To prevent amnesic shellfish poisoning (ASP) resulting from the consumption of shellfish contaminated with domoic acid, the quantitative analysis of domoic acid is very important. We validated a high performance liquid chromatography (HPLC) method for accurate and precise quantification of domoic acid. A clear peak and the isolation of domoic acid resulted on injecting a 50% methanol extract of CRM-ASP-Mus-c mussel reference material using HPLC. The limit of detection of domoic acid under the established HPLC conditions was $0.10\;{\mu}g/g$, and the limit of quantification of the toxin under the same conditions was $0.25\;{\mu}g/g$. The intra-accuracy and precision for domoic acid in CRM-ASP-Mus-c were 90.7-95.7% and 0.28-22.25%, respectively. The inter-accuracy and precision for domoic acid were 89.1-97.1% and 1.7-4.1%, respectively. The mean recovery of domoic acid in methanol extracts from ten species of marine invertebrates was 88.6-1105.1%.
Cho, Sung Rae;Jeong, Sang Hyeon;Park, Kunbawui;Yoon, Minchul;Kim, Dong Wook;Son, Kwang Tae;Ha, Kwang Soo
Korean Journal of Fisheries and Aquatic Sciences
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v.54
no.4
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pp.404-410
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2021
Although, mouse bioassay for the monitoring of azaspiracids (AZAs) toxins in shellfish has been used previously, the reported method has low sensitivity and it is time-consuming. Recently, there is an interest in the quantitative analysis of AZAs using liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS). The purpose of this study is to verify the simultaneous analysis of AZAs in shellfish and tunicate in Korea using LC-MS/MS. To validate the method, linearity, limit of detection (LOD), limit of quantification (LOQ), precision, accuracy, and repeatability were determined. All standard compounds were analyzed within 7 min. The correlation coefficients (R2) of the standard solution was higher than 0.9995 (within the range of 0.8-10.0 ㎍/L). The LODs and LOQs of AZAs in shellfish were 0.08-0.16 ㎍/kg and 0.23-0.50 ㎍/kg, respectively. The accuracy and precision of the method for determining AZAs in shellfish were 87.1-93.0% and 1.23-4.91%, respectively. Consequently, the verified LC-MS/MS method is suitable to analyze AZAs in shellfish and tunicates in Korea.
KIM Young-Man;CHOI Su-Ho;KIM Sung-Joon;SUH Sang-Bok;PYUN Han-Suck;CHANG Dong-Suck;SHIN Il-Shik
Korean Journal of Fisheries and Aquatic Sciences
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v.29
no.6
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pp.893-899
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1996
The studies on the detoxification of paralytic shellfish poison (PSP)-infested blue mussels, Mytilus edulis and oyster, Crassostrea gigas were performed for using of available processing resource. Toxic blue mussel and oysters from Nampo in Masan Bay, Hachong in Koje Bay and Woepori in Koje were used for experimental samples. The toxicity of low toxic blue mussel $(A,\;84{\mu}g/100g;\;B,\;166{\mu}g/100g;\;C,\;295{\mu}g/l00g;\;D,\;557{\mu}g/100g)$ and oyster $(740{\mu}g/100g)$ were reduced below the regulation limit of PSP $(80{\mu}g/100g)$ or undetected level by mouse bioassay after boiling at $98^{\circ}C$ for 10 min and retorting at $115^{\circ}C$ for 70 min, while the toxicity of high toxic blue mussel $(E,\;8,760{\mu}g/100g)$ remained beyond the regulation limit after boiling and retorting at same condition. These results suggested that the regulation limit of PSP could be level up from $(80{\mu}g/100g)$ to about $160{\mu}g/100g$.
