The protein profiles among Korean rice cultivars were assessed by total protein determination, solubility fractionation, SDS-PAGE analysis and scanning densitometry. In the extraction of protein, the SDS/urea system at a neutral pH was more efficient than that at alkaline pH. The determination of total protein showed that the protein content was similar among cultivars, ranging from 87.9 to 92.7 mg/g dry weight. Additionally, the water/NaCl-soluble protein fraction, containing 14${\sim}$16 kDa albumin and 22 kDa globulin ${\alpha}$-globulin, was also similar among cultivars, with a range of 9.94 to 11.98 mg/g dry weight. The SDS-PAGE/densitometry of total protein showed that there was no discernable difference in proteins of higher molecular weights among various cultivars, whereas the amount of lower molecular weight proteins (14${\sim}$16 kDa) is somewhat variable among cultivars. Furthermore, SDS-PAGE analysis of water/NaCl-soluble and propanol-soluble fractions indicates that there is a discernible change in the content of albumin, globulin or prolamin among cultivars. Thus, the PAGE/densitometry method, preceded by solubility fractionation, is useful for examining differences in protein profiles of rice cultivars.
A protease inhibitor was fractionated from fish eggs using methods based on protein solubility. Fractionation efficiency was evaluated with regard to percent recovery and total inhibitory activity (U). The fractionation of protease inhibitor (PI) from egg extracts of skipjack tuna (ST, Katsuwonus pelamis), yellowfin tuna (YT, Thunnus albacores), and Alaska pollock (AP, Theragra chalcogramma) was performed by precipitation with cold acetone or ammonium sulfate (AS). Fractions exhibiting the strongest inhibitory activity contained 20-40% (v/v) cold acetone or 40-60% saturated AS fractions. AS fractionation was more effective in isolating PI than was precipitation with acetone. The total inhibitory activity and percent recovery of fraction obtained with AS 40-60% toward trypsin and $N{\alpha}$-benzoyl-L-arginine-p-nitroanilide (BAPNA) were 4,976 U and 24.2% for ST, 3,331 U and 38.1% for YT, and 4,750 U and 43.8% for AP, respectively. In comparisons against six commercial proteases, 40-80% AS fractions, made by combining the 40-60% and 60-80% AS fractions from fish egg extract, exhibited the strongest inhibition of trypsin when using a casein substrate. These results suggest that fish eggs act as serine protease inhibitors and may be useful for protease inhibition in foodstuffs.
Protease inhibitors (PI) of trypsin and papain as target proteases from the roe of bastard halibut Paralichthys olivaceus were fractionated out using ammonium sulfate precipitation (A), DEAE 650M anion exchange chromatography (D), and Sephacryl S-300 gel filtration (S). The recovery percentages of the fractions with the strongest inhibitory activity for each fractionation method were 13% for the A4 fraction, 21.2% for the D3 fraction, and 21.3% for the S2 fraction, with specific inhibitory activities of the fractions toward trypsin and casein of 168, 139, and 218 U/mg, respectively, while no inhibition of papain was observed. The $IC_{50}$ for the trypsin-specific substrate $N{\alpha}$-benzoyl-$\small{L}$-arginine-p-nitroanilide (BAPNA) was 0.65, 1.55, 2.26, and 2.85 mg/mL for the A4, S2, A3, and D3 fractions, respectively. These results suggest that chromatographic fractionation methods (D and S) based on the molecular mass and charge of the protein were more effective at fractionating PI than was ammonium sulfate precipitation based on protein solubility, and that the bastard halibut roe extract acts as a serine protease inhibitor. Therefore, the PI fraction from fish roe might be useful for inhibiting proteases in foodstuffs, and could constitute an alternative food-grade inhibitor for the surimi industry.
