• KSBB Journal
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• 제25권2호
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• pp.142-154
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• 2010

Inonotus obliquus 균사체의 액상배양을 통한 항당뇨효능의 단백다당체 대량생산 배양공정을 개발하기 위한 첫 단계로 고생산성 균주의 개발을 신속하게 수행하기 위한 방법을 개발하였다. I. obliquus는 균사체로 성장할 때 포자를 형성하지 못하므로 단일 세포를 획득하기 위해서는 원형질체들을 회수하여 이로부터 성장 능력과 단백다당체의 생산성이 높은 우량균주를 선별하여야 한다. 본 연구에서는 이러한 균주개량 공정 중 특별히 장기간의 배양 시간이 요구되어 신속한 균주개발 시 가장 큰 장애 요인으로 작용하는 고체성장배양 단계의 문제점을 극복하고자, 고체배양 환경의 최적화에 대한 연구를 중점적으로 수행하였다. 고체성장배양 시 균사체 성장에 효능이 탁월한 배지성분을 선별하기 위해 우선 Plackett-Burman design 실험을 통해서 유의성 높은 배지성분을 찾아내었고, 이에 근거한 부분요인설계법 fractional factorial design, FFD) 실험을 통해 배지성분 상호간의 관계를 분석 할 수 있었다. 또한 이 FFD 실험결과에 근거해서 설계한 최급상승법 (steepest ascent method, SAM) 실험방법을 적용한 결과, 고체성장배양 시 균사체 성장환의 직경이 기존의 MA 배지와 비교해서 약 41% 증가했을 뿐만 아니라 균사체의 밀도도 크게 향상된 배지조성을 확립 할 수 있었다. 또한 SAM 연구결과를 바탕으로 최적의 배지조성을 확립하고자 각 배지성분의 최적농도를 통계적으로 더욱 정밀하게 조사하는 반응표면분석법 (response surface method, RSM) 실험을 수행하였다. 그 결과 최적고체성장배지의 성분과 농도는 glucose 25.61 g/L, brown rice 12.53 g/L, soytone peptone 12.53 g/L, $MgSO_4$ 5.53 g/L, agar 20 g/L인 것으로 최종 결정되었으며, 이 조건에서 13일 동안 배양시 균사체의 직경이 약 82 mm 정도에 이르는 것으로 나타났다. 이 결과는 상기의 SAM 실험에서 최적농도로 제시한 배지조성과 매우 유사한 것으로 확인되었는데, 이로부터 최종적인 RSM 실험을 수행하기 전에 최적 농도의 근사치를 추정하기 위해서 수행한 SAM 실험이 매우 효율적이었음을 확인할 수 있었다. 또한 배지 최적화 결과 고체성장배양에서의 성장속도의 증가로 인해 배양기간을 기존의 15~20일에서 8일로 획기적으로 줄일 수 있게 되어, 짧은 시간 내에 대규모 균주 선별과 각 균주의 단백다당체의 생산성 확인이 가능하게 되었다.

• 한국산림과학회지
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• 제86권2호
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• pp.128-134
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• 1997

Populus davidiana는 종자의 활력이 짧고(약 3주), 삼목시 발근율이 저조하여 전통적인 유성 무성번식법의 어려움이 있어서 효과적인 기내증식법을 연구하였다. 10가지의 기본 배지를 이용하여, 1-2개의 액아를 포함한 잎이 붙어 있는 줄기절편체를 0.2mg/l의 BAP가 첨가된 배지에서 배양한 결과 MS 배지와 LP배지에서 가장 많은 신초를 생산하였다. 두 배지에서 5주간 배양한 결과 절편체당 9개 이상씩 신초를 생산하였다. 신초생산과 신초의 생장에 있어 클론간의 상당한 차이를 보였다. 몇 클론은 생장조절물질을 첨가하지 않아도 신초를 생산하였다. 기내배양된 신초 중 60% 이상이 0.2mg/l의 IBA가 첨가된 1/2 GD배지에서 발근이 가능하였다.

