본 연구에서는 folic acid(FA)가 복합화된 저분자량 수용성 키토산(LMWSC) 나노입자(water soluble chitosan-folic acid nanoparticle, WSCFA)를 제조하고, 또한 DNA와 나노복합체 합성 및 특성을 분석함으로써 in vitro에서 세포내 독성을 평가하였다. WSCFA 합성을 확인하기 위하여 분광학적 분석 방법을 사용하여 분석하였으며, WSCFA 나노입자는 110 nm 이하의 입자 크기인 구형의 형태를 가지고 있음을 알 수 있었다. In vitro 세포내 독성 실험에서, WSCFA-DNA 복합체는 세포내 독성을 전혀 나타내지 않음으로 높은 세포 생존율을 보여주었다. 전기영동 실험을 통해 WSCFA의 DNA 응축능력을 확인하였고, in vitro에서의 전이효율은 형광 광도계에 의해 평가하였다.
항균제 대체제로 응용하기 위하여 다양한 저분자량 수용성 키토산(LMWSC; MW1, MW3, MW5, MW10)을 제조하였으며, 이들의 항균제 대체제 사용 가능여부와 그 작용 기작에 대하여 연구하였다. 먼저, 다양한 분자량 형태의 LMWSC를 이용하여 사람에게 유해한 각종 박테리아를 이용하여 항균효과를 확인하였고, 그 중 MW10의 항균효과가 가장 우수한 것으로 확인되었다. 그 반면 사람의 적혈구를 이용한 용혈활성 실험에서 독성을 나타내지 않았다. MW10의 항균 효과가 세균의 어느 부분에서 일어나는지 확인하기 위해 박테리아의 세포막 조건(PE/PG=7/3, w/w)으로 인공리포좀을 만들었고, 여기에 MW10을 처리한 결과 세균 막에서 항균효과를 나타냄을 추론할 수 있었다.
Lactic acid와 키토산을 Cu(II) 이온과 반응시켜 합성한 착물을 사용하여 유기인 유사 독성물질인 DFP (Diisopropyl fluorophosphate) 분해반응에 적용하였다. Cu(II)-lactic acid 착물의 경우 homogeneous 상태에서 분해반응 반감기가 37. 1 min으로 분해성능이 우수하였다. 1 kDa 저분자량 수용성 키토산으로 합성한 Cu(II)-LMWS chitosan 착물은 결정화 후에는 용해도가 낮아 heterogeneous 한 상태에서 분해반응이 진행되었으며 그 반감기는 32.9 h이었다. 이 결과는 기존에 연구된 18 kDa 키토산 Cu(II)착물의 분해반응속도보다 약 16배 정도 증가된 것이다. Cu(II)-LMWS chitosan 착물을 결정화하지 않고 homogeneous한 상태로 진행한 분해반응에서는 반감기가 8.75 h로 용해도에 따라 약 4배의 차이를 확인할 수 있었다.
키토산에 음이온계 수용성의 함인계 모노머인 mono(2-methacryloy1 oxyethyl) acid phosphate를 그라프트공중합시켜 새로운 유도체를 합성하였다. 그라프트공중합의 최적 그라프트율은 개시제농도 $3.5{\times}10^{-3}M$, 모노머농도 0.19 M, 반응온도 $40^{\circ}C$에서 가장 높은 값을 나타내었고, 반응시간 4시간 이후로는 거의 같은 값을 나타내었다. 그라프트공중합체와 chitosan의 유리아민의 함량에 따른 항균성을 Candida albicans, Trichophyton rubrum 및 Trichophyton violaceum에 대하여 shake flask법으로 조사한 결과, pH 5.75에서 가장 우수한 항균성능이 발현되고, 곰팡이 균류에 대한 선택성이 나타남을 확인할 수 있었다.