Kim, Young-Sang;Jayawardena, Thilina U.;An, Lu Yu;Je, Jun-Geon;Nagahawatta, D.P.;Liyanage, N.M.;Jeon, You-Jin
Journal of Marine Bioscience and Biotechnology
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v.12
no.2
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pp.108-114
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2020
A variety of shellfish species sold for human consumption are available for purchase in the domestic fish market. The microalgae families inhabit the ocean, where planktons supply the main nutritional resource for the growth of shellfish. Some phytoplanktons produce toxic compounds that are accumulated in shellfish and ultimately cause toxicity in humans. This article reports the cytotoxicity of commercially available shellfish species. Accordingly, hot water extract (HWE) and an aqueous fraction of 50% methanol extract (MEE-AF) showed no significant cytotoxicity on the two cell lines (i.e., HL-60 and Vero cell lines), but 50% methanol extract (MEE) in 3, 6 samples showed 50% cytotoxic effects on HL-60 cells, and 1, 4 samples showed 40%, 20% cytotoxic effects on Vero cells, respectively. In addition, their consequential dichloromethane fractions (MEE-DF) exhibited significant toxicities at the highest concentration (1,000 ㎍/ml) on HL-60 and Vero cells. Since the shellfish samples showed cytotoxicity in the dichloromethane fraction, it is possible that the dichloromethane fraction contains marine toxins. Further research will be needed to identify the toxic components from each sample.
Ha, Kwang-Soo;Lee, Ka-Jeong;Jeong, Yeon-Jung;Mok, Jong-Soo;Kim, Poong-Ho;Kim, Yeon-Kye;Lee, Hee-Jung;Kim, Dong-Wook;Son, Kwang-Tae
Journal of Food Hygiene and Safety
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v.33
no.5
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pp.404-411
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2018
To evaluate bacteriological and toxicological safety hygienic indicator bacterium and paralytic and diarrhetic shellfish toxins in the shellfish produced in Hansan Geojeman 2013-2017 were investigated. Fecal coliforms were < 18~330 MPN/100 g in 404 oyster samples. But all samples tested, did not exceed 230 E. coli MPN/100 g. Geometric mean of E. coli for oyster samples collected during major shellfish production period was 24.3 MPN/100 g, considerde stable results. Bacteriological quality of oysters collected from Hansan Geojeman meets the standard value based on shellfish hygiene of the Food Sanitation Act of Korea and also meets Grade A, according to classification of shellfish harvesting areas of the European Union. For toxicological evaluation of Hansan Geojeman, 532 oyster samples and 268 mussel samples as an indicator, were analyzed. Paralytic shellfish toxins were detected in the range of 0.42~2.29 mg/kg in eight mussel samples, and exceeded criteria in three samples from early to late April 2013. Diarrhetic shellfish toxin was detected in three of 120 samples, but it was revealed to be under regulation value (0.16 mg Okadaic Acid equ./kg). As a result of toxicological evaluation, paralytic and diarrhetic shellfish toxins were not detected in oyster samples, but it was found that mussel as an indicator species, exceeded the threshold value of paralytic shellfish toxin. Accordingly, sanitary surveys were continuously requested for food safety management of shellfish.
Ha, Kwang-Soo;Shin, Soon-Bum;Lee, Ka-Jeong;Jeong, Sang-Hyeon;Oh, Eun-Gyoung;Lee, Hee-Jung;Kim, Dong-Wook;Kim, Yeon-Kye
Journal of Food Hygiene and Safety
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v.32
no.6
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pp.542-549
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2017
To evaluate bacteriological and toxicological safety, the hygienic indicator bacterium and paralytic and diarrhetic shellfish toxins in the shellfish produced in the Kamakman Area from 2012 to 2016 were investigated. Fecal coliforms and E. coli of all 194 oyster samples tested did not exceed 230 MPN/100 g. The geometric mean of the fecal coliform analyzed with the oyster samples of harvesting period was 19.6 MPN/100 g, which was more stable than the non-harvesting period (26.5 MPN/100 g). For the toxicological evaluation of the Kamakman Area, 77 oyster samples and 350 mussel samples as an indicator were analyzed. Paralytic shellfish toxins were detected very low in the range of $40{\sim}46{\mu}g$/100 g in 13 mussel samples during late April and early June, but not in oyster samples. Diarrhetic shellfish toxin was detected in 2 of 180 samples, but it was found to be below the regulation value (0.16 mg OA equ./kg). Based on the bacteriological studies, it was confirmed that the shellfish produced in Kamakman area meets the standard of shellfish hygiene of the Food Sanitation Act and meets the Grade A of the shellfish production area of EU. As the results of the paralytic and diarrhetic shellfish toxin evaluation, it was confirmed that the Kamakman Area is also toxicologically safe for shellfish production.
