국내 사망률중 가장 높은 비율을 차지하고 있는 악성종양(惡性腫瘍)에 대하여 국내외적으로 다양하게 연구되고 있다. 그러나 아직까지도 종양(腫瘍)을 치료하기 우하여 수술요법(手術療法) 방사선요법(放射線療法) 면역요법(免疫療法) 화학요법(化學療法) 등의 많은 치료법들을 개발하고 있지만 종양(腫瘍)에 대한 치료원칙이나 치료약물에 대하여서는 아직까지 미흡한 것이 국내의 현실이다. 현재 일반적으로 항암제(抗癌劑)를 이용한 화학요법(化學療法) 등이 사용되고 있지만 이에 따른 부작용(副作用)이 많아 항암제(抗癌劑)와 한약재(韓藥材)를 병용투여(倂用投與)함으로써 부작용(副作用)을 최소화하고, 이에 따라 한약재(韓藥材)가 정상세포(正常細胞)에 영향을 미치며, 암종세포(癌腫細胞)에는 영향을 미칠 것으로 사료되어 관찰한 결과 유의성(有意性)이 있어 보고하게 되었다. 그리하여 수종(數種)의 한약재중(韓藥材中) 청열작용(淸熱作用)과 활혈화어(活血化瘀)작용이 있는 대극(大戟)과 목단피(牧丹皮)를 인체의 피부암세포(皮膚癌細胞)인 A431 세포(細胞), 자궁암세포(子宮癌細胞)인 HeLa 세포(細胞), 급성백혈병세포(急性白血病細胞)인 MOLT-4 세포(細胞), 만성골수성백혈병세포(慢性骨髓性白血病細胞)인 K562 세포(細胞)에 대한 세포독성(細胞毒性)과 항암제(抗癌劑)인 mitomycin C와 병용(倂用)처리결과를 MTT assay를 통하여 관찰하였다. 또한 정상세포(正常細胞)에 대한 세포독성(細胞毒性)을 검색하기 위하여 마우스 섬유아세포(Balb/c 3T3), 마우스 흉선(胸腺) 및 비장세포(脾臟細胞), human lymphocyte에 미치는 세포독성(細胞毒性)을 검토하였다. 대극(大戟)과 목단피(牧丹皮)는 A431 세포(細胞)와 K562 세포(細胞), 마우스 섬유아세포(細胞)인 Balb/c 3T3 세포(細胞) 및 mitomycin C와 병용처리(倂用處理)하였을 때 mitomycin C를 단독처리하였을 때보다 A431 세포(細胞)의 증식을 억제하였고, 백선피(白蘚皮)와 천산갑(穿山甲)은 human lymphocyte의 증식을 촉진하였다.
소양인(少陽人) 인동등지골피탕(忍冬藤地骨皮湯)이 중소(中消) 합병증(合倂症)에 미치는 영향(影響)을 살펴보고자 하였고 결과(結果)는 다음과 같다. 1. 장관운동(腸管運動)을 억제(抑制)하였다. 2. Acetic acid에 의한 writhing syndrome을 억제(抑制)하였다. 3. Evans blue에 의한 모세혈관투과성(毛細血管透過性)을 억제(抑制)하였다. 4. Histamine에 의한 급성족부종(急性足浮腫)을 억제(抑制)하였다. 5. Cotton pellet에 의한 육아종(肉芽腫) 형성(形成)을 억제(抑制)하였다. 6. 흉선세포(胸線細胞) 및 비장세포(脾臟細胞)의 세포생존율(細胞生存率)을 증가(增加)시켰다. 7. 흉선세포(胸線細胞)로부터 ${\gamma}-IFN$ 및 IL-2의 분비(分泌)를 억제(抑制)하였다. 8. 비장세포(脾臟細胞)로부터 IL-4의 분비(分泌)는 증가(增加)시켰으나, $TNF-{\alpha}$ 및 $IL-1{\beta}$의 분비(分泌)는 억제(抑制)하였다. 9. 복강(腹腔) 대식세포(大食細胞)로부터 $TNF-{\alpha}$, $IL-1{\beta}$ 및 nitric oxide의 분비(分泌)를 억제(抑制)하였다. 10. 복강(腹腔) 대식세포(大食細胞)의 lucigenin chemiluminescence 및 FITC-conjugated E. cole engulfment를 촉진(促進)하였다. 이상의 실험(實驗) 결과(結果) IJTE는 장관운동(腸管運動)을 억제(抑制)하였으며, 진통(鎭痛) 및 항염작용(抗炎作用)을 나타냈고, 이들 작용은 면역세포(免疫細胞)로부터 $TNF-{\alpha}$, $IL-1{\beta}$ 및 nitric oxide의 생성(生成)을 억제(抑制)하기 때문인 것으로 추정된다. 따라서 이러한 기전(機轉)에 의하여 인동등지골피탕(忍冬藤地骨皮湯)은 중소(中消) 합병증(合倂症)의 하나인 염증(炎症)을 억제(抑制)하는데 유효(有效)한 것으로 사료(思料)된다.