Chacterization of MMA/AN organosol copolymer and subsequent comparison with the prior art latex copolymers has been accomplished. By means of NMR analyses, we found both types of copolymers to be random. The GPC analyses show that the organosol copolymers have a singnificantly broader MW spread than latex copolymers. This is due to the low MW stabilizer which is present as a physical mixture. As a result, the MW distribution is bimodal. Fractionation of a typical organosol copolymer yields a low MW(33,000-100,000), MMA rich fraction and a high MW (250,000-330,000), AN rich fraction. Solubility-wise, the organosol copolymers are readily soluble in the lacquer solvent MEK to give a colorless film. The prio rart copolymers, hewever, were imcompletely soluble and gave yellow, hazy film.
본 연구는 폐 금속광산으로부터 발생한 중금속이 주변 환경으로 오염 확산되는 특성과 이를 중금속으로 오염된 토양의 효과적인 복원 방안을 모색하기 위하여 토양내 중금속의 거동 특성을 바탕으로 한 반응 특성을 조사하였다. 토양내 중금속의 이동성과 생물에 의한 흡수에 영향을 미치는 화학적 존재 형태를 중금속이 다량 함유되어 있는 충남 청양의 구봉 폐 금광의 광미와 인위적으로 중금속을 오염시킨 농경지 토양에서 중금속의 토양과의 화학적 결합 형태를 연속 축출법에 의해 분리하였으며, 그 순서에 따라 토양 내에서 다음과 같이 용해도와 이동성이 감소한다: Soluble fraction> exchangeable>carbonate>Fe-Mn oxide>organic>residual fraction. 광미중에 결합 부위에 가장 높은 친화력을 보인 Pb는 대부분 Fe-Mn Oxide와 Carbonate fraction에 존재하였고 이 두 Fraction에 각각 48.3%와 26.8% 나타났다. Cu와 Cd는 각각 organic과 carbonate fraction이 71.8% 42.9%로 가장 높게 나타났다. 이들 fraction은 비교적 이동성이 강한 fraction으로 중금 속의 오염 조사시 반드시 평가되어야 하며, 복원방안 결정시 반드시 고려되어야 할 것이다. 중금속을 인위적으로 흡착시킨 토양에 있어서 중금속은 대부분 Exchangeable, carbonate 그리고 Fe-Mn oxide fraction 흡착되어 있는 것으로 나타났다. 예산통에 있어서 흡착된 Pb는 이들 fraction에 91%가 존재하였고, Cu는 Fe-Mn Fraction에 30.4% 그리고 Cd는 exchangeable fraction에 67.9% 가 존재하였다. 월곡통에 있어서는 흡착된 Cd는 Exchangeable fraction에 93.2%가 존재하였고, Pb와 Cu는 대부분 exchangeable, carbonate와 Fe-Mn Oxide에 흡착되어 있었다. 따라서 토양내 이들 중금속이 가해질 경우 대부분 독성이 강한 오염원으로서 잠재적인 이동성과 생물학적 흡수가능성을 갖는 것으로 나타났다.
선화녹두(sunhwa-nogdu ; SH)와 재래종 녹두(conventional variety ; C) 2품종의 분리녹두단백(mungbean protein isolate : MPI)을 제조하여, 이들의 아미노산 조성 그리고 용해도에 의한 단백질의 분획 및 분획된 단백질의 전기영동 패턴을 연구하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 즉, MPI의 아미노산조성을 보면 MPI-SH, MPI-C 둘 다 glutamic acid, aspartic acid의 함량이 높게 나타났으며, 함황아미노산의 함량은 낮게 나타났다. 한편 MPI의 아미노산조성은 원시료인 MBF와 거의 유사함을 나타내었고, 두 품종간에도 큰 차이가 없었다. 그리고 MPI를 용해도에 의하여 분별정량 했을 때 $87.6{\sim}92.9%$가 수용성 성분이었으며, prolamin, glutelin, residue는 MPI-C에서 0.25, 1.13, 10.74%로 MPI-SH의 0.25, 0.91, 5.63%에 비해 각각 높게 나타났다. 또한, 전분획의 전기영동 패턴을 살펴본 결과 $6{\sim}10$개의 band를 나타내며 $43,000{\sim}68,000\;dalton$ 범위의 분자량에 집중하는 경향을 나타내었다.
