• KSBB Journal
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• 제23권4호
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• pp.303-310
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• 2008

소의 혈액, 세포, 조직, 기관 등 소유래 물질을 원료로 사용한 생물의약품, 조직공학제제, 세포치료제의 경우 소유래 원료물질에 다양한 바이러스가 오염된 사례가 있기 때문에 바이러스 안전성 검증이 필수적이다. BPIV3는 동물 세포주, 우혈청 등에 가장 흔하게 오염되는 바이러스이다. 소유래 물질을 원료로 하는 생물의약품, 조직공학제제, 세포치료제 등에서 BPIV3 안전성을 확보하기 위해, 원료물질, 제조공정, 완제품에서 BPIV3를 정량적으로 검출하고, 제조공정에서 BPIV3 제거 검증을 위한 시험법으로 활용이 가능한 BPIV3 real-time RT-PCR 시험법을 확립하였다. BPIV3에 특이적인 primer를 선별하였으며, 형광염료 SYBR Green I을 사용하여 BPIV3 RNA 정량 검출 시험법을 최적화하였다. 세포배양법에 의한 감염역가와 비교한 결과 real-time RT-PCR 민감도는 2.8 $TCID_{50}/mL$이었다. 확립된 시험법의 신뢰성 (reliability)을 보증하기 위해 시험법 검증을 실시한 결과 특이성 (specificity)과 재현성 (reproducibility)이 우수함을 확인하였다. 확립된 real-time RT-PCR을 생물의 약품 제조공정 검증에 적용할 수 있는지 확인하기 위하여 인위적으로 BPIV3를 오염시킨 CHO 세포주와 소유래 콜라겐에서 BPIV3 검출 시험을 실시하였다. BPIV3를 감염시킨 CHO 세포와 세포배양 상청액에서 BPIV3를 정량적으로 검출할 수 있었다. 소유래 콜라겐에서도 7.8 $TCID_{50}/mL$ 까지 정량적으로 검출할 수 있었다. 위와 같은 결과에서 확립된 BPIV3 real-time RT-PCR 시험법은 생물의약품 안전성 보증을 위한 세포주 검증, 생물의약품 생산 공정 검증, 바이러스 제거 공정 검증 등에서 감염역가 시험법과 같은 생물학적 시험법을 대신할 수 있는 신속하고, 특이성과 민감성이 우수한 시험법임을 확인하였다.

• 미생물학회지
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• 제44권1호
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• pp.14-21
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• 2008

소의 혈액, 세포, 조직, 기관 등은 생물의약품과 조직공학제제, 세포치료제의 원료로 널리 사용되고 있다. 소유래 물질을 원료로 사용한 제제의 경우 소유래 원료 물질에 다양한 바이러스가 오염된 사례가 있기 때문에 바이러스 안전성 검증이 필수적이다. Bovine herpesvirus type 1 (BHV-1)은 소에게 가장 흔하게 감염되는 바이러스중의 하나이다. 소유래 물질을 원료로 하는 생물의약품, 조직공학제제, 세포치료제 등에서 BHV-1안전성을 확보하기 위해, 원료물질, 제조공정, 완제품에서 BHV-1을 정량적으로 검출하고, 제조공정에서 BHV-1 제거 검증을 위한 시험법으로 활용이 가능한 BHV-1 real-time PCR 시험법을 확립하였다. BHV-1에 특이적인 primer를 선별하였으며, 형광염료 SYBR Green I을 사용하여 BHV-1 DNA 정량 검출 시험법을 최적화하였다. 세포배양법에 의한 감염역가와 비교한 결과 real-time PCR 민감도는 $2\;TCID_{50}/ml$이었다. 확립된 시험법의 신뢰성(reliability)을 보증하기 위해 시험법 검증을 실시한 결과 특이성(specificity)과 재현성(reproducibility)이 우수함을 확인하였다. 확립된 real-time PCR을 생물의약품 제조공정 검증에 적용할 수 있는지 확인하기 위하여 인위적으로 BHV-1을 오염시킨 Chinese hamster ovary (CHO) 세포주와 소유래 콜라겐에서 BHV-1 검출 시험을 실시하였다. BHV-1을 감염시킨 CHO 세포에서 세포변병효과를 관찰할 수 없었지만, 세포와 세포배양 상청액에서 BHV-1을 정량적으로 검출할 수 있었다. 소유래 콜라겐에서도 $10\;TCID_{50}/ml$까지 정량적으로 검출할 수 있었다. 위와 같은 결과에서 확립된 BHV-1 real-time PCR 시험법은 생물의약품 안전성 보증을 위한 세포주 검증, 생물의약품생산공정 검증, 바이러스 제거 공정 검증 등에서 감염역가 시험법과 같은 생물학적 시험법을 대신할 수 있는 신속하고, 특이성과 민감성이 우수한 시험법임을 확인하였다.