28개의 아미노산으로 이루어져 있는 Ghrelin은 위 기저부의 X/A-유사 신경내분비 세포에서 주로 합성 분비되는 물질로 음식의 섭취나 비만, 에너지 항상성 등을 조절하는 역할을 하며, 이러한 Ghrelin 활성화는 수용체인 G-protein coupled growth hormone secretagogue receptor-1a (GHS-R1a)와 결합을 통해 일어난다. 최근 보고된 자료에 따르면, ghrelin과 수용체는 위나 시상하부, 뇌하수체 등뿐만 아니라 T 세포나 단핵구 및 대식세포 등 면역 세포에서도 생성되며, 염증반응을 유도하는 사이토카인의 생성을 억제하는 역할을 한다. 또한 흉선의 퇴화 등 면역기관에 있어서도 중요한 호르몬으로 보고되고 있지만 그 기전이나 기능에 대한 연구가 아직 미미한 실정이다. 본 연구에서는 흉선에서 T 세포의 성숙이나 세포활성을 억제하는 물질로 알려져 있는 덱사메타손(Dexamethasone; DEX)으로 세포사멸을 유도시킨 흉선세포에 ghrelin을 처리하여 세포사멸 억제효과를 알아보았다. 그 결과 Ghrelin은 세포사멸에 중요 단백질인 Caspase-3와 PARP 및 Bim의 활성화가 in vivo 및 in vitro 모두에서 효과적으로 저해됨을 확인할 수 있었으며, 이러한 세포사멸의 억제효과는 ghrelin을 처리할 경우 DEX에 의해 활성화된 Glucocorticoid 수용체(GR)의 인산화의 억제와 HSP90 등과 복합체를 이루고 있는 GR이 활성화되면서 분해되는 과정을 억제시켜 결과적으로 핵 안으로 이동하는 과정을 억제하는 기전을 통해 나타남을 알 수 있었다. 이러한 결과 등을 통해 볼 때, ghrelin은 약물이나 체내 생리적 스트레스 등으로 인해 발생하는 흉선 내 면역세포들의 세포사멸에 도움을 줄 것으로 사료되며, 나아가 이로 인한 흉선위축을 보호할 수 있는 치료 후보물질로서의 연구를 기대할 수 있으리라 사료된다.