본 시험에서 건초(티머시, 알팔파 및 클라인)와 짚류(톨페스큐 및 볏짚)의 buffer 용해도와 단백질 분획이 실시되었으며, 조사료 자원의 buffer 추출이 $In$$vitro$ 발효 성상, 분해율 및 가스($CO_2$ 및 $CH_4$) 생성량에 미치는 효과를 조사하였다. 다른 조사료에 비해 총 단백질 중 buffer 가용성 조단백질과 A fraction은 알팔파 건초에서 각각 61% 및 41.77%로 가장 높았으며 볏짚에서 가장 낮았다(각각 42.8% 및 19.78%). 총단백질 중 B1 fraction은 조사된 조사료간 비교적 큰 차이를 보이지 않았으나 B2 fraction에서는 다른 조사료(6.34~8.85%)에 비하여 톨페스큐짚(10.05%) 및 클라인 건초(12.34)%에서 다소 높은 수준을 보였다. 총 단백질 중 B3 fraction이 차지하는 비율은 톨페스큐짚에서 38.49%로 가장 높았으나 다른 조사료 자원 간에는 큰 차이가 없었으며, C fraction의 경우 볏짚에서 가장 높은 비율(15.05%)을 보였다. 모든 사료에서 배양 개시 후 3시간(P<0.01) 및 6시간(P<0.05)에서 buffer 추출 전에 비해 추출 후 배양액의 pH가 증가되었으며, 배양 6시간(P<0.05) 및 12시간(P<0.001)에서 다른 사료에 비해 티모시 건초 및 알팔파 건초로부터의 pH가 낮았다. 배양액의 암모니아 농도는 모든 배양시간에서 가용성 물질의 추출 전 후에 다른조사료에 비해 알팔파 건초에서 가장 높았으나 모든 사료의 추출효과는 배양 3시간(P<0.01)에서만 나타났다. 배양액의 총 VFA 농도는 배양 24시간까지 알팔파 건초에서 가장 높았던 반면 톨페스큐짚과 볏짚에서 가장 낮았다. 또한 모든 조사료에서 buffer 추출 전에 비하여 추출후에 총 VFA 농도가 감소되었다(P<0.01~P<0.001). Acetic acid ($C_2$)의 조성 비율에서는 배양 6시간까지 추출 전에 더 높았으나(P<0.001) 사료 간 차이는 없었다. Propionic acid ($C_3$) 조성 비율 역시 배양 개시 후 3, 24 및 48시간(P<0.001)에서 추출 전에 더 높았으며, 6 및 12 시간의 배양액에서 대부분 건초(티모시, 알팔파 및 클라인)와 짚류(톨페스큐짚 및 볏짚) 간 차이가 있는 것으로 조사되었다(P<0.05). 그러나 butyric acid ($C_4$) 조성비율의 경우 대부분의 배양시간에서 사료 간 차이는 없었다. 건물에서의 분해율 관련 parameter 중 a 값은 조사된 전체 조사료에서 buffer 추출 전이 추출 후에 비해서 높았으며(P<0.001), 다른 조사료에 비해 톨페스큐짚과 볏짚에서 크게 낮았다(P<0.05). 또한 b 값의 경우 역시 추출 전에 비해 추출 후에서 현저히 낮았으나(P<0.001) 사료 간 차이는 없었다. 볏짚을 제외한 조사료에서 추출 후에 비해 추출 전의 건물 유효분해율(EDDM)이 더 높았다(P<0.001). 조단백질에서의 a, b 및 c 값은 추출 전에 비해 추출 후에서 현저히 낮았으나(P<0.05) 사료 간 차이는 없었다. 조단백질 유효분해율(EDCP)에서는 다른 조사료 종류에 비해 톨페스큐짚과 볏짚에서 낮았다(P<0.05). 한편, NDF의 경우 a 값과 b 값(P<0.01) 및 NDF 유효분해율(EDNDF, P<0.001)은 추출 후에 비해 추출 전에 더 높았으나(P<0.01) 사료 간 차이는 보이지 않았다. 반추위미생물에 의해 사료분해과정 중 생성되는 $CO_2$ 량도 24시간 배양까지는 추출 전에 더 많았으며(P<0.05~P<0.001), 톨페스큐짚과 볏짚에 비해 건초 형태의 조사료로부터의 $CO_2$ 생성량이 더 많았다(P<0.05~P<0.01). 메탄가스($CH_4$) 생성량 역시 모든 배양시간에서 추출 전에 비해 추출 후에 크게 감소되었으며(P<0.01~P<0.001), 12~24시간을 제외하고는 짚류에 비해 건초에서 현저히 높은(P<0.05) 것으로 나타났다. 본 시험의 결과를 종합하면, 조사료 자원에 대한 buffer 용해도와 단백질의 분획이 $In$$vitro$ VFA 농도와 분해율 및 gas ($CO_2$ 및 $CH_4$) 발생량 간 상호 밀접한 관계를 보이는 것으로 여겨진다. 이에 따라 조사료 이용 효율 개선을 위해 조사료자원에 대한 buffer 용해도와 단백질 분획을 반추동물 TMR 조제에 활용할 필요가 있는 것으로 여겨진다.
