말똥성게 정자의 냉장보존을 위한 여러 가지 희석액의 보존 효과를 비교하였다. 다양한 농도의 포도당 용액, 인공해수(ASW)를 희석액으로 하여 정자를 4$^{\circ}C$에서 보존하였다 보존효과는 정자 활성지수 (SAI), 생존율 및 말똥성 게 난에 대 한 수정률로 평가하였다. ASW와 1.2 M glucose액을 희석 액으로 하여 30일간 냉장보존하였을 때 가장 높은 운동성 및 생존율을 유지하였다. 정자의 냉장보존을 위한 희석액의 적정 pH는 7.0∼8.0 이었다. 정자의 SAI와 생존율을 높이기 위한 항생제로는 neomycin(400 ppm)이 효과적인 것으로 나타났다
관상동맥 우회술이나 말초 혈관 우회술 시 가장 많이 쓰이는 대체 혈관은 자가 복재정맥이나, 이러한 정맥을 사용할 수 없는 경우 동종 복재정맥이 이용되어 왔다. 1900년대 초부터 시작된 동종 정맥의 이식은 아직도 그 이용에 대하여 논란이 있으며 보존 방법에 따른 혈관 내피세포나 평활근의 생활성 평가에 있어도 큰 편차가 있다. 특히 혈관 내피세포의 항응고 기능이나 nitric oxide에 대한 연구가 이루어지면서 동종 정맥 이식에 있어도 이들의 생활성 및 항원성 여부에 관심이 모아지고 있다. 대상 및 방법: 본 연구는 사람의 복재정맥을 보존하였을 때 보존 방법 및 기간에 따른 혈관 내피세포의 생활성의 평가를 목적으로 하였다. 신선 복재정맥을 대조군으로 하였으며, 실험군 복재정맥은 RPMI (Roswell park memorial institute) 1640에 10% 우태혈청이 포함된 $4^{\circ}C$ 조직 배양액에 넣어 각각 1일(24시간), 3일, 5일, 7일, 14일간 냉장 보존(cold storage)하였다. 기간별 냉장 보존이 끝나면 반으로 나누어 이 상태의 정맥을 I군(I-1, I-3, I-5, I-7, I-14)으로 정하고 냉장 상태에서 실험하였으며, 나머지는 10% 우태혈청과 10% DMSO가 포함된 RPMI 1640용액에 넣고 $-196^{\circ}C$의 액화 질소 탱크에서 2주간 냉동 보존 후(cryopreservation), $37^{\circ}C$에서 급속 해동하여 냉장 보존된 기간에 따라 II군(II-1, II-3, II-5, II-7, II-14)으로 정하여 실험하였다. 각 군의 생활성을 알아보기 위하여 전자현미경을 이용한 내피세포의 관찰, 트롬보모듈린(thrombomodulin) 면역조직화학검사를 이용한 혈관 내피세포의 항응고기능, 효소 소화에 의한 정맥에서의 혈관 내피세포 분리 후 트리판 블루(trypan blue)를 이용한 세포 생존율 검사 등을 시행하였다. 결과: 전자현미경을 통한 세포의 형태학적 검사에서 Groups I-7, I-14, II-5, II-7, 그리고 II-14정맥군들이 Gundry score의 의미 있는 증가(p <0.05)를 보이는 형태학적 변화가 나타났다. 트롬보모듈린을 이용한 면역조직화학검사와 트리판 블루를 이용한 세포 생존율 검사에서는 냉장군은 7일째 생활성 저하를 나타냈으나 냉동 보존군에서는 보존 기간에 상관없이 모두 생활성이 저하된 것으로 관찰되었다. 결론: 사람의 복재정맥을 우태혈청이 포함된 $4^{\circ}C$의 RPMI 1640에 냉장 보존하였을 경우 냉장 7일째부터 형태학적, 기능적 생활성 저하를 관찰할 수 있었으나, $-196^{\circ}C$에 냉동 보존한 경우에는 냉장 5일 후 냉동 보존한 정맥에서도 형태학적인 생활성 저하를 관찰할 수 있었으며 혈관 내피의 항응고 기능을 나타내는 트롬보모듈린 면역조직화학검사에서는 냉동 보존한 대부분 정맥에서 기능적 생활성이 저하된 것으로 관찰되었다. 그러나 이러한 생활성 및 항응고 기능의 저하가 일시적인 현상인지의 여부와 이러한 기능 저하가 이식 혈관의 장기 개통률에 미치는 영향에 대하여 지속적 연구가 필요하다.
