This experiment was conducted to evaluate growth rate among 15 embryogenic tissue lines (ETLs), comparison of maturation on somatic embryos (SEs) with 13 ETLs and efficiency with various concentrations of gelrite on SEs germination in Japanese red pine (Pinus densiflora). In comparison of ETLs growth rate (folds) with 15 lines, the 05-4 line (5.3 folds) showed the highest rate, on the other hand, the lowest one was recorded in the line of 05-37 (1.4 folds). The 13 ETLs were tested for the extent of SEs production. The best production was recorded in the line of 05-4 (39.8/90 mg F.W.). However, most of ETLs, except 5 lines (05-4, 12, 21, 29 and 37), did not produce SEs at all, therefore, big differences in the ability of SEs production existed among the ETLs tested. Effects of various gelrite concentrations for SEs germination with 3 ETLs were also compared. The highest result was obtained from 0.2% gelrite concentration with 05-4 line (47.3%), there was a inclination that the rate of germination was gradually declined over 0.2% gelrite concentration with the 05-4 and 29 lines. respectively. In contrast, in the line of 05-37, no SEs germination occurred on medium with 0.1 or 0.2% gelrite. In conclusion, the growth rate, SEs production and germination frequency were appeared to deeply depended on the ETLs.
Proceedings of the Plant Resources Society of Korea Conference
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2003.04a
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pp.63-64
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2003
현재 재배되고 있는 포도속 식물 8품종의 잎 절편과 잎 절편에서 얻어진 callus를 이용하여 신초 재생과 체세포배발생 유도 실험을 수행하였다. 생장조절제 종류별 첨가 농도 및 에너지원이 되는 sucrose의 농도별 첨가에 따른 배양 조직의 변화를 살펴보았으며, 활성탄의 첨가 유무가 체세포배발생에 미치는 영향에 관한 실험을 실시하였다. 또한, 잎 절편과 잎 절편에서 얻어진 callus에 $\beta$-glucuronidase (gus) 유전자를 가진 Agrobacterium tumefasciens를 접종하여 포도속의 유전자 전환시 접종 효율을 검정하였다.(중략)
Plant regeneration system via somatic embryogenesis in leaf explant cultures of Gentiana scabra var. buergeri has been established. Leaf segments formed calli when cultured on MS medium supplemented with 0.5 mg/L 2,4-D and 2 mg/L BAP After transferred to SH medium supplemented with 0.5 mg/L 2,4-D, 2 mg/L CPA and 0.5 mg/L kinetin, the callus became embryogenic. The embryogenic callus was subcultured every 3 to 4 weeks. Upon transfer onto SH basal medium the embryogenic callus gave rise to numerous somatic embryos, which subsequently developed into plantlets. The regenerated plants were potted in an artificial soil with mixture (peatmoss : pearlite : vermiculite : 2 : 1 : 1) and transplanted to the soil after kept under a high humidity for two weeks. A total of 78 plants out of 105 regenerated plants survived in the soil. Phenotypic variations in height, number of stems and the flowering time were observed in tile regenerated plants. Cytogenetical analyses showed no chromosomal variation.
Transformed sweetpotato (Ipomoea batatas (L.) Lam. cv. Yulmi) plants were developed from embryogenic calli following Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation. A. tumefaciens strain EHA105/pCAMBIA2301 harboring genes for intron $\beta$-glucuronidase (GUS) and kanamycin resistance. Transient expression of GUS gene was found to be higher when embryogenic calli were co-cultivated with Agrobacterium for 2 days. The co-cultured embryogenic calli transferred to selective MS medium containing 1mg/L 2,4-D, 100mg/L kanamycin, and 400mg/L claforan. These embryogenic calli were subcultured to the same selection medium at 4 weeks interval. Kanamycin-resistant calli transferred to hormone-free MS medium with kanamycin gave rise to somatic embryos and then converted into plantlets in the same medium. Southern blot analysis confirmed that the GUS gene was inserted into the genome of the sweetpotato plants. A histochemical assay revealed that the GUS gene was preferentially expressed in the leaf, petiole, and vascular tissue and tip of root.
Callus induction and embryogenesis were studied in three different genotypes of Acanthopanax senticosus, to develop a protocol for somatic embryogenesis and acclimatization. Young leaf, stem, node, petiole, peduncle, flower and root explants were collected from 3-year old trees of A. senticosus accessions (Korea, Russia and Japan). Callus was obtained from all cultured explants but showed the higher rate of callus formation in flower cultured. For the three A. senticosus accessions, callus was well formd on MS media containing 2mg/ l of 2,4-D and 2mg/ l of TDZ, 4mg/ l of 2,4-D and 1mg/ l of TDZ than other treatments. For three A. senticosus accessions, when callus transferred to MS medium with 2,4-D, embryogenic cell formed. For A. senticosus accessions Korea, embryogenic cells were obtained on callus induced from petiole, stem, node and root explants, and induction rate was lower than 3%. 200mg of embryogenic callus was transferred to MS free liquid medium and somatic embryos of heart stage were obtained after 45days of culture. When somatic embryo of germination stage were transferred to solid medium, most of the embryos were regenerated into plantlets on 1/4 MS medium. Normal plants with both shoots and roots were transferred to greenhouse soil and were successfully acclimatized.
