This study reports the presence of mature and bi-sexual phase gonads in red spotted grouper, Epinephelus akaara after less than a year of cultivation in a commercial indoor tank and a net cage. In December 2018, juveniles were placed in an indoor tank and cultured for five months. In June 2019, the fish were transferred to a net cage and cultured until September. The rearing temperatures ranged from 19.86℃-24.65℃ in the indoor tank and 21.86℃-27.65℃ in the net cage. During the net cage culture period, specimens were randomly selected for histological gonad examination. The highest gonadosomatic index (GSI) value was measured in July (3.38±2.53), and dramatically decreased in August (0.44±0.21) and September (0.42±0.30). In July, some mature fish showed signs of vitellogenic stage oocyte development (vitellogenic and oil droplet stage oocytes), but immature fish were in an early developmental stage containing peri-nucleolus stage (PNS) oocytes. Bi-sexual phase gonads containing spermatocytes and spermatids were observed in the lumen and several PNS oocytes. By August and September, most specimens showed early-stage ovary development. However, mature testis (in August) and bi-sexual phase gonads (in September) were also observed. These results provide evidence for early puberty and hermaphroditism in the red spotted grouper.
이 연구는 한국 재래 닭에서 부화 후 고환 발달 과정을 명확하게 이해가기 위하여 부화 후 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 21, 28, 32, 44, 52 및 64주령(n=13마리/일령)의 한국 재래닭을 이용하여 수행하였다. 한국 재래 닭의 고환은 2.5 % glutaraldehyde를 이용하여 전신 관류 고정하고 조직 처리 과정을 거쳐 Epon-araldite에 포매하였다. 초박절편기를 사용하여 $1{\mu}m$로 절편한 다음 methylene blue로 염색하여 일반적인 조직의 변화상과 형태 계측을 일반적인 방법에 따라서 정자 생성을 측정하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 부화 후 1주령의 고환의 평균 무게는 0.015 g이었고 점진적으로 증가하여 21주령에는 3.93 g이고 21주령부터 64주령까지는 변화가 없었다. 곱슬정세관의 용적 치밀도는 1주령에 32.6%이었으나 점차적으로 증가하여 64주령에서는 92.89이었다. 1주령의 한국 재래 닭 고환 간질 조직은 고환 실질의 67.4%를 나타내었고 이러한 비율은 성장하는 동안에 점차적으로 감소하여 64주령에 7.11%를 나타내었다. 고환내 총 정자 생성은 18주령부터 28주령까지는 유의성있게 증가하였고 고환 1g당 정자 생성은 $18\sim28$주령까지는 유의성있게 증가하였고 $28\sim52$주령까지는 변화가 없었으나 64주령에 유의성 있게 감소하였다. 곱슬정세관의 평균 직경은 $1\sim21$주령까지 주령에 따라 점진적으로 증가하였고 곱슬정세관의 길이는 1주령에 0.34 m이었고 성장하면서 유의성 있게 증가하여 64주령에서는 72.2 m이었다. 곱슬정세관내 생식세포의 발달 단계는 다음과 같이 분류할 수 있다. 1) 정조세포($1\sim8$주령), 2) 정조세포, 정모세포($10\sim12$주령), 3) 정조세포, 정모세포, 원형의 정자세포($14\sim16$주령), 4) 정조세포, 정모세포, 정자세포 및 정자($18\sim64$주령). 이러한 결과를 종합하여 보면 한국 재래 닭에서 부화 후부터 성숙시기까지 고환 발달의 양상은 신생시기-성 성숙 이전기($1\sim12$주령), 성 성숙시기($14\sim18$주령) 및 성숙시기$(21\sim64)$로 나뉜다.
우리나라 동해안에 가장 많이 서식하는 조개류인 대복의 정소구조와 정자형성과정을 광학현미경과 투과전자현미경으로 조사한 결과는 다음과 같다. 대복의 정소는 소성결합조직으로 구성된 다수의 정자형성 소낭을 가진다. 동일한 정자형성 소낭 내에서는 여러 단계의 생식세포들이 관찰되었다. 정원세포들은 정자형성 소낭벽에 부착되어 있으며, 커다란 핵과 뚜렷한 인을 가진다. 정모세포에서는 연접사복합체와 골기체의 발달을 확인할 수 있었다. 정세포의 핵은 전자밀도가 높은 과립상의 염색질로 구성되며, 정자변태과정 동안에 핵의 응축 및 첨체와 편모의 형성을 관찰할 수 있었다. 정소 내에서 완숙 정자들은 다발을 형성하고 있으며, 두부, 중편, 미부로 구성되어 있었다. 두부의 길이는 약 $8.5{\mu}m$로, 첨체부와 핵 부위로 구분된다. 첨체는 길이 약 $1.1{\mu}m$의 총알형태였다. 두부와 첨체 사이에서는 미세섬유로 구성된 첨체기둥이 확인되었다. 중편에는 4개의 미토콘드리아를 가지며, 꼬리의 횡단면은 "9+2"의 구조를 나타냈다.
