Kim, Wan-Gyu;Lee, Byung-Dae;Cho, Weong-Dae;Sung, Jae-Mo
The Plant Pathology Journal
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제18권3호
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pp.156-160
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2002
Cymbidium orchids with blight and rot symptoms were collected, and a total of 63 isolates of Fusarium app. was obtained from pseudobulbs, roots, and leaves of the diseased plants. The isolates were identified based on their morphological characteristics. Out of the 63 isolates of Fusatium sup., 51 isolates were identified as F. oxysporum, 10 isolates as F. solani, and the rest as F. proliferatum. F. oxysporum was isolated from all the Cymbidium spp., while F. solani and F. proliferatum were isolated only from Cymbidium ensifolium and C. ginatum, respectively. Isolates of the three Fusarium spp. were tested for pathogenicity to their hosts by artificial inoculation. The strongly pathogenic isolates of Fusarium spp. induced severe dry rot of pseudobulbs and roots of the host plants. The symptoms progressed up to the basal part of the leaves, which later caused blight of the entire plant. The dry root symptoms induced on the plants by artificial inoculation with the isolates of Fusarium app. were similar to those observed in the growers'greenhouses. This is the first report of dry rot of Cymbidium spp. caused by F. oxysporum, F. solani, and F. proliferatum in Korea.
To illustrate the action mechanism of pencycuron on Rhizoctonia solani, two experiments were conducted including the comparison of amino acids of $\beta$-tubulin between R-C (sensitive isolate) and Rh-131 (non-sensitive isolate), and the inhibitory effect of pencycuron on tubulin assembly in vitro. Both $\beta$-tubulin genes of R-C and Rh-131 proved to have 1,582 nucleotides encoding a protein of 445 amino acids, showing 98% homology in amino acid sequences between them. It was found that codons at 103, 236, and 267 for lysine (AGG), valine (GTC) and isoleucine (ATT) in R-C were replaced by codons for methionine (ATG), isoleucine (ATT) and methionine (ATG) in Rh-131, respectively. No inhibitory effect of pencycuron on the tubulin assembly was observed. It suggests that pencycuron may have no direct inhibitory effects on the assembly of tubulin at least in vitro.
In order to find an environment-friendly method to suppress astragal stem rot caused by the isolates of Rhizoctonia solani AG 1 and AG 4, we tested an antagonistic fungus Gliocladium virens G1 was evaluated as a biocontrol agent and estimated inorganic compounds and organic materials were tested for their effect of the disease suppression. G. virens G1 effectively inhibited mycelial growth in a dual culture and caused mycelial lysis in the culture filtrate. No adverse effect was observed when examined for seed germination and seedling growth. Promoted seedling growth was observed with the seed treatment. Seeds of astragal plant were germinated higher in the sterile soil than the natural soil. Of 14 inorganics tested, alum, aluminum sulfate and calcium oxide significantly suppressed the mycelial growth and sclerotial germination. Milled pine bark and oak sawdust also suppressed the mycelial growth. Soil amended with 1% of G. virens G1 composted with pine bark (w/v) significantly controlled astragal stem rot in the glasshouse experiments.
Tolclofos-methyl applied as seed dipping at 1,000 ppm for 3 hrs before sowing and soil drenching at the rate of 300 g ai./10 a in the middle of April protected emerging seedlings of Panax ginseng from damping-off caused by Rhiiutonia solani(AG2-1) in Yangjik Soil artificially infested with the pathogen. Germination rates with tolclofos-methyl, pencycuron, and control were 53.7%, 45.8%, and 7.5%, respectively, while the rate of the seeds at non-infested soil was 62.6%. The effectiveness of Tolclofos-methyl against the pathogen in the soil lasted upto 32 days in vitro. However, the transpiratio of ginseng seedlings increased greatly with chemical treatment, showing 0.02, 0.12, and 0.24 m1/cm2 leaf area/day at 0, 1,2, and 4 ppm a.i. of the fungicide, respectively.