Cotyledonary and hypocotyl explants of melon seedlings were cultured on Murashige and Skoog's (MS) medium supplemented with various concentrations of 2,4-Dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D) and benzyladenine (B.A).Up to 22% of cotyledonary explants and 7%, of hypocotyl explants, respectively: Produced somatic embryos through intervening two types of calli: bright yellow compact (BYC) callus and pale-yellow compact (PYC) callus. BYC callus was capable of producing somatic embryos at initial culture, but it became necrotic as subrulhues proceeded. In contrast UC callus was incapable of producing somatic embryos during initial culture (first 6 weeks), but it became bright-yellow friable (BYF) callus with forming a few globular embryos after 2 months of subculture, indicating that the callus turned embryogenic. The embryogenic capacity of BYF maintained for over one year when the callus was sucultured at 4-week interval. Upon transfer onto MS basal medium the callus gave rise to numerous somatic embryos and subsequently converted to plantlets. Plantlets were transplanted to potting soil and grown to maturity in the phyotron.
When cultured on MS medium supplemented with 0.5 mg/L NAA alone or 1.0 mg/L 2,4-D and 0.5 mg/L BA, immature zygotic embryos of Stewartia koreana formed embryogenic calli and somatic embryos. In investigate effect of sucrose concentration on somatic embryo development, embryogenic calli were transferred to MS basal medium containing 1.5,3, 6 or 9% sucrose. The greatest frequency of somatic embryos was obtained on medium containing 6% sucrose. However addition of 1.5 or 9% sucrose to medium inhibited somatic embryo germination and development into normal plantlet After 5 weeks of hardening culture on medium containing 6% sucrose, somatic embryos were transferred to half strangth MS medium supplemented with 0.1% charcol, wherein these embryo developed into the normal plantlets.
Embryogenic suspension cultures were initiated using embryogenic callus from immature inflorescence explants (Aralia cordata Thunb.) cultured on solid MS medium containing 1 mg/L 2,4-D for 8 weeks and then the embryogenic callus was proliferated in liquid MS medium containing 1 mg/L 2,4-D. After sieving the suspensions (pore size 270$\mu$m), embryogenic cells were cultured in liquid MS medium with cytokinins (kinetin, BA, zeatin) for two weeks. When the embryogenic cells were transferred to liquid MS basal medium, primary somatic embryos were developed after 5 weeks of culture. Secondary embryos were developed directly from the primary torpedo and cotyledonary embryos cultured in solid MS basal medium. Frequency of secondary embryogenesis was higher on medium containing 2 mg/L kinetin than the other cytokinins. Plant regeneration was highly recorded by placing secondary cotyledonary embryos induced from primary cotyledonary embryos in MS medium containing 2 mg/L kinetin or 2 mg/L zeatin (25.4% and 28.6%, respectively). The plant regeneration from secordary embryos was prohibited by tertiary embryogenesis.
Hypocotyl explants from 7 days old seedlings of one $F_1$ hybrid cultivar and two pure lines of cucumber formed embryogenic calli at frequencies of up to 8% when cultured on Murashige and Skoog medium (MS) supplemented with 1 mg/L 2,4-D for 3 weeks. Embryogenic calli gave rise to somatic embryos. When slices of somatic embryos were cultured on the same medium for 4 weeks, they formed embryogenic calli. Embryogenic cell suspension cultures were established with embryogenic calli in MS liquid medium with 1 mg/L 2,4-D. Embryogenic potential of cell suspension cultures was maintained by subculturing every seven days. When the level of 2,4-D in the medium was lowered to 0.2 mg/L by diluting with liquid MS basal medium, embryogenic cell suspension cultures underwent development into numerous somatic embryos. When plated onto MS basal medium, over 95% of somatic embryos developed into plantlets. Plantlets were transplanted to potting soil and grown to maturity.
Journal of The Korean Society of Grassland and Forage Science
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v.27
no.4
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pp.235-240
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2007
Optimum tissue culture conditions for an efficient induction of embryogenic callus from mature seeds of perennial ryegrass (Lolium perenne L.) and regeneration of plants from callus tissues were investigated. MS medium containing 3 mg/L 2,4-D and 0.1 mg/L BA was optimal for embryogenic callus induction from mature seeds. The highest plant regeneration frequency (58.3%) was observed when the embryogenic callus tissues were cultured on N6 medium supplemented with 1 mg/L 2,4-D and 3 mg/L BA. Regenerated plants were grown normally when shoots transplanted to the soil. A short tissue culture period and high-frequency regeneration system would be helpful for molecular breeding of perennial ryegrass through Agrobacterium-mediated genetic transformation.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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