Fibricola seoulensis의 고환내 생식세포 및 정자의 미세구조를 관찰하고자 하였다. 실험감염 흰쥐로 부터 회수한 충체를 고정, 탈수 침투 포매, 중합 등의 통상적인 시료제작 과정을 거친 후 JEM 1200EX-ll(JEOL, Japan) 투과전자현미경으로 관찰하였다. 정원세포는 주로 고환의 내벽에서 관찰되었으며 비교적 큰 핵과 상대적으로 적은 세포질을 가지고 있었다. 정모세포는 핵의 량이 세포질 보다 조금 많았고 난형 또는 타원형의 핵을 가지고 있었으며 비교적 염색질의 량이 적었다. 초기의 정자세포는 핵에 비하여 세포질의 량이 훨씬 많았고 핵주위를 사립체들이 둘러싸고 있었다. 발육이 진전된 정자세포에는 끈 모양의 염색질이 나타났고. 세포질에서는 결정체구조가 나타났으며 핵 근처에서는 2개의 축사 뿌리와 중심체가 관찰되었다. 고환과 저정낭에서 무수히 많은 정자의 단면이 관찰되었다 횡단면을 형태학적 특징과 구성요소를 토대로 분류·조합해 본 바 6가지 형으로 대별되었고 정자 부위별 횡단면의 특징적인 형태를 관찰할 수 있었다. F. seoulensis의 정자는 2편모성이었으며 축사는 9쌍의 미세소관과 1개의 core complex로 이루어져서 전형적인 9 + 1형 구조이었다.
The pathological mechanism of impaired spermatogenesis after vasectomy has not been completely investigated. In this study, we examined pathological changes of the testis and the Fas-Fas ligand (FasL) mediated signaling pathway in apoptotic germ cell death after vasectomy in rats. Ten-weeks old Sprague-Dawley rats were underwent bilateral vasectomy and sacrificed after 1 day, 2 days, 3 days, 5 days, 1 week, 2 weeks, and 4 weeks of surgery and the testes were removed. Histopathological evaluation of spermatogenesis was performed by hematoxylin-eosin and periodic acid-Schiff-hematoxylin staining. To elucidate the pathophysiology of seminiferous tubule damage, terminal dUTP nick end labeling staining, electrophoresis assay of DNA fragmentation, and Western blotting analysis for Fas-FasL were performed. Relative weights of testes were decreased from 5 days after vasectomy. Germ cell degeneration were first found in the spermatogonia and spermatocytes at stages I-VI, and XII-XIV seminiferous tubules. Mean incidence of apoptotic germ cells after vasectomy progressively increased to peak in 5 days, and then gradually decreased to the control levels in 2 weeks after vasectomy. The expression of Fas-FasL reached maximum level at 5 days after vasectomy and then declined. In conclusion, impaired spermatogenesis after vasectomy associated with an increase in germ cell apoptasis, which is partly mediated by the activation of Fas-FasL.
This study was performed to examine the effect of 2,3',4,4',5-pentachlorobiphenyl (PCB#118) on testis of male rats. PCB#118 (20 mg/kg/week) in corn oil was intraperitoneally injected to adult male rats for 2, 5, 8 weeks. The body and testicular weights were measured at 3, 6, 9 weeks of PCB treatment. The morphological changes in the rat testes were then analyzed by light microscopy (LM) and transmission electron microscopy (TEM). The results showed that PCB#118 caused significant change in the body weights and testicular weights. Moreover, the morphological studies that were conducted on the PCB-treated rats revealed that the number of spermatocytes and spermatids in their seminiferous tubules decreased than control group (LM). The nuclear membrane was damaged when PCB was administered to them for 9 weeks (TEM). These results suggest that the reproductive function of the adult male rats is sensitive to PCB#118, and that may affect the testicular morphology of adult male rats.
