체세포 핵이식에 의한 산자가 양, 소, 염소, 쥐 및 최근에 돼지에서 보고되었지만, 생산된 배반포의 동결보존에 관한 연구결과는 보고되지 않고 있다. 따라서, 본 연구는 체세포 핵이식란의 활용과 산업화 촉진을 위해서 체세포 핵이식 유래 배반포의 동결성 향상에 배양조건이 미치는 영향을 조사하고자 실시하였다. 공여세포는 60일령의 태아세포를 10% FBS 가 첨가된 DMEM 에서 39℃, 5% CO₂의 incubator에서 배양하여 monolayer confluent 형성을 유도한 후 0.25%trypsin 처리하였다. (중략)
수의축산분야에서 개발되어진 생식세포 체외조작기술은 의학 및 생물학을 포함한 생명과학 분야에 광범위하게 이용되고 있다. 특히 생식세포의 생존성을 체외에서 장기간 유지시키는 동결보존 기술은 현재 생식의학분야 첨단의료 기술의 발전 및 효율성 향상에 필수적으로 인식되고 있으며, 이에 대한 다양한 연구결과가 소개되고 있다. 본 강의에서는 동결보존기술의 임상적 의미 및 주요 동결기법의 확립과정, 그리고 이를 이용한 최근의 임상연구결과를 간략히 소개하려 한다.
과거에는 뉴캣슬병(ND)과 같은 바이러스성 질병은 뜨거운 여름보다는 추운 겨울에 발생이 많았다. 영양분만 있으면 생체 밖의 외부 환경에서도 스스로 증식할 능력을 가진 세균은 날씨가 더워지면 환경에서의 증식속도도 빨라서 오히려 여름철에 발생이 많다. 이에 비하여, 생체를 벗어나면 스스로 증식할 능력이 없어 항상 숙주세포에 감염된 후 숙주세포의 유전자 및 효소와 영양분을 이용해야만 증식이 가능한 바이러스는 외부온도가 올라가면 오히려 환경에서의 생존능력이 떨어지기 때문에 여름보다는 추운 겨울철에 환경에 오랫동안 오염되어 있다가 건강한 계군으로 여러 경로를 통하여 전염됨으로써 피해를 일으키곤 하였던 것이다. 그러나 근래에는 뉴캣슬병의 발생이 과거와는 완연히 다른 양상을 나타내고 있다. 따라서 그 원인과 이에 따른 앞으로의 방역대책을 살펴보기로 한다.
디지털 미세유체 전기천공 시스템을 활용하여 미세녹조류에 대한 형질전환 실험을 통해 기존 상용화 장치 대비 높은 유전자 전달 효율과 세포 생존도를 확인하였다. 전기천공의 주요 파라미터인 인가전압 및 인가시간 변화를 주며 세포벽이 존재하는 세포종과 세포벽이 없는 세포종에 대한 비교 실험을 수행하였다. 이를 통해 식물 세포의 전기천공에서 세포벽의 역할은 단순히 유전체의 전달을 방해하는 부정적 요소로만 작용하지 않는 다는 사실을 확인하였다. 병렬화 및 온 칩 세포 배양 등을 통해 제안된 디지털 전기천공 기술이 향후 새로운 청정 형질전환 방법으로써의 가능성도 확인하였다.
본 연구에서는 유황오리로부터 항종양 효과를 나타내는 물질을 용매 추출법과 각종 크로마토그래피를 사용하여 분리 및 정제하였다. 유황오리로부터 정제한 활성 물질의 각종 종양세포에 대한 항암 효과를 측정한 결과 MTT assay는 100 $\mu\textrm{g}$/mL의 농도에서 HEp-2는 56%, KB는 58%의 세포 증식 억제 효과가 나타났다. 정상 세포주인 MDBK는 28%의 세포증식억제 효과가 나타나 정상 세포에 대한 세포 독성은 나타나지 않았다. Clonogenic assay는 200 $\mu\textrm{g}$/mL의 농도에서 HEp-2는 26%, KB는 28%의 생존율을 나타내었다. 따라서 유황오리로부터 정제한 활성 물질은 후두암 세포주인 HEp-2와 구강암 세포주인 KB에서만 특이적으로 세포 증식 억제 효과를 나타내었다.