간장게장은 우리나라 전통 식품 중의 하나로 생 꽃게를 세척한 후 간장소스를 첨가하고 저온에서 숙성시켜 포장하여 상업적으로 판매하고 있다. 하지만, 간장게장 제조특성 상 열처리를 하지 않기 때문에, 간장게장의 미생물학적 품질을 유지하는데 어려움이 따른다. 따라서 본 연구에서는 원물 꽃게의 초기 미생물 저감화를 위해 여러 살균세척제의 효능을 비교하고 저장 중 간장게장 제품의 미생물학적 품질을 유지하기 위해 키토산의 항균 효능을 평가하였다. 먼저, 상온에서 생 꽃게를 염소수(50 mg/L), 과초산(40 mg/L), acetic acid (5%), lactic acid(5%)에 각각 10분간 침지시켜 일반세균수를 분석하였다. 결과를 살펴보면, 여러 살균세척제 중 5% acetic acid 세척이 생 꽃게에 존재하는 일반세균수를 약 1.5 log CFU/g까지 감소시켜 가장 효과적인 것으로 나타났다. 키토산 효능을 평가하기 위해 현재 상업적으로 제조되고 있는 간장게장(방법 1; 전해수 세척), 5% acetic acid로만 세척된 꽃게(방법 2), 5% acetic acid로 세척된 꽃게에 0.5%(방법 3)와 1%(방법 4)의 수용성 키토산이 첨가된 간장으로 제조된 간장게장을 각각 $4^{\circ}C$와 $12^{\circ}C$에서 최대 30일까지 저장하면서 일반세균수, 대장균군 및 대장균수를 측정하였다. $12^{\circ}C$에서 저장된 간장게장의 일반세균 수는 7일이 지났을 때 약 8 log CFU/g까지 증가하였다. $4^{\circ}C$의 경우, 1% 키토산이 첨가된 군(방법 4)에서 20일 동안 약 2.9 log CFU/g까지만 증가한 것으로 나타나 키토산 무첨가군(방법 1과2)과 0.5% 첨가군(방법 3)(4.2~4.5 log CFU/g)에 비하여 훨씬 효과적이었다. 본 결과에 따라, 생 꽃게를 5% acetic acid로 세척한 후 간장게장에 1% 키토산을 첨가하여 냉장온도에서 저장한다면 간장게장 제품의 미생물학적 품질 향상에 큰 도움이 될 것으로 여겨진다.
아질산염을 이용한 키토산의 부분가수분해 반응에서 반응이 진행됨에 따라서 탈아세틸화도는 감소하였으며 가수분해된 각 fraction에서의 탈아세틸화도는 50% 이하로 확인되었다. GPC를 이용하여 이들 각 유도체의 수평균분자량을 확인한 결과, 물-메탄올에 의한 침전물은 6000에서 4000의 분자량을 가지고 있었으며, 메탄올-아세톤에 의해서는 2000 이하의 분자량을 가지는 것을 얻을 수 있었다. 이때 다분산도는 1.7 이하로 분자량 분포가 좁은 분해물을 얻을 수 있었다. 각 fraction 별로 분자량에 따른 항균효과를 E. coli HB 101과 Bacillus subtilis PP 2에 대해서 시험한 결과 분자량이 5100인 fraction B($H_2O:MeOH=1:5$)가 가장 우수하였고, 모든 시료에서 그람양성균인 Bacillus subtilis PP 2에 대한 항균능이 그람음성균인 E. coli HB 101에 비해 우수하였다.