• 한국생물공학회:학술대회논문집
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• 한국생물공학회 2001년도 추계학술발표대회
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• pp.434-437
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• 2001

배양 조건으로 온도는 4, 11, 18, 24, $32^{\circ}C$로 배양하여, $24^{\circ}C$에서 Lipid 내에 약 42.3%의 DHA 최대 수율을 보였으며, 교반속도는 50, 100, 150, 200rpm 으로 실험하여 l00rpm에서 최대수율로 42.1% 올 얻었다. 초기 당농도는 5, 8, 11, 14, 17, 23, 29, 35g/L로 주어 8g/L에서 Lipid 내 DHA 농도가 43.1%로 나타났으며, N/C 비율은 glucose 5 g/L로 고정하여0.1, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8 에서 38-40 % 로 거의 일정하게 나타났다.

• 한국지반공학회논문집
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• 제15권6호
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• pp.273-283
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• 1999

박테리아를 토양과 같은 다공성 매질에 주입시키고 적절한 기질과 영양분을 공급시키면 박테리아는 매질의 표면에 부착하여 성장하며 그 결과 공극의 크기가 감소하여 매질의 투수계수가 감소되고 입자간 마찰계수가 증가한다. 본 연구는 투수계수가 비교적 큰 모래와 화강풍화토에 박테리아를 접종, 배양한 후 투수계수의 변화를 측정하였으며, 배양된 바이오필름의 내화학성 및 온도변화에 대한 내구성 실험을 통해 대용 차수재로의 가능성을 평가하였다. 화강풍화토에 박테리아를 접종, 배양한 후 투수계수는 초기치와 비교하여 약 1/50 정도의 감소를 나타냈고, 산성 또는 염기성용액의 침투 이후에도 투수계수의 급격한 증가는 나타나지 않았다. 그러나 반복적인 동결-융해후 투수계수가 증가해 바이오필름으로 인한 공극의 폐색이 손상될 수 있음을 알 수 있었다.

• 한국잠사곤충학회지
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• 제37권2호
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• pp.172-175
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• 1995

흰굳음병균(B. basiana)을 이용하여 백강잠의 대량생산과 효과적인 사상균 살충제 개발을 위해, 사상균의 대량배양 체계에 있어서 접종원인 단균사의 대량 확보에 필수적인 1차 액제배지를 개발하였다. 농가부산물인 저가의 밀기울을 탄소원으로, 질소원으로는 대두박을 선발하고, 이들의 조성비와 농도에 따른 밀기울·대두박 배지에서 단균사의 성장을 조사한 결과, 밀기울과 대두박을 3:2의 비율로 최종배지 농도가 5%되게 조성하였을 때, 배양 4일째 배지 ml당 약 7.6X108개의 단균사를 얻을 수 있어, 단균사의 성장과 경제성면에서 가장 효과적이었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제17권1호
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• pp.69-73
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• 1989

자가분해 효소는 Cl. butyricum의 포자형성 배지에서 배양할 때 체외로 배출되어 배양액에도 존재하였다. 배양액으로부터 약 50배로 부분정제된 자가분해 효소를 사용하여 효소의 성질을 조사하였다. 자가분해 효소의 최적 pH와 온도는 각각 5.0과 37$^{\circ}C$였으며 중성 pH에서는 안정하나, 열에는 비교적 불안정하여 5$0^{\circ}C$에서 5분간 열처리한 후 효소활성의 70%가 소실되었다. 또한 Cu ion$^{++}$에 의해서 효소활성이 저하되었으나 그 밖의 금속이온에 의하여서는 큰 영향을 받지 않았다. 또한 자가분해 효소는 기질로서 영양세포에는 직접 활성을 나타내지 못하나, 세포벽 fraction에는 활성을 가지고 있었다.

• 한국균학회지
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• 제17권3호
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• pp.149-153
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• 1989

내산성 ${\alpha}$-아밀라제를 강력히 생산하는 Aspergillus niger K-25 균주를 토양으로부터 분리하였다. 내산성 아밀라제 효소를 생산하기 위한 균주의 배양조건을 조사하였다. 합성배지 A(soluble starch 3.5%, peptone 2%, $KH_2PO_4$ 0.5%, $MaSO_4{\cdot}7H_2O$ 0.25%, $FeCI_3$ 1.0%, pH 6)에서 배양시 아밀라제 생산이 높았다. 밀기울에 fumaric acid 완충용액(pH3)을 1 : 1(W/V)로 첨가하여 배양했을 때 내산성 ${\alpha}$-아밀라제의 생산력은 완충액 HCI, citric acid과 밀기울만 넣은 배지보다 약 2배가 높았고, 배지 A보다 현저하게 높았다.