본 연구는 생체 내 세포 및 조직배양기로서의 면역결핍동물을 개발할 목적으로 proximal Ick promoter와 DT-A유전자를 이용하여 형질전환생쥐를 생산하였고 형질전환생쥐의 면역기관에서 Di-phteria toxin이 발현되어 T-cell이 결핍되는지를 분석하였다. 총 암수 2마리의 형질전환생쥐를 PCR과 South-ern blotting으로 분석하여 얻었으며 이식유전자의 copy수는 약 2∼3 copy가 정착된 것으로 확인되었다. 형질전환생쥐의 thymus, spleen, liver 조직을 분리한 후 total RNA를 추출하여 poly(dT) primer 와 DT 특이적 primer를 이용하여 RT-PCR수행 결과 형질전환생쥐의 thymus, spleen, liver에서 DT gene이 발현되고 있는 것을 확인할 수 있었다. 형질전환생쥐의 이들 조직간에 DT 발현량에는 큰차이는 없는 것으로 확인되었다. 형질전환생쥐의 혈액에서 적혈구, 백혈구 ,혈소판, 헤모글로빈 등이 정상생쥐보다 감소되었고 특히 백혈구수와 혈소판의 수가 크게 감소되어 있는 것으로 나타났다. 또한 형질전환생쥐의 혈액을 CD3 antibody를 이용하여 FACS 분석을 실시하여 형질전환생쥐의 혈액 중 T-cell이 수가 비정상적으로 줄어든 것을 확인할 수 있었다. 본 연구에서는 Ick-DT 형질전환생쥐에서 DT유전자의 발현에 의한 T-cell 결핍을 유도할 수 있는 것으로 나타나 이를 바탕으로 돼지를 이용한 사람의 이종장기 배양용 형질전환동물을 생산하여 응용될 수 있을 것으로 사료된다.
Background: The leukocyte common antigen (CD45) is a transmembrane-type protein tyrosine phosphatase that has five isoforms. Methods: We generated seven murine mAbs against human CD45 by injecting cells from different origins, such as human thymocytes, PBMCs, and leukemic cell lines. By using various immunological methods including flow cytometry, immunohistochemistry, and immunoprecipitation, we evaluated the reactivity of those mAbs to CD45 of thymus as well as tonsil lysates. Furthermore, we transiently transfected COS-7 cells with each of gene constructs that express five human CD45 isoforms respectively, and examined the specificities of the mAbs against the transfected isoforms. Results: In case of thymocytes, lymphocytes, and monocytes, all the seven mAbs demonstrated positive reactivities whereas none was reactive to erythrocytes and platelets. The majority of immune cells in formalin-fixed paraffin-embedded thymus and tonsil tissues displayed strong membranous immunoreactivity, and the main antigen was detected near 220 kDa in all cases. Among the mAbs, four mAbs (AP4, DN11, SHL-1, and P6) recognized a region commonly present in all the five isoforms. One mAb, YG27, recognized four isoforms (ABC, AB, BC, and O). Two mAbs, P1 and P14, recognized the isoforms that contain exon A encoded regions (ABC and AB). Conclusion: In this study, we confirmed that AP4, DN11, SHL-1, YG27 and P6, are mAbs reactive with the CD45 antigen whereas P1 and P14 are reactive with the CD45RA antigen.
Purpose : Investigate the effects of Haeganjeon water extract (HGJ) on immobilization-stress or cold-stress in C57BL/6J mice. Methods : Male C57BL/6J 30 mice of weighting 18${\pm}$2g, were divided into sixs groups including the immobilization-stress group(5heads), after immobilization-stress HGJ oral administration(500mg/kg) groups(5heads), cold-stress group(5heads) and after cold-stress HGJ oral administration(500mg/kg) groups(5heads). then we observed changes in the serum histamine and corticosterone level and changes immune system. Results : HGJ decreased the serum level of histamine and corticosterone increased by immobilization-stress or cold-stress. HGJ inhibited the release of histamine from mast cells. In addition, HGJ enhanced the cell viability of thymocytes decreased by immobilization-stress or cold-stress and decreased DNA fragmentation of thymocytes increased by immobilization- stress or cold-stress. Also, HGJ increased the cell viability of splenocytes decreased by cold-stress and decreased DNA fragmentation of splenocytes increased by cold-stress. HGJ decreased the population of thymic CD4+ cells increased by immobolization-stress. HGJ increased the population of B220+ cells decreased by immobilization-stress and decreased the population of Thy1+ cells increased by immobilization-stress. Also, HGJ decreased the population of splenic CD4+ cells increased by immobolization-stress. HGJ enhanced the production of ${\gamma}-interferon$ decreased by immobilization-stress or cold-stress and increased the production of interleukin-4 decreased by immobilization-stress. Furthermore, HGJ enhanced the phagocytic activity decreased by immobilization-stress or cold-stress and enhanced the level of nitric oxide decreased by immobilization-stress or cold-stress. Conclusion : HGJ may be useful for the prevention and treatment of stress via suppression of serum histamine and corticosterone level and enhancement of immune response.