본 연구는 기능성 성분으로 알려진 Chitosan 분말을 온화한 향미의 마리보 치즈와 접목시킴으로써 기능성 반경성 치즈를 개발하고자 시도되었다. 이를 위해 Chitosan 분말을 일반 Chitosan 분말(CP)과 Nano-Chitosan 분말(NCP)로 나눈 두 개의 처리구로 하여 마리보 치즈 커드에 각각 0.2%와 0.5% 함량을 달리하여 첨가한 치즈를 제조하여 숙성 중 품질 특성과 소비자 기호도를 조사하였다. Chitosan을 첨가하여 제조한 마리보 치즈를 24주간 숙성하면서 숙성 중 유산균 수, pH, 수용성 질소화합물(WSN) 함량, Total phenolic acid 함량, 지방산패도 변화 등 품질 특성을 조사하였다. CP와 NCP를 첨가한 마리보 치즈의 숙성 중 변화에서 pH는 처리구별 유의적 차이 없이 숙성이 경과에 따라 상승하는 결과를 보였으며, NCP 0.2%와 0.5% 첨가구에서 높아지는 결과를 나타내었다. 유산균은 모든 처리구가 숙성이 경과될수록 감소하는 결과를 나타내었지만, Chitosan이 첨가된 마리보 치즈는 대조구에 비해 Chitosan이 가지고 있는 항균성으로 인해 숙성 중 유의적으로 유산균 수가 더 감소 되었다(p<0.05). WSN의 변화는 숙성 전반에 걸쳐 시험구간 유의적 차이 없이 높아지는 경향을 보였으며, NCP 0.2% 첨가구에서 가장 높은 결과를 보였다. 지방산패도는 숙성이 진행될수록 모든 시험구에서 지방산패도가 증가함을 나타내었으며, 숙성 0주차와 4주차에서는 실험구 간의 유의적 차이는 나타나지 않다가 숙성 8주차부터는 대조구보다 Chitosan 첨가구에서 높은 지방산패도를 나타내었다(p<0.05). TP 함량은 4주차를 제외한 모든 구간에서 대조구가 높은 TP 함량을 나타내었다. 치즈의 소비자 기호도 조사에서도 NCP 0.2% 첨가구에서 전반적인 수용도(54%), 향미(65%), 외관(67%) 그리고 구매의사(70%) 등이 비교적 긍정적으로 나타났다. 이상의 결과를 종합하면, CP와 NCP의 첨가가 마리보 치즈의 이화학적 특성을 유지하면서 치즈의 품질상의 특성에 큰 영향을 미치지 않았다. 따라서 향후 키토산을 기능성 소재로 적용하여 마리보 치즈를 제조할 경우, CP보다는 NCP 0.2% 첨가량을 적용하면 최적 품질의 기능성 마리보 치즈 개발이 가능할 것으로 사료되었다.
천연고분자인 chitin의 탈아세틸화물인 chitosan의 유리아미노기에 알킬 길이가 다른 알데히드를 이용하여 N-alkyl chitosan 유도체를 각각 합성한 다음, 이들을 methyl iodide로 4차화시킴으로서 4차 암모늄기가 도입된 새로운 수용성 chitosan 유도체를 합성하여, 도입된 알킬기의 길이에 따른 항균성을 그람양성균인 S. aureus(ATCC 6538P)와 그람 음성균인 E. coli(ATCC 14339)에 대해서 shake flask법을 이용하여 검토하였다. 그 결과 소수성이 증대될수록 항균력은 증가하였고, 특히 그람음성균인 E. coli에 비해 그람양성균인 S. aureus에 대한 항균력이 더욱 증대됨을 확인할 수 있었다. 이는 cytoplasmic membrane의 구조상의 차이에서 기인한 것으로 생각된다.
CaCl2 and water soluble degraded chitosan mixtures were used as coagulants for extending the shelf life of tofu. Microbial counts, pH, and turbidity in tofu immersion solution were analyzed during the periods of storage at 4oC and physico chemical properties of tofu were determined by rheological properties, color and yield. There was no significant difference in moisture content and yield between tofu made with and without chitosan. Failure stress and stress relaxation values were reduced when chitosan was added to CaCl2, but there was no significant change among contents of chitosan added to tofu. The pH values were decreased at the beginning and then slowly increased after 14 days storage. The changes in turbidity were increased during storage, but the change in 2.0g degraded chitosan mixture with 7.0g CaCl2 coagulant(2.0:7.0 ratio) was lower than others and initial turbidity was lower as much as chitosan added to coagulant. These data showed that the water soluble degraded chitosan had a good anti microbial effect and increases the shelf life of tofu.
Recently gene delivery has been designed newly using bioactive biomaterial and applied in the various field by many researchers. In this study, we proposed a new gene delivery system which has the capability of targeting effect in the specific tissue and remarkably enhanced transfection efficiency. We investigated $^1H-NMR$ spectroscopy, particle size analyzer and gel retardation to confirm the correct preparation of gene delivery. Also, we identified the hemo-compatibility of gene delivery by hemolysis assay, non-cytotoxicity by MTT test and transfection efficiency. The uptake mechanism of the gene carrier was confirmed using inhibitor agent such as sodium azide, indomethacin, quercetin, colchicine, and chloropromazine. As a results, it was identified that gene carrier prepared by in this study entered in the cell by the microtubule-dependent, energy-dependent and clathrin-mediated endocytosis pathway.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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