수세대의 계대동육에 의해서도 휴면란이 얻어지지 않는 열대성 다화성 누에의 품종보존을 위한 사육회수를 줄이고자 다화성 누에씨(MR, SPT, HM)의 냉장적기, 냉정적온 및 냉장가능기간을 부화비율을 지표로 하여 조사한 바 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 5$^{\circ}C$에서 30일간 냉장한 MR과 SPT의 부화비율은 2일영난냉장구에서 가장 높았고(약 80%), 7일영난냉장구에서 가장 낮았다(5% 이하). 2. 2일영의 HM누에씨를 -2.5, 0.0, 2.5, 5.0, 7.5$^{\circ}C$의 각 온도에 15일-60일간 냉장하여 부화비율을 조사한 결과, 30일 냉장에는 $0^{\circ}C$가 적합하며(91%), 60일 냉장에는 2.5$^{\circ}C$가 적합하였다.(61%) 3. 이상의 결과로부터 다화성 누에의 품종보존을 위해서는 산란 후 2일 경과한 누에씨를 2.5$^{\circ}C$에서 50-60일간 냉장함으로서 연중계대동육회수를 반감시킬 수 있음이 밝혀졌다.
정액의 액상보존이 닭의 번식능력에 미치는 영향을 구명하기 위하여 계통이 분명한 재래닭을 정액 채취용 수탉으로 사용하였으며 인공수정용 암닭으로는 백색산란계를 사용하였다. 닭 정액을 채취 희석하여 5$^{\circ}C$ 냉장온도에서 6, 30, 54 시간보존하며 정액성상 검사와 함께 인공수정을 하였을 때, 원정액과 skim milk glucose액, egg yolk glucose액 및 saline에 희석된 정액의 정자운동성은 냉장보관 6 시간에는 처리간에 유의적인 차이가 없었으나, 냉장보관 30 및 54 시간에는 저하되는 경향이었다 그러나 skim milk glucose액과 egg yolk glucose액의 정자운동성과 정상정자율은 30 및 54 시간 냉장 보존을 하여도 원정액이나 saline액보다 현저히 높았으며 (P<0.05), 수정율에 있어서는 6, 30 및 54 시 간 냉장보존된 skim milk glucose희석정액에서 90.77, 87.70 및 59.46% 를 나타내어 다른 시험구보다 현저하게 우수한 결과를 보였다 .(P<0.05). 따라서 본 연구결과 skim milk glucose액은 닭의 액상정액 인공수정시 산업적 이용이 가능하다고 판단된다.
숭어 정액의 냉장 및 냉동보존시 적합한 희석액을 선정하고, 알에 대한 수정률을 평가하였다. 비보존 숭어 정자의 머리는 공모양으로 직경 $1.26{\pm}0.08 \{mu}textrm{m}$, 길이 $1.06{\pm}0.07 \{mu}textrm{m}$ 였으며, 과립상의 염색질을 가지고 있었다. 숭어 정자의 냉장보존시($0^{\circ}C$, 10일간) 희석액으로는 동종의 혈정이 가장 높은 정자활성을 나타냈으며, egg-tris, 0.1M, 0.3M 및 0.5M glucos에서는 활성이 서로 비슷하였다. 또한 동해방지제로 10% DMSO, 희석액으로 MFRS를 사용하여 냉동보존한 후 해동시켰을 때 대조구와 유사한 수정률을 보였다. 냉동보존 후 해동시킨 일부 정자 중에서는 세포막이 이탈되거나 소실되는 구조적 변화를 나타냈다.
EM이 돼지 사양에서 육질개선에 미치는 효과를 알아보기 위해 사양실험을 하였다. 일반적으로 사양한 돼지와 EM 축산사료첨가제와 EM 활성액을 정기적으로 급이하여 사양한 EM Pork를 도축한 후 각각의 돈육을 $4^{\circ}C$ 냉장온도와 $-18^{\circ}C$ 냉동온도에서 저장하였다. 그후 일반 돈육과 EM Pork의 일반성분 및 육질의 보존성에 관한 실험을 실시하였다. 단백질 변성에 관한 실험결과 일반 돈육을 5일간 냉동저장한 것은 3.72 mg%를 보였고 EM Pork는 3.2 mg%를 나타내 일반 돈육보다 15% 정도 단백질 변성을 지연시켰다. 또한, 일반 돈육을 5일간 냉장저장한 것은 4.9 mg%를 나타냈으나 EM Pork는 3.19 mg%를 나타내 일반 돈육보다 35% 단백질 변성 억제 효과를 보였다. 또한, 냉동 및 냉장 처리한 일반 돈육의 조단백질 함량은 각각 21.41%와 19.73%인데 비해 냉동 및 냉장 처리한 EM Pork는 각각 22.21%와 21.41%를 나타냈다. 이러한 결과는 단백질 변성과 관련된 것이라 볼 수 있다. 결론적으로 EM Pork육은 일반 돈육에 비해 단백질 변성 억제 효과가 15${\sim}$35% 정도 우수한 것으로 사료된다.