DA-125의 분광학적, 물리화학적, 물리적 특성을 규명하고 HPLC 및 Bioassay에 의한 정량법을 개발하였다. DA-125는 용액중에서 pH의존적 안정성을 나타내었으며, 원말의 안정성은 상대습도에 의한 영향을 크게 받았다. DA-125의 합성수율은 약 10% 향상되었으며, 연구용 시료는 약 72g을 합성하였다. DA-125는 ADM 내성암주에 대해서도 상대적으로 매우 강한 세포독성을 나타냈으며, in vivo애서도 ADM보다 우수한 종양성장억제율과 연명율을 나타내었고 특히 장기생존수에서 ADM 투여군에서는 생존예가 없는 반면 DA-125 투여군에서는 7/8이 생존하는 우수한 결과를 나타냈다. DA-125의 일반약리작용은 ADM과 유사하였으나 작용은 보다 경미하였다.
산천어 70% 에탄올 추출물(MSE)이 암세포 성장억제와 Balb/c 마우스에서의 종양 성장 억제에 미치는 영향을 알아보았다. 인간 자궁암(HeLa), 간암(HepG2), 유방암(MCF-7), 위암(AGS), 폐암(A549) 세포 그리고 인간신장 정상세포 (293)에 MSE을 처리했을 때 세포생존율이 감소하였고 이들 감소율을 MTT assay로 알아보았다. MSE는 정상세포 293에서보다 인간 암세포주인 MCF-7, A549, HepG2, AGS 그리고 HeLa세포에서 현저하게 더 높은 세포독성이 나타났다. 시료 최고농도인 1 mg/mL를 인간 폐암세포(A549), 유방암세포(MCF-7), 간암세포(HepG2) 및 위암세포(AGS)에 처리한 결과 각각 9.2%, 12.7%, 14.6% 및 16.9%의 세포 생존율을 나타내었다. 더하여 복수암 세포(sarcoma-180)를 이용한 실험동물(Balb/c mice)에서의 고형암 성장 억제 효과를 알아보았으며, 각각 25 mg/kg body weight와 250 mg/kg body weight의 MSE를 투여하였을 때 종양 성장 억제율은 각각 44.7%와 55.7%였다. 따라서 우리는 MSE가 암 예방을 위해 인간에게 유익한 기능성 소재일 것이라는 것을 제안하였다.
연구배경 및 목적 표피성장인자수용체(EGFR)는 HER2/neu(erbB2), HER3(erbB3), HER4(erbB4)를 포함하는 receptor tyrosine ki-nase의 erbB 그룹에 속하는 수용체이다. 표피성장인자수용체의 과발현은 다양한 종류의 암, 특히 두경부편평세포암에서 예후를 악화시킨다고 알려져 있다. 이에 저자들은 하인두편평세포암에서 표피성장인자수용체의 발현 및 분포를 확인하고, 하인두암에서 표피성장인자(EGF)가 암세포의 증식과 침습에 미치는 영향에 대해 알아보고자 하였다. 대상 및 방법 57명의 하인두편평세포암 환자의 조직에서 표피성장인자수용체의 발현을 면역화학적염색을 통해 확인하고, 이에 대해 임상병리학적 요인과 생존율에 대한 분석을 시행하고, 일부 환자의 정상 및 암조직에서 Western blot을 시행하였다. 하인두편평세포암 세포주인 FaDu에서 proliferative assay, colony dispersion, wound healing assay, invasion assay를 시행하여, 하인두암의 진행에서 표피성장인자의 역할에 대하여 분석하였다. 또한 RT-PCR과 Zymography를 통하여 Matrix metalloproteinase(MMP)-2, 9의 발현을 확인하였다. 결 과 63.2%의 하인두편평세포암 조직에서 표피성장인자수용체의 발현이 확인되었다. 표피성장인자수용체의 발현은 정상조직에서 비하여 하인두암 조직에서 유의하게 증가되어 있었으며, 병리학적 병기(p=0.022)가 올라갈수록 유의하게 증가하였으나, 증례수의 제한으로 생존율에서는 통계적 유의성을 얻지는 못했다(p=0.053). in vitro의 결과로 표피성장인자를 FaDu 세포주에 처리하였을 때, FaDu 세포주의 증식이 유의하게 증가되었으며(p<0.05), Transwell invasion chamber상 침습의 증가가 확인되었다(p<0.05). RT-PCR과 zymogram 실험상 표피성장인자처리시 FaDu 세포주의 MMP-2, 9이 발현이 증가되고 활성화되는 것이 확인하였다. 결 론 본 연구에서 표피성장인자수용체의 과발현이 하인두암의 예후 인자로서의 가능성을 확인하였고, 표피성장인자가 하인두편평세포암의 증식과 침습에 관여하는 것을 확인하였다.
