An open reading frame (ORF) encoding a putative epoxide hydrolase (EHase) was identified by analyzing the genome sequence of Sphingophyxis alaskensis. The EHase gene (seh) was cloned and expressed in E. coli. To facilitate purification, the gene was fused in-frame to 6$\times$ histidine at the C-terminus. The recombinant EHase (rSEH) was highly soluble and could be purified to apparent homogeneity by one step of metal affinity chromatography. The purified SEH displayed hydrolyzing activities toward various epoxides such as styrene oxide, glycidyl phenyl ether, epoxyhexane, epoxybutane, epichlorohydrin, and epifluorohydrin. The optimum activity toward styrene oxide was observed at pH 6.5 and $35^{\circ}C$. The purified SEH showed a cold-adapted property, displaying more than 40% of activity at low temperature of $10^{\circ}C$ compared with the optimum activity. Despite the catalytic efficiency, the purified SEH did not hydrolyze various epoxides enantioselectively. $K_m$ and $k_{cat}$ of SEH toward (R)-styrene oxide were calculated as 4$\pm$0.3 mM and 7.42$s^{-1}$ respectively, whereas $K_m$ and $k_{cat}$ of SEH toward (S)-styrene oxide were 5.25$\pm$0.3 mM and 10.08$s^{-1}$ respectively.
EH의 catalytic nucleophile residue, His-Asp로 구성된 charge relay system, oxyanion hole 등의 EH 관련 conserved domain의 아미노산 공통 서열을 참고로 하여 G. westfalica megaplasmid로부터 putative EH를 선별할 수 있었다. Bioinformatics를 기반으로 스크리닝한 G. westfalica에 의한 라세믹 styrene oxide 기질에 대한 입체선택성 가수분해 반응에 있어 중요 반응 parameter들인, pH 및 온도 등이 초기 가수분해반응속도에 미치는 영향을 분석하고, 최적 회분식 반응조건을 결정하였다. 최적 반응조건인 pH 7, 반응 온도 $30^{\circ}C$, 생촉매량 40 mg의 조건에서 약 5시간 20분간 반응을 통해 20 mM 라세믹 기질로부터 광학순도 $100\%$ ee인 (S)-styrene oxide를 $36.5\%$의 수율로 얻을 수 있었다.
This work presents that carbon dioxide, which is a main contributor to the global warming effect, could be utilized as a selective oxidant in the oxidative dehydrogenation of ethylbenzene. The dehydrogenation of ethylbenzene over alumina-supported vanadium-antimony oxide catalyst has been studied under different atmospheres such as inert nitrogen, steam, oxygen or carbon dioxide as diluent or oxidant. Among them, the addition of carbon dioxide gave the highest styrene yield (up to 82%) and styrene selectivity (up to 97%) along with stable activity. Carbon dioxide could play a beneficial role of a selective oxidant in the improvement of the catalytic behavior through the oxidative pathway.
4-(p-Nitrobenzyl)pyridine (NBP)의 색깔변화를 이용한 epoxide hydrolase활성 측정법을 사용하여 다양한 미생물 세포유래의 epoxide hydrolase 활성을 측정하고 평가하였다. Epoxide hydrolase의 가수분해 반응에 의해 분해되고 남은 에폭사이드 기질에 의한 NBP alkylation 반응을 통한 색깔변화로 손쉽게 epoxide hydrolase 활성을 측정할 수 있었다. NBP 반응에서 triethylamine을 첨가하여 색깔반응 효율을 높일 수 있었으며, 10mM styrene oxide에 대한 최적 세포 사용량은 12.5mg/ml로 결정하였다. 본 연구에서 얻은 colorimetric assay조건에서 대용량의 미생물 후보군집으로부터 유용한 epoxide hydrolase를 가지는 신규 미생물을 효율적으로 선별할 수 있을 것으로 기대된다.
Cobalt (cyclam) complex has been successfully immobilized onto SBA-15, and proven to be an active catalyst for the epoxidation of styrene with tert-butyl hydroperoxide as a terminal oxidant. The selectivity for styrene oxide was observed to be up to 66% with 40% styrene conversion after 12h reaction time. The reversible redox cycle between Co(III) and Co(II) couple which was supposed to play key role during the epoxidation reaction was supported by a cyclic voltametry analysis. The textural properties of the catalyst was characterized by XRD, N2 adsorption-desorption, and TEM analysis.