• 미생물과산업
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• 제10권1호
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• pp.2-6
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• 1978

백신이란 학문의 원조는 고금 동서를 불문하고 영국의 Jenner라는 것은 우리가 잘아는 사실이다. 이것은 약 200년전의 일이며 그후 각종 전염병예방 백신이 개발되어 오늘날 우리인간은 예전ㅇ 비해 각종 전염병에 대해 큰 은혜를 받고 있는 셈이다.특히 1949년 미국의 Enders박사 일맥의 조직 배양의 개량법에 의한 바이러스의 대량 배양과 정제및 농축이 용이하게 된것은 백신생산 개발문제뿐만아니라 바이러스학과 전염병 예방학의 발전의 일대혁신을 가져왔으며 세균학에 있어서 Koch의 고형배제를 사용하여 많은 병원성세균의 발견을 하게된 것과 비슷한 느낌을 준다. Enders의 조직배양의 modern technique는 아직까지 원인불명인 여러 종류의 바이러스 전염병 병원체가 구명되었으며 지금도 계속 새로운 바이러스가 발견되고 있는 중이다. 그 대표적인 예를 들면 폴리오(Polio)를 중심으로 Coxsackie virus의 A및 B군과 ECHO virus등 장관계바이러스들의 발견과 그 체계적정비 그리고 Adeno virus를 위시한 호흡기계 바이러스들의 계속적인 발견과 그 실험실진단법의 확립등을 들수 있다. 한편 백신개발에 대한 확립 등을 들수있다. 한편 백신개발에 대한 발자취를 보면 폴리오를 위시하여 홍역(Measles)백신, 멈프스(Mumps)및 풍진 (Rubella virus) 백신등의 개발은 근래 선,후진국을 막론하고 이러한 전염병의 예방효과가 눈에 띠게 덕을 보고있는 것이다. 지금 세계적으로 많은 전염병의 병원체가 바이러스라는 것이 알려져 있고 또한 이에 대한 백신의 개발연구가 활발하게 진행되고 있다. 이번 기회에 바이러스백신의 전망이라는 제목을 가지고 논하게 된것을 기쁘게 생가하며 동시에 어려운 과제라고도 생각된다. 왜냐하면 아직 우리나라에서는 생산을 못하고 있는것이 많은데 그 전망을 말하기가 어려운 까닭이며 또한 제한된 지면에서 충분히 고찰하기는 어렵다. 우리나라에서 자주 거론되는 백신 및 종류에 국한하여 그 문제점과 앞으로의 전망을 고찰해 보기로 한다.

• 미생물학회지
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• 제43권4호
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• pp.321-324
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• 2007

Streptomyces 균주들의 진탕배양 시간에 따른 항원성 변화를 면역확산 침강법과 간접 ELISA법으로 측정하였다. 각 균주들에서 모두 색소 생산 시기에 나타난 새로운 침강선이 배양시간이 경과되면서 진해지는 양상을 보였다. S. coelicolor와 S. griseus의 항원성 변화는 상대적으로 약하게 나타난 반면 S. lavendulae와 S. viridochromogenes의 항원성 변화는 강하게 나타났다. 이 결과는 균주에 따라 정도의 차이는 있지만 Streptomyces 균체의 진탕배양에서의 생장이 균체의 외피 성분의 변화를 수반하며 이를 정량적으로 분식할 수 있음을 나타낸다.

• 생명과학회지
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• 제6권4호
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• pp.264-269
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• 1996

Allomyces macrogynus의 유주자에 대한 단일클론항에를 만들었다. 고정된 유주자를 주사하거나 유주자 단백질 용액을 주사함으로서 생쥐를 면역화 하였으며, 하이브리도마 세포들은 효소면역흡착법을 이용하여 검색하였다. 약 30개의 하이브리도마 클론이 유주자에 대한 항체를 생산하는 것으로 확인 되었으며, 이들중 일부는 단일세포클론으로 분리되었다. 이들이 만들어내는 항체는 정제되어, 간법면역형광법에 의하여 유주자의 표면에 반응하는 항체로 확인되었다. 또한, 하이브리도마 배양상등액을 이용하여 유주자의 성장에 영향을 미칠 수 있는 클론을 조사하여 보았다. 조사한 배양5상등액중 두가지의 하이브리도마에서 얻은 배양상등액이 germ tube 의 성정을 촉진하는 것으로 확인되었다.