본 연구에서는 고량(Sorghum nervosum) 70 % 에탄올 추출 후 항염증 및 UVB에 대한 세포 보호 효과를 검증하고자 하였다. 고량 추출물의 효능 평가는 세포생존율분석, 활성산소 측정, 항염증, COX-2 단백질 변화, UVB에 대한 세포 보호 효과를 수행하였다. 실험 결과, RAW264.7 대식세포, HaCaT 세포에서 고량추출물 모든 농도에서 97 %이상 세포 생존율을 확인하였다. 항염증 NO 생성 억제능에서는 농도 의존적으로 저해 효과가 나타났으며, COX-2 단백질 발현량 역시 25, $50{\mu}g/mL$ 농도에서 유의하게(p<.001) 저해되었다. UVB에 대한 세포 보호 효과로는 세포 내 활성산소종(ROS) 정량 분석 결과, 고량 추출물이 ROS 총 양 감소에 효과가 있음을 확인하였다. 연구결과를 종합적으로 고려해 볼 때, 고량추출물은 항염증 및 UVB에 대한 세포 보호 기능을 나타내는 화장품 원료로서의 개발 가능성이 있다고 사료된다.
암의 화학요법에 있어서 내성생성으로 인한 치료의 장애가 암 치료 실패의 중요 원인이 되며, 분 연구는 암세포의 항암제에 대한 내성 생성에 대한 특성을 연구 보고하였다. 사람의 위암 세포주 SNU-1에 대한 내성 유발을 위하여 세포배양액에 adriamycin(ADR) 농도를 $10^{-8}M$에서 $10^{-7}M$에 까지 적용시켜 내성세포주를 얻어 SUN-1/ADR로 나타내었으며 세포 성장은 SUN-1에서는 2일부터 6일까지 서서히 상승하였고 SNU-1/ADR은 $5{\times}10^3$celles/ml 농도 이상에서 상승을 보였다. 각 세포의 doubling 시간과 doubling 수를 비교하였으며 SNU-1은 doubling 시간이 평균 27.2 시간 doubling 수가 3.56번 이었으며, SNU-1/ADR은 52.2 시간 1.85번으로 내성세포가 더욱 성장이 왕성한 것을 관찰할 수 있다. MTT assay를 위하여 4일간의 성장으로 세포의 적절한 생존도를 관찰하였다. SNU-1과 내성세포주 SNU-1/ADR을 각각 항암제에 대한 약제 감수성 검사를 실시하였으며 약제농도 50%에서 생존도($IC_{50}$)를 비교하여 상관내성도(relative resistance : RR)을 측정 하였으며 vinblastine이 31.62이상으로 가장 높고, vincristine이 29.5, dactinomycin 21.37, epirubicin 17.78, daunorubicin 14.12였고, adriamycin 7.76이었으며 etoposide 4.46 이었다. 그 외의 약제 5-fluorouracil, cisplatin, cyclophosphamide, methotrexate, aclarubicin은 감수성이 낮았다. 위의 결과로 RR가 높은 약제들에 대해서는 multidrug resistance(복합내성)의 존재를 의미한다고 할 수 있으며 내성생성 SNU-1/ADR 세포주의 염색체의 검사에서 double minute chromosome(DMs)을 확인함으로서 내성 생성 세포를 확인 하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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