This study was conducted to investigate the immuno-regulatory effect and apoptosis of L1210 and HL60 leukemia cells of methanol-extracts of Cornus kousa Burg(CKB). The proliferation of mouse splenocytes and thymocytes enhanced by the addition of $10\;{\mu}g/ml$ of CKB. CKB were administered p.o. once a day for 7 days in adult male BALB/c mice. CKB increased the splenic and thymic T lymphocytes, especially the number of $T_H$ cells markedly increased by the treatment of CKB. CKB treatment induced the apoptotic cell death in L1210 mouse leukemia and HL60 human leukemia cells. In addition, CKB also accelerated the phagocytic activity in peritoneal macrophages and increased the production of plaque forming cells. These results suggest that CKB have an various immuno-regulatory property.
Objective : The purpose of this study was to investigate effects of Taklihwajung-Tang on the proliferation of cancer cells land immunocytes focusing around combined effects of anticarcinogen. Materials and Method : We used Taklihwajung-Tang extract(THT) with freeze-dried, 8wks-old male balb/c mice and cancer cell lines(L1210, S-180) for this study. The proliferation of cells was tested using a colorimetric tetrazoliun assay(MIT assay). Results and Conclusion : The results of this study were obtained as follow ; 1. THT was significantly showed cytotoxicity on the L1210 cell lines and S-180 cell lines. 2. THT was significantly increased in the proliferation of thymocytes and splenocytes in vitro. 3. In combined effects of THT and vincristine(0.005mg/kg), THT was significantly inhibited proliferation of S-180 cell lines compared with positive control group. 4. In combined effects of THT and vincristine(0.005mg/kg), THT was significantly decreased in the weight of sarcoma compared with positive control group. 5. In combined effects of THT and vincristine, THT was significantly inhibited the hematological side reaction compared with positive control group. The present author thought that THT had action of anti-cancer and immune-activity, and in combined effects of vincristine, THT had recoverable effects on damage by anticarcinogen.
CS21 lymphoma cells that preferentially metastasize to lymph nodes after s.c. inoculation into BALB/c mice were grown in vitro in the presence of CA12 stromal cells isolated from lymph nodes. To obtain fundamental data on identification and characterization of the soluble factor(s) produced by CA12 stromal cells, we investigated the biological profile of the conditioned medium produced by CAl2 stromal cells. CAl2 conditioned medium has no affinity with Con A. CAl2 conditioned medium is associated with the proliferation of splenic T- and thymic T-cells with-out adding mitogen, although the conditioned medium cannot induce the differentiation of thymocytes. Additionally, we showed that H-7, not HA-1004 inhibits CS21 cell proliferation. These results suggest that CAl2 conditioned medium has a specific soluble factor(s) produced by lymph node stromal cells.
The purpose of this research was to investigate the immuno-modulatory effect and anti-carcinogenic property of Cordyceps militaris(CM) and/or Paecilomyces japonicus (PJ). The proliferation of cultured splenocytes and thymocytes were enhanced by the addition of 10 ㎍/ml of CM and/or PJ. B lymphocytes subpopulation in splenocytes were increased both CM and/or PJ administered(p.o. for 7 days)-mice. Thymic T lymphocytes, especially TH cells were significantly increased in CM-administered mice. CM and/or PJ treatment inhibited the cell viability of L 1210 mouse leukemia and HL60 human leukemia cells and induced the apoptosis of L1210 and HL60 cells. In addition, CM and/or PJ increased the hemaggutination(HA) titer against SRBC. These results suggest that CM and/or PJ have an immuno-modulatory action and anti-carcinogenic property.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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