• 환경생물
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• 제39권3호
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• pp.259-265
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• 2021

국내외에서 80여 종이 넘는 담수 및 해산어류를 감염시켜 대량폐사를 발생시키는 바이러스성 출혈성 패혈증 바이러스(VHSV) 진단검사를 위해 넙치의 여러 조직의 바이러스 발현량에 대한 정량적 데이터를 시간순서에 따라 분석하였다. 무작위 선별된 넙치에 3.0E+07 TCID₅₀ per 0.1mL per fish의 VHSV를 복강 주사하여 시간순서(0시간, 6시간, 12시간, 1일, 2일, 3일, 5일, 7일)에 따라 조직(아가미, 간, 신장, 비장, 근육)을 채취하였다. Real-time PCR 법을 통해 상대 정량한 결과 5일차 아가미, 간, 신장, 비장에서 바이러스의 발현량이 가장 높게 나타났다. 이번 연구를 통해 감염 초기단계에서 비장이 VHSV 확정진단을 위한 적정조직임을 입증하였으며, 국내 법정전염병 진단에 중요한 정보를 제공할 것이다.

• Journal of Veterinary Science
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• 제21권5호
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• pp.80.1-80.13
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• 2020

Background: In suckling piglets, transmissible gastroenteritis virus (TGEV) causes lethal diarrhea accompanied by high infection and mortality rates, leading to considerable economic losses. This study explored methods of preventing or inhibiting their production. Bovine antimicrobial peptide-13 (APB-13) has antibacterial, antiviral, and immune functions. Objectives: This study analyzed the efficacy of APB-13 against TGEV through in vivo and in vitro experiments. Methods: The effects of APB-13 toxicity and virus inhibition rate on swine testicular (ST) cells were detected using 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2, 5-diphenyl tetrazolium bromide (MTT). The impact of APB-13 on virus replication was examined through the 50% tissue culture infective dose (TCID₅₀). The mRNA and protein levels were investigated by real-time quantitative polymerase chain reaction and western blot (WB). Tissue sections were used to detect intestinal morphological development. Results: The safe and effective concentration range of APB-13 on ST cells ranged from 0 to 62.5 ㎍/mL, and the highest viral inhibitory rate of APB-13 was 74.1%. The log₁₀TCID₅₀ of 62.5 ㎍/mL APB-13 was 3.63 lower than that of the virus control. The mRNA and protein expression at 62.5 ㎍/mL APB-13 was significantly lower than that of the virus control at 24 hpi. Piglets in the APB-13 group showed significantly lower viral shedding than that in the virus control group, and the pathological tissue sections of the jejunum morphology revealed significant differences between the groups. Conclusions: APB-13 exhibited good antiviral effects on TGEV in vivo and in vitro.

• 한국동물위생학회지
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• 제14권2호
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• pp.154-158
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• 1991

To investigate the Akabane antibody in the cattle with the serological test in Chung Chung Buk Do from May to Nov 1191. The result are summarized as follows. 1. Breed in cattle reacted as positive condition in Akabane antibody 76 heads(42%) in 180 cattles reacted as positive condition in Akabane antibody, 23 heads(51%) in 45 Korea native cattle reacted as positive condition in Akabane antibody. 2. During 5, 9, 10, 11 month, Akabane antibody in cattle is over 45%. 3. Less of 2 years old and over 4 years old cattle are Akabane antibody in cattle is over 40%. 4. The relation of titer of 2 folds of dilution HA and 10 folds of dilution TCID$_{50}$ was same relation.n.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제21권1호
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• pp.100-108
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• 2011

A method for the rapid detection and quantification of Newcastle disease virus (NDV) produced in an animal cell culture-based production system was developed to enhance the speed of the NDV vaccine manufacturing process. A SYBR Green I-based real-time RT-PCR was designed with a conventional, inexpensive RT-PCR kit targeting the F gene of the NDV LaSota strain. The method developed in this study was validated for specificity, accuracy, precision, linearity, limit of detection (LOD), limit of quantification (LOQ), and robustness. The validation results satisfied the predetermined acceptance criteria. The validated method was used to quantify virus samples produced in an animal cell culture-based production system. The method was able to quantify the NDV samples from mid- or late-production phases, but not effective on samples from the early-production phase. For comparison with other quantifiable methods, immunoblotting, plaque assay, and tissue culture infectious dose 50 ($TCID_{50}$) assay were also performed with the NDV samples. The results demonstrated that the real-time RT-PCR method is suitable for the rapid quantification of virus particles produced in an animal cell-culture-based production system irrespective of viral infectivity.

