under nutrient-deprived conditions. Autophagic vacuoles were visible at approximately 12 h and as time ran out, vacuoles became larger and denser with the increasing number of vacuoles. In addition, the proportion of acridine orange stain-positive cells increased according to time dependence. Localization of GFP-LC3 in cytoplasm and expression of LC-3II and Beclin 1 were increased according to time dependence on nutrient-deprived cells. Conclusion: Nutrient deprivation induces cell death through autophagy in H460 lung cancer cells.

• 생명과학회지
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• 제15권4호
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• pp.626-632
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• 2005

폴리아민은 모든 진핵세포에서 발견되는 다가 양이온성의 저분자 물질이며 세포성장에 필수적인 것으로 알려져 있다. 본 논문에서는 폴리아민의 역할 중에서 산화적인 스트레스에 대한 세포보호 효과를 연구하였다. 쥐의 간세포주인 $Ac_2F$에 산화 스트레스를 유발하기 위하여 2,2'-azobis(2-amidinopropane)dehydrochloride (AAPH)를 처리하였을 때, 세포증식은 농도 의존적으로 감소하였다. 배지에 폴리아민을 첨가하였을 때 세포성장은 농도 의존적으로 증가하였으며 ROS 발생은 현저히 감소하였다. 폴리아민 가운데 특히 spermidine과 spermine이 뚜렷한 세포증식효과를 보였다. Spermine의 경우, $20{\mu}M$농도에서 AAPH에 의해 유도된 ROS발생을 $45\%$나 감소시켰다. 산화 스트레스에 관여하는 효소들 가운데 주된 효소인 superoxide dismutate (SOD)와 catalase (CAT)의 세포 내 단백질을 Western blotting으로 조사한 결과, AAPH는 이 두 가지 단백질의 생성을 억제한 것으로 나타났다. 그러나 spermine을 처리하였을 때 두 단백질의 생산은 모두 정상적으로 회복이 되었다. 또한 세포주기의 중요한 조절 단백질인 cyclin E 역시 AAPH에 의하여 생성이 억제되었다. 이는 AAPH에 의하여 생성된 ROS가 세포주기의 S phase의 진행을 억제한 것으로 생각된다. AAPH에 의한 cyclin E의 억제는 spermine에 의하여 정상적으로 회복되었다. 위와 같은 Spermine의 항산화 효과는 ethidium bromide와 acridine orange를 이용하여 형태학적으로도 증명되었다.

• 대한수의사회지
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• 제18권4호
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• pp.52-61
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• 1982

이 논문은 우리나라에서 지금까지 응용한 바있는 Toxoplasma병의 진단에 관한 시험연구의 성적을 기술하였다. 가. 우리나라에서 1957년 돈으로부터 Toxoplasma 원충을 분류한 것이 최초의 보고였다. 나. Toxoplasma병의 사후진단을 하기 위하여 동물접종시험 (1957), 조직배양시험 (1961), Acridine orange 염색법(1974) 그리고 직접형광항체법(1974)을 이용하였다. 다. Toxoplasma병의 생전진단을 하기 위하여 보체결합조지반응시험(1965), 색소시험(1965), 적혈구응집반응시험(1972) 그리고 피내반응시험(1972)을 응용하였다. 라. 야외돈에 대한 항체보유율 조사성적은 보체결합조지반응시험(1965)에서 $13.4\%$ 적혈구응집반응시험(1972)에서 $25.3\%$ 그리고 피내반응시험(1972)에서 $5.3\%$였으며 점차적 증가하는 경향을 보이고 있다. 마. Toxoplasma병에 대한 방역대책의 일단으로서 본병의 신속 정확한 진단을 하기 위하여 가축위생연구소에서는 매년 생산하는 피내반응진단액은 동물검역소에 그리고 직접형광항체진단액은 각도 가축위생시험소에 공급하고 있다.

• Journal of Microbiology
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• 제45권2호
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• pp.171-174
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• 2007

The growth stimulation of wild plants by several bacterial species showing plant growth-promoting capabilities was examined in a barren lakeside area at Lake Paro, Korea. Microbial numbers and activities in the field soil were monitored for 73 days after inoculation of the bacteria. The acridine orange direct counts for the total soil bacterial populations ranged between $2.0-2.3{\times}10^{9}\;cells/g$ soil and $1.4-1.8{\times}10^{9}\;cells/g$ soil in the inoculated and uninoculated soils, respectively. The numbers of Pseudomonas spp., which is known as a typical plant growth-promoting rhizobacteria, and the total microbial activity were higher in the inoculated soil compared to those in the uninoculated soil. The average shoot and root lengths of the wild plants grown in the inoculated soil were 17.3 cm and 12.4 cm, respectively, and longer than those of 11.4 cm and 8.5 cm in the uninoculated soil. The total dry weight of the harvested wild plants was also higher in the inoculated soil (42.0 g) compared to the uninoculated soil (35.1 g). The plant growth-promoting capabilities of the inoculated bacteria may be used for the rapid revegetation of barren or disturbed land, and as biofertilizer in agriculture.