한국산 두류중 대두를 제외한 팥, 녹두, 강남콩에 대한 일반성분의 분석, 용해도에 의한 단백질의 분별(分別) 정량(定量) 및 polyacrylamide gel disc electrophoresis를 수행한 결과는 다음과 같다. 1) 일반성분으로는 지방이 적어 1%미만이었고 탄수화물은 60% 내외로 많았으며 단백질은 $20{\sim}25%$ 이었다. 2) 단백질중 총 globulin 함량은 $46{\sim}59%$로 대두에 비해 적었고 녹두>강남콩>팥의 순이었다. Albumin은 대두와 비교할 때 강남콩만 비슷하였고 팥, 녹두는 떨어졌으며 대신 glutelin의 함량이 많아 $10{\sim}19%$의 범위에서 팥>녹두>강남콩의 순이었다. 3) 전기영동(電氣泳動) 결과 전(全)단백질을 pH 7.6 완충액으로 추출한 것은 팥, 녹두, 강남콩에서 각각 9, 12, 11개의 band를 보였으나 pH 4.8 완충액으로 추출한 것은 분리가 더 되 어 각각 13, 13, 12개의 band를 보였다. Water extract의 경우는 팥, 녹두, 강남콩에서 각각 10, 8, 9개의 band를 보였으며 이 중 albumin획분(劃分)은 각각 8, 9, 7개, globulin 획분(劃分)은 모두 4개의 band를 보였다. 세가지 두류의 globulin 획분(劃分)중 Rm 치 $0.05{\sim}0.07$사이의 band는 모두 water extract에서 나타나지 않았던 것으로 물에 녹지 않는 globulin 고유의 band인 것으로 생각된다.
Pot experiments were conducted to assess the applicability of ferric chloride ($FeCl_3$) as a washing agent for laboratory scale in-situ soil washing of paddy soil contaminated with Pb. During the monitoring period for nearly 90 days, the concentrations of Fe and Mn in the soil solution were lower than that of control soil due to lime ($Ca(OH)_2$) amendment for pH recovery. Lime amendment also affected solubility and fractionation of Pb into soil matrix. The result showed that Pb concentrations of soil solution were consistently lower than that of control soil, and the concentration in the exchangeable fraction in washed soil decreased from 13 to 2 mg/kg. There was no significant difference of biomass yield of rice plant in each pots, and Pb contents in rice roots and grains in washed soil decreased to 50 and 78%, respectively, of the control soil. Therefore, $FeCl_3$ could be used as an acceptable in-situ washing agent for agricultural paddy soil if appropriate soil pH management is subsequently practiced.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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