Objectives : This research was executed to verify antitumor effect and protective effect on doxorubicin(Doxo)-induced toxicity of Cultivated Wild Ginseng(CWG) and synergic effect of CWG with Doxo in B16/F10 melanomas-bearing C57BL/6 mice. Methods : To evaluate protective effect on doxorubicin(Doxo)-induced toxicity and enhancing effect on the antitumor activity of Doxo, CWG water extract(0.5 ml) was intraperitoneally injected for 10 days, in combination with intraperitoneal injection of Doxo(4 mg/kg) on days 12, 16, 19, to mice subcutaneously inoculated with $2{\times}10^6/ml$ B16/F10 melanoma cells. In order to investigate antitumor effect of CWG, CWG water extract(0.5 ml) was intraperitoneally injected for 10 days to mice subcutaneously inoculated with $2{\times}10^6/ml$ B16/F10 melanoma cells. Results : The body weights of melanoma-bearing mice increased following B16/F10 cells inoculation. In contrast, such an increase in body weights was significantly attenuated by Doxo administration. Whereas CWG inhibits the decrease in body weights induced by Doxo. The tumor volume and tumor weights of melanomas-bearing mice dramatically increased following B16/F10 cells inoculation, In contrast, such an increase in tumor volume and tumor weights were significantly attenuated by Doxo or CWG administration. But the synergic effect of CWG with Doxo was not observed. The reduction of cellularity of seminiferous epithelia, level of spermatogonium and spermatid induced by Doxo was recovered by CWG administration. BrdU labeling index of spermatogonium was remarkably decreased in Doxo group but was no change in CWG group. Whereas the incidence and intensity of BrdU labelled spermatocytes and spermatids were increased by CWG administration than those of Doxo group. Conclusions : The obtained results suggest that CWG have antitumor effect and protective effect on doxo-induced testicular toxicity. This effect might be mediated through the supplementation of vital energy.
Phosducin (PDC) is a photoreceptor cell-specific protein that is phosphorylated by cyclic nucleotide-dependent protein kinase. PDC and PDC-like proteins (PDCL, PDCL2, and PDCL3) are members of a conserved family of small thioredoxin-like proteins that modulate the ${\beta}$- and ${\gamma}$-subunits of G-proteins. In mammals, Pdc, Pdcl, and Pdcl3 genes show ubiquitous expression; however, Pdcl2 gene expression is limited to the testis and ovary. The aim of the present study was to examine the expression patterns of chicken Pdcl2 (cPdcl2) during testicular and ovarian development. Protein sequence comparisons performed using the CLUSTAL X program revealed that the amino acid sequences and potential phosphorylation sites of cPDCL2 and mammalian PDCL2 proteins were highly conserved. Quantitative real-time PCR analysis revealed that cPdcl2 was differentially expressed in the testis and ovary. Specifically, cPdcl2 expression was detected at low levels in the ovary at all time points. In the testis, cPdcl2 expression was detected at low levels until 5 weeks of age. At 8 weeks of age, however, cPdcl2 showed increased expression levels in the testis. Using in situ hybridization, we detected high levels of cPdcl2 expression in the testis, particularly in the spermatocytes and round spermatids. In summary, our data describe expression patterns of germ cell-specific Pdcl2 during testicular and ovarian development in chickens.
본 연구는 생쥐의 고게정관내에 존재하는 분화단계의 정자세포를 발생단계별로 분리하여, 체외에서 단기간 배양체계를 확립하기 위하여 실시하였다. 8주령 이상된 생쥐의 정소로부터 정소막을 제거시킨 후, collagenase (1mg/ml), trypsin(2.5mg/ml)를 처리하여 곡세정관을 간질세포와 분리하여 배양액에 부유시켰다. 부유세포는 Celcep장치를 이용하여 세포크기와 밀도 차이에 의해 분화 단계별로 분리하였다. 회수된 세포의 균질성은 haematoxylin/eosin 또는 orcein으로 염색한 후, 광학현미경하에서 확인한 결과 약 85% pachytene spermatocyte와 round spermatid을 성공적으로 분리해냈다. 따라서 sedimentation velocity에 의해서 생쥐의 spermatogenic cell의 발달단계별 분리가 가능함을 알 수 있었다. 이러한 방법으로 분리된 pachytene spermatogenic cell들은 DMEM 배양액에서 6일 이상 배양한 결과 약 36%의 생존율을 보였다. 따라서, 분화단계별 정자 세포의 분리 및 배양체계의 확립은 웅성생식세포의 발생과정에 따른 생리 또는 분자생물학적 현상을 규명함은 물론 세포융합기술의 이용에 의한 형질전환동물 생산에의 응용을 통해 가축에 있어서의 형질전환 생산효율의 개선에 기여할 수 있으리라 사료된다.
Objective: The aim of this study was to investigate the morphological aspects of testicular tissue before and after freezing-thawing by light and transmission electron microscopy. Methods: Tissue biopsies were carried out on mouse testis for freezing. Samples in medium containing 20% glycerol were frozen by computer-controlled freezing program. The effect of freezing-thawing on the structural change of testicular tissues were examined by light and electron microscopy. Results: The freezing-thawing procedure had no significant effect on tubular diameter. However, it caused folding of the lamina propria, and notable damage to Sertoli cells, spermatogonia and spermatocytes. The cells were detached, desquamated from the basal lamina and had increased vacuolization. Round spermatids, elongated spermatids and spermatozoa were less affected, and most of them maintained their normal structure. Conclusions: The structure of spermatogonia, spermatocyte and basal compartments in seminiferous epithelium was significantly altered by freezing-thawing procedure of mouse testicular tissues. Thus, we need to develop a more reliable method for the cryopreservation of testicular tissues.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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