• 한국수산과학회지
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• 제42권3호
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• pp.232-237
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• 2009

Norovirus surrogate (feline calicivirus) was inactivated by treatment at 50,000 psi for 60 sec by 6.8-$log_{10}TCID_{50}mL^{-1}$. Tissue obtained from oyster (digestive gland, gill and mantle) was qualitatively destroyed and distorted by treatment at pressure greater than 5,000 psi for 60 sec. High pressure treatment induced progressive changes in the color of the oyster adductor muscle. High pressure treatment effectively reduced norovirus surrogate but induced conformational changes in the tissue and color of oyster flesh.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제16권10호
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• pp.1485-1490
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• 2006

In this study, comparative replicational properties of Hyphantria cunea nucleopolyhedrovirus (HycuNPV) in Lymantria dispar (IPLB-LdElta) and Spodoptera frugiperda (IPLB-Sf21) cell lines were investigated. Our microscopic observations showed that cytopathic effects (CPEs) in LdElta cells appeared 12 h later than those in Sf21 cells. Whereas polyhedral inclusion bodies (PIBs) formed at 48 h postinfection (p.i.) in LdElta cells, it formed at 36 h p.i. in Sf21 cells. Extracellular virus production determined according to the 50% tissue culture infective dose ($TCID_{50}$) method in LdElta cells started about 12 h later when compared with Sf21 cells. Titers of extracellular virus in LdElta and Sf21 cells were calculated as $1.77{\times}10^9$ plaque forming units (PFU)/ml and $5.6{\times}10^9PFU/ml$, respectively, at 72 h p.i. We also showed that viral DNA replication began at 12 h p.i. in both cell lines. Viral protein synthesis was determined by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) and polyhedrin synthesis was observed at 12 h p.i. in both cell lines. The results indicate that while the synthesis of macromolecules is 12 h later and production of extracellular virus is almost 3-fold lower in LdElta cells compared with those in Sf21 cells, the LdElta cell line is still a productive cell line for infection of HycuNPV.

• 한국어병학회지
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• 제34권1호
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• pp.9-15
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• 2021

Rock bream (Oplegnathus fasciatus) is a highly valued aquaculture species in Korea. However, the aquaculture industry suffers huge economic losses due to rock bream iridovirus (RBIV) infection in summer. The objective of this study was to determine genetic diversity and relationships of DNAs isolated from two groups of rock bream after RBIV infection using five microsatellite (MS) markers. The first group of fish died early and the second group of fish died later after RBIV infection. In this experiment, 90 fish (5.1±1.0 cm and 4.1±1.3 g) were injected with 50 μl of RBIV (10⁴ TCID⁵⁰/ml) and maintained at 26℃ for 15 days. Genomic DNAs were extracted from fins of 20 fish that died earlier or later after RBIV infection. These DNAs were subjected to genotyping using five MS markers (CA-03, CA3-05, CA3-06, CA-10, and CA3-36). Of these markers, CA3-05 (early death group), CA3-06 (late death group), and CA3-36 (both early and late death groups) showed different alleles distribution rates. In-depth studies are needed to provide valuable information for selecting RBIV-resistant fish. In conclusion, microsatellite marker distribution pattern differences between early- and late- death groups of rock bream after RBIV infection showing different RBIV susceptibilities were determined using MS markers and genotyping. Results of this study suggest that MS markers could be used to facilitate the selection of RBIV resistant rock bream.

• 미생물학회지
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• 제51권3호
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• pp.199-208
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• 2015

소의 혈액, 세포, 조직, 기관 등이 생물의약품, 조직공학제제, 세포치료제, 의료기기의 원재료로 널리 사용되고 있다. 소유래 성분 원재료에 다양한 바이러스가 오염된 사례가 있기 때문에 소유래 물질을 원재료로 사용한 제제의 바이러스 안전성 검증이 필수적으로 요구된다. Bovine adenovirus type 1(BAdV-1)은 소에게 가장 흔하게 감염되는 바이러스 중의 하나이다. 소유래 물질을 원재료로 하는 생물의약품, 조직공학제제, 세포치료제, 의료기기 등에서 BAdV-1 안전성을 확보하기 위해, 세포주, 원재료, 제조공정, 완제품에서 BAdV-1을 정량적으로 검출하고, 제조공정에서 BAdV-1 제거 검증을 위한 시험법으로 활용이 가능한 TaqMan probe real-time PCR 시험법을 확립하였다. 세포배양법에 의한 감염역가와 비교한 결과, real-time PCR 검출한계는 $7.44{\times}10^1\;TCID_{50}/ml$이었다. 확립 된 시험법의 신뢰성(reliability)을 보증하기 위해 시험법 검증을 실시한 결과, 특이성(specificity)과 재현성(reproducibility), 완건성(robustness)이 우수함을 확인하였다. 확립된 real-time PCR을 생물의약품 제조공정 검증에 적용할 수 있는지 확인한 결과, 인위적으로 BAdV-1을 오염시킨 Chinese Hamster Ovary(CHO) 세포주에서 BAdV-1를 정량적으로 검출할 수 있었다. 확립된 시험법을 항체의약품 생산용 CHO 마스터 세포주와 소유래 type 1 collagen에서 BAdV-1 검출 시험에 산업적으로 적용하였다. 위와 같은 결과에서 확립된 BAdV-1 real-time PCR 시험법은 감염역가 시험법과 같은 생물학적 시험법을 대신할 수 있는 신속하고, 특이성과 민감성이 우수한 시험법임을 확인하였다.