몇 년동안 게껍질이 풍부하게 있었던 밭토양에서 강한 키틴분해능력을 가진 Trichoderma 곰팡이를 분리하였다. 분리된 곰팡이의 5.8S rRNA, partial 18S, 28S rRNA genes, ITS1, ITS2 sequence 분석과 형태학적 특징을 살펴본 결과 Trichoderma asperellum으로 동정되었고, 이를 Trichoderma asperellum T-5 (TaT-5)로 명명하였다. 이 곰팡이는 chitianse와 ${\beta}$-1,3-glucanase같은 lytic enzyme을 분비하며, 키틴배지 상에서 6가지의 항 곰팡이성 물질을 생산했다. R. solani가 원인인 오이의 모잘록병에 대해 TaT 5의 방제효과를 보기 위해서 TaT-5 배양액(TA), chitin medium(CM), 증류수(DW)를 씨를 심은 후 10일 째에 각 pot에 관주했다. 그리고 관주 1주일 후에 R. solani의 균사를 갈아서 각 pot에 주었다. 실험기간 동안에 오이의 지상부와 지하부 생체중은 다른 처리구에 비하여 TA 처리구가 더 많이 증가하였다. 오이 잎에서 PR-protein (chitianse, ${\beta}$-1,3-glucanase) 활성은 R. solani 감염 후 CM과 DW에서 증가를 보였고, TA 처리구에서는 증가하다가 감소하는 경향을 보였다. 뿌리에서는 모든 처리구가 감소하는 경향을 보였지만 TA 처리구가 CM과 DW 처리구보다 감소하는 정도가 적었다. 오이의 잎과 뿌리에서 lignification related enzyme(POD, PPO, PAL)활성은 R. solani 감염 초기에는 증가하다가 점점 감소하는 경향을 보였다. 이러한 결과들은 TaT-5에 의하여 생산된 lytic enzymes와 항 곰팡이성 물질들이 오이에 R. solani의 공격을 줄여준다고 생각된다.
토양으로부터 분리한 380개체의 균주 중 Fusarium solani에 대해 길항능력이 있는 방선균 및 세균 42개 균주로부터 길항작용이 큰 균주로 CHA 1과 5-PFHR 6을 공시하여 동정한 결과 각각 Promicromonospora sp.와 Pseudomonas pseudoalcaligenes로 동정되었다. PDA 평판배지상에서 두 균주는 모두 F. solani의 저해작용으로 균사의 길이 생장억제, 비정상적인 균사의 분지, 세포벽 분해에 의한 돌기형성 등이 관찰되었다. F. solani 포자발아에 미치는 길항균주의 배양여과액의 작용으로 감자즙액 배지나 nutrient broth에 배양한 여과액은 포자발아 억제력이 높아 14.3%의 낮은 발아율을 보였으며, 토양침출액 단독 또는 두 영양배지에 토양침출액을 첨가하여 준비한 배양 여과액에서의 발아율은 85% 이상으로 포자발아가 촉진되었으나 S-PFHR 6의 경우 두 영양배지에 소량의 토양침출액을 첨가한 배앙여과액에서 4%의 발아율을 보였다. 자연토양에서 대형포자는 19.4%, 후막포자는 17.7%가 발아하였으나 증기살균 토양에서의 발아율은 79.7% 이상으로 증가하였다. 자연토양에 공시길항균 CHA 1과 S-PFHR 6의 균체를 처리하면 토양 정균력이 증가되어 F. solani의 대형 포자 발아율은 각 처리구에서 각각 14.7%, 11.7%로 감소하였다. 길항균을 처리한 토양에 glucose와 asparagine을 처리하면 토양의 정균력이 점차 해소되어 대형포자의 발아율은 48.0% 이상으로 증가하였다. 공시균주의 2차 대사산물에 의한 길항작용으로 두 균주의 배양여과액을 토양에 처리한 경우 CHA 1의 배앙여과액을 처리한 토양에서의 F. solani 대형포자의 발아율은 9.3%, 5-PFHR 6 처리구에서의 발아율은 38.0%가 되었다. F. solani의 후막포자는 공시길한균주의 균체나 배양여과액 처리구에서의 발아율이 자연토양에서의 발아율보다 낮았으며 이러한 현상은 영앙원을 첨가해 주어도 변하지 않았다.
Rhizoctonia solani의 종내 그룹의 분류에는 균사융합군과 배양형태가 많이 이용되고 있으며, 이미 20종 이상의 R. solani가 생태학적, 형태학적, 효소학적, hyphal anastomosis 등에 의해 이미 구분되어졌다. Anastomosis group은 R. solani를 분리하는데 유용하지만 R. solani의 생물학적과 병리학적 연구를 위한 유전적 특성과 동정의 직접적인 방법이 요구되어진다. RAPD는 특별한 DNA 절편을 증폭하고 이를 genetic mapping, identification of isolates에 유용하게 적용될 수 있으며, 또한 genetic variation 조사에도 사용될 수 있다. Dendrogram을 작성한 결과 크게 5 group으로 나뉘어졌고, 5개의 group은 AG group의 subgroup과 동일하게 나뉘어졌다. AG group에 구분되지 않은 species들도 RAPD결과 AG tester들과 grouping 되어졌다. RS-1은 AG-5 group에 속하며, RS-4, RS-14, RS-17, RS-16은 AG-2-2(III B)에 속하였다. RS-13은 AG-4에 속하였으며, RS-8과 RS-10은 AG-1(I B)에, RS-7과 RS-21은 AG-2-2(IV)에 속하였다. RS-19는 AG-1-1(I C)에 속하고, RS-3, RS-5, RS-18, RS-6, RS-15는 AG-1에 속하였다. RAPD 결과 AG group의 subgroup간의 차이를 볼 수 있었고, 이에 AG group 되어 있지 않은 species의 AG grouping이 이루어졌다. 또한 subgroup 간의 유전적 차이를 확인 할 수 있는 marker를 개발하거나 subgroup의 특별한 primer를 제작하는 SCAs기법을 이용하여 식물체 병반 또는 토양에서 분리된 R. solani를 간이 동정에 이용할 수 있을 것으로 기대한다.