배경: 최근 관상동맥우회술 및 말초 혈관 수술의 증가로 동종 이식편 혹은 합성 도관의 필요성이 제기되고 있으나, 만족스럽지 못한 장기 개존율로 널리 사용되지 못하고 있다. 최근 냉동보존된 동종 판막의 생육성 유지의 잠재력이 밝혀지면서, 냉장보존 및 냉동보존된 동종 동맥 혹은 정맥이식편의 실험적인 연구와 임상 적용이 시도되고 있다. 대상 및 방법 : $4^{\circ}C$ 냉장보존과 $-170^{\circ}C$ 냉동보존된 한국산 잡견의 대퇴 동맥 및 대복재 정맥을 수여견의 대퇴 동맥에 이식하여, 냉장보존 및 냉동보존된 동맥과 정맥의 개존율의 차이와 생육성에 따른 내피세포의 기능을 시간대별로 관찰하였다. 결과: RPMI-1640을 배양액으로 하는 3일간의 $4^{\circ}C$냉장보존법과 10% DMSO${\cdot}$RPMI-1640 을 배양액으로 하는 2주간의 $-170^{\circ}C$의 냉동보존법은 혈류량(개존율)(p=0.264), 혈전의 발생 정도(p=0.264)와 내피의 존재 정도(p=0.587), 트롬보모듈린(thrombomodulin) 면역조직화학 염색에도 차이가 없었다(p=0.657). 동맥 이식편과 정맥 이식편은 보존방법에 관계없이 동맥 이식편이 정맥 이식편보다 혈류가 좋았고(p=0.030), 혈전의 발생 정도가 낮았다(p=0.030). 혈전의 정도 및 내피의 존재 유무와 트롬보모듈린의 면역조직화학적 염색의 상관관계를 보았을 때, 혈전의 정도와 면역조직화학적 염색 정도와의 상관관계 계수는 0.654였으며(p=0.006), 내피의 존재와 면역조직화학적 염색 정도와의 상관관계 계수는 0.520 이었다.(p=0.0049). 이식편을 수여견에 이식 후 적출한 이식편을 기간별로 내피의 존재 여부와 면역조직화학적 염색 정도와의 상관관계를 살펴보면 2주일 전에는 상관관계가 없었으나(p=0.306), 1개윌 후에는 상관관계 계수가 0.931 이었다(p=0.0008). 결론: RPMI를 배양액으로 하는 3 일간의 $4^{\circ}C$냉장보존과 10% DMSO${\cdot}$RPMI-1640을 배양액으로 하는 2주간의 $-170^{\circ}C$의 냉동보존은 최소한 같은 정도의 생육성이 유지된 혈관 보존을 할 수 있었다. 보존방법에 관계없이 동맥 이식편은 정맥 이식편 보다 혈전의 발생률이 적었으며, 혈류량으로 평가한 개존율이 우수하였다. 트롬보모율련의 역할을 고려할 때, 이식 후 2주일 전에 적출된 이식편에는 내피가 존재하더라도 광학현미경상의 형태만 갖고 있고, 항응고 기능은 없었으나, 이식 후 1개월 이후에 적출된 이식편에서는 내피가 존재하는 경우 항응고 기능이 있는 것을 알 수 있었다.
다양한 희석액과 보존온도에 따른 강도다리 (Platichthys stellatus) 정자의 냉장보존 효과가 검토되었다. 강도다리 어미로부터 채정된 정액의 spermatocrit와 정자농도는 각각 $72{\pm}5$와 $6.00{\pm}0.98{\times}10^8/mL$였으며, 정장의 삼투질농도와 pH는 각자 $337{\pm}g\;mmol/kg$과 $7.7{\pm}0.1$이었다. 강도다리 정자의 냉장보존을 위해 희석액으로 인공정장(artificial seminal plasma, ASP), Stein's solution (SS), 해산어류용 생리식염수(marine fish Ringer's solution, MFRS)를 이용하여 각각 $0^{\circ}C,\;2^{\circ}C,\;4^{\circ}C$에서 30일간 보존하면서 정자의 활성을 검토하였다. 강도다리 정자의 냉장보존을 위해서 희석액으로는 SS가 가장 효과적이었으며 보존온도는 $0^{\circ}C$에서 정자의 활성이 가장 좋아 30일 동안 높은 운동성을 유지하였다.
황복 (Takifugu obscurus)의 정자보존을 위한 기초자료를 얻고자, 정액의 특성을 파악하고 정자의 냉장보존 조건에 관한 연구를 수행하였다. 정액의 ml당 정자수는 $1.13\pm0.34\times10^{10}/ml$이었고 spermatocrit는 64.8$\pm$1.4였으며, 정장의 삼투질농도는 266$\pm$2 mOsm/kg이었다. 총 단백질 함량과 총 지질 함량은 정장에 비해 정자에서 높았으며, glucose는 검출되지 않았다. $Ca^{2+}$과 $Na^{+}$ 농도는 정자에 비해 정장에서 높았고, $Mg^{2+}$과 $K^{+}$은 정장에 비해 정자에서 높은 값을 보였다. 황복 정자를 여러 가지 희석액을 이용하여 16 일간 $0\pm0.5^{\circ}C$에서 냉장보존 하였을 때, 수정률은 $0\~0.7\%$로 보존 효과가 저조한 것으로 나타났다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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