Graphene oxide (GO)/carboxylated styrene-butadiene rubber (XSBR) nanocomposites with various contents of GO were prepared by a latex compounding method. It has been confirmed that the functional groups of GO and the hydrogen bonds between GO and XSBR are existed. It can be seen that the scorch time ($t_{s2}$), which is the measurement of incipient vulcanization of rubber, showed a delay after the addition of GO. Field emission scanning electron microscopy was employed to confirm the uniform dispersion of filler in the matrix. Indeed, with increasing fillers loading, the torque, tensile strength, thermal stability and crosslink density of obtained nanocomposites were improved. These results were correlated to the better dispersion of fillers through the rubber matrix.
본 연구에서는 carboxylated SBR latex와 zinc oxide가 SBS 복합재의 내마모성과 debris 특성 개선에 미치는 영향을 관찰하였다. 실리카를 첨가한 SBS 복합재는 실리카 입자간의 수소 결합에 의한 강한 filler-filler interaction으로 인한 낮은 분산성 때문에 기계적 강도, NBS 내마모성, debris 특성이 전체적으로 감소하는 것으로 나타났다. carboxylated SBR latex를 첨가한 SBS 복합재는 carboxyl group과 실리카의 silanol group간의 결합을 통하여 filler-filler interaction이 감소하고 실리카의 분산성이 증가하기 때문에 기계적 강도, NBS 내마모성, debris 특성이 향상되는 것을 확인 하였다. carboxylated SBR latex와 zinc oxide를 동시에 첨가한 경우, carboxyl group에 의한 실리카의 분산성 향상과 더불어 zinc ion과 carboxyl group간의 ion cluster 형성을 통하여 물성이 크게 증가하였다. Zinc ion과 carboxyl group간의 ion cluster 형성은 $1550{\sim}1650cm^{-1}$의 zinc carboxylate group stretch 피크의 FT-IR 분석 결과로 확인하였다. carboxylated SBR latex와 zinc oxide를 첨가한(SC-4) 복합재의 경우, 인장강도 $156kgf/cm^2$, 신장율 936%, 인열강도 59.4kgf/cm의 우수한 기계적 강도를 나타내었으며, NBS 내마모성은 338%로 가장 우수한 특성을 나타내었다. 또한, 표면 마찰 시에 debris 발생 역시 크게 감소하며, 표면 마찰 저항의 증가로 파도 형태의 마모 특성을 나타내었다.
온실 가스 가운데 하나인 이산화탄소를 줄이기 위한 연구의 일환으로 이산화탄소와 산화 스틸렌을 원료로 하고 zinc glutarate를 촉매로 하여 poly(styrene carbonate)를 합성하였다. 여러 가지 분광학적인(FT-IR, $^1H$-NMR, $^{13}C$-NMR, GC-MS) 분석결과 교대 공중합체임이 확인되었으며, MALDI법에 의하여 분자량($\bar{M}_n$)은 $5.0{\times}10^4$이며, 유리전이온도는 $88^{\circ}C$이고, 융융점은 $240^{\circ}C$로 밝혀졌다. 이 고분자를 열분해하면 고리형 카보네이트인 styrene carbonate가 생성되는 것도 확인하였다.
대장균 BL21(DE3)에 Caulobacter crescentus epoxide hydrolase (CcEH)를 발현시킨 제조합균주를 이용하여 광학수렴 가수분해(enantioconvergent hydrolysis) 반응을 수행하였으며 라세믹 에폭사이드 기질로부터 광학활성 diol을 생합성하는 조건을 최적화하였다. 반응최적화를 위하여, 계면활성제의 첨가와 반응온도가 생성물인 diol의 광학순도 및 수율에 미치는 영향을 분석하였으며 또한 생성물인 diol에 의한 EH의 가수분해활성 저해효과를 측정하였다. 재조합 CcEH를 생촉매로 사용한 광학수렴 반응에서 Tween 80을 2%(w/v)첨가하여 $10^{\circ}C$로 반응시켰을 때 20 mM 라세믹 styrene oxide로부터 광학순도 92%의 (R)-phenyl-1,2-ethanediot을 수율 56%로 얻을 수 있었다. 기질인 라세믹 styrene oxide를 50 mM 농도로 사용한 경우, 광학순도 87% (R)-phenyl-1,2-ethanediol을 77% 얻을 수 있었다. 생성물인 diol의 저해효과를 실험한 경우, 라세믹 phenyl-1,2-ethanediol, (R)-phenyl-1,2-ethanediol 및 (S)-phenyl-1,2-ethanediol은 10 mM 농도에서부터 재조합 CcEH의 가수분해활성을 현저하게 저해하는 것으로 나타났다. 위의 결과들로 볼 때 CcEH를 사용하여 높은 광학순도의 (R)-phenyl-1,2-ethanediol을 생성하기 위해서는 (R)-styrene oxide의 린치를 선택적으로 공격하는 동시에 생성물에 의해 저해를 받지 않는 partner EH를 개발하는 것이 중요할 것이다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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