인삼병원균(人蔘病原菌) 억제토양(抑制土壤)으로부터 110종(種)의 방선균(放線菌)을 분리(分離)하여 인삼근부(人蔘根腐) 병원균(病原菌)인 Fusarium solani와 Cylindrocapon destructans에 길항효과(拮抗?果)를 나타내는 3종(種)의 방선균(放線菌)이 형태적 배양적 생리적인 특정에 의거하여 각각 분류동정(分類同定)되었다. 포자사슬의 모양은 강화 6-2(K 6-2) 가 감긴형태 (Spira)였고, 서울 2-1(S 2-1)은 고리형태(Retinaculum-apertum)였으며, 양주 2-2(Y 2-2)는 꾸불꾸불한 형태(Rectus-flexibi-lis)였다. 포자벽 표면의 모양은 강화 6-2(K 6-2)에 서는 바늘모양의 형태(Spiny)인 반면, 서울 2-lCS 2- 1)과 양주 2-2(Y 2-2)에서는 모두 매끄러운 형태(Smooth)였으며, 기생균사체의 색깔은 모두 회색(灰色)계통이었다. 따라서, 강화 6-2(K 6-2), 서울2-lCS 2- 1), 양주 2-2(Y 2-2)는 Streptomyces variabilis, Stre-ptomyces virginiae, Streptomyces griseolus로 각각 분류동정(分類同定)되었다 .
잔디병 유발균 Rhizoctonia solani AGII-II에 대한 강한 항진균 활성을 가지는 균주를 토양에서 분리 동정하고 최적 배양조건을 확립하였다. 분리된 균주를 165 rDNA sequence로 동정한 결과 Bacillus sp.로 Bacillus sp. FF-9로 명명하였다. Bacillus sp. FF-9 균체의 생육은 LB배지를 사용하여 $30^{\circ}C$에서 24시간 진탕배양한 결과 6시간 이후부터 급격히 증가하여 12시간째 가장 높은 생육을 나타내었다. 피검균인 Rhizoctonia solani AGII-II에 대한 최대 항진균 활성은 18시간째에 나타났으며, 최적 온도는 $30^{\circ}C$, 최적 pH는 8.0에서 가장 높은 항진균 활성을 나타내었다. 탄소원과 질소원 실험에서는 1% lactose와 1% yeast extract에서 높은 항진균 활성을 나타내었고, 미량원소 첨가에 따른 항진균 활성은 0.15% $K_2HPO_4$에서 가장 높은 항진균 활성을 나타내었다.
살균제와 목초액을 혼용하여 우리나라 골프장의 한국잔디에 가장 문제가 되는 라지패취 병에 대한 방제효과를 검정하였다. 목초액 500, 1000배액 단독처리 시 라지패취병이 발병하는 것으로 보아 목초액 단독 처리는 라지패취 발병을 억제시키지 않았다. 살균제와 목초액 혼용처리 시에 있어서 잔디의 라지패취 병은 목초액을 혼용함으로써 Pencycuron 과 tebuconazol에서 좋은 효과가 나타났으며, 라지패취병 방제에서 Pencycuron과 tebuconazol과 목초액을 혼용 하였을 때 농약을 $50\%$ 감량하는 효과가 있는 것으로 나타났다. 목초액 혼용 농도는 500배액이나 1000배 액에서 비슷하게 나타났다 엽폭, 엽장, 건물 중 모두에서 목초액 500, 1000배액 희석처리 구의 잔디가 목초액 무처리구에 비해 증가하는 효과가 있었다. 따라서 잔디에 발생하는 라지패취병 방제시 화학약제와 목초액을 혼용하여 살포하면 농약사용량을 $50\%$ 감량하여도 기준시용 처리구와 효과가 비슷하게 나타나 목초액의 이용가능성이 확인되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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