The marine toxic dinoflagellate Alexandrium catenella has been implicated in numerous paralytic shellfish poisoning (PSP) events in many countries. Due to difficulties in rapidly identifying A. catenella, field-based study of this species has been problematic. The present study developed a TaqMan format A. catenella-specific probe for real-time PCR assay (specific to Korean genotype) based on LSU rDNA sequence information for studying geographic and temporal distribution of the species in surface sediments and water columns of Jinhae Bay, Korea. The field survey from 2007 to 2008 revealed that A. catenella occurred in most seasons at low densities, mostly below 1 cell $mL^{-1}$, and was more abundant in spring (maximum cell density of 2 cells $mL^{-1}$) when shellfish exceed the quarantine toxin level for PSP toxins in Jinhae Bay.
Nam, Ki Taek;Kim, Seok-Yun;Moon, Chang-Ho;Kim, Chang-Hoon;Oh, Seok Jin
Journal of the Korean Society of Marine Environment & Safety
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v.26
no.1
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pp.84-92
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2020
To supply a stable amount of standard material to detect paralytic shellfish toxin (PST), we examined possible increases in toxic content in Alexandrium catenella and A. pacificum using a light emitting diode (LED), which is one of the most eco-friendly and economical lighting method. When comparing the growth rates of organisms and wavelengths of light used, the half saturation constants (Ks) of red wavelength were higher than those of other wavelengths. In contrast, the Ks of blue wavelength were lower than those of other wavelengths. Moreover, when comparing the toxic contents and wavelengths of light used, red wavelength produced approximately 8 times more toxic content in A. catenella and approximately 3.2 times more toxic content in A. pacificum than other wavelengths. Thus, the toxic content present in the organism might be closely related to the Ks of light. The optimum light source to be used to ensure economically ef ective and productive growth in an Alexandrium culture system (photo-bioreactor) would likely consist of a two-phase culture, wherein a blue LED is used during the lag and exponential phases to increase growth rates, followed by the use of a red LED during late exponential and stationary phases to achieve increased PST yields.
At various times and places all over the world men have become ill and some have died after eating shellfish that were intoxicated with paralytic shellfish poison(PSP) caused by Protogonyaulax spp. In late March, 1986, two persons were dead by ingesting wild sea mussels, Mytilur edulis, grown at bottom of an anchored waste ship to be dismantled at Gamchun Bay, Pusan, Korea. The samples were collected from the bottom of the ship during April $1\~April$ 8 of the year to find the cause of the food poisoning accident. The toxicity was estimated by bioassay with ICR male mouse, while the toxins were extracted and characterized. The toxins were extracted with acidified $80\%$ ethanol. The extract was defatted three times with dichloromethane, treated with activated charcoal, and then purified by chromatography on Bio-Gel P-2 and Bio-Rex 70. The toxic fractions obtained were analysed by cellulose acetate membrane electrophoresis, thin layer chromatography and high performance liquid chromatogaphy. The range and the average of PSP-toxicity of the samples were $132\~295\;MU/g$, 203 MU/g respectively. The amount of PSP was $26.4\~58.9{\mu}g/g$ of whole meat in range and $40.6{\mu}g/g$ in average. The toxicity of the digestive gland of the samples was 9 times higher than that of edible meat (except digestive gland) as $439\~979MU/g$, and it was about $70\%$ in total toxin. The compositional analytical results of the paralytic shellfish toxin, Gonyautoxin $1\~4$ were the major part of the PSP and Saxitoxin and neosaxitoxin were detected as the minor component. It was concluded that the food poisoning accident was caused not by Saxitoxins but by Gonyautoxins.
Kyoungah Lee;Namhyun Kim;Jang Kyun Kim;Youn-Jung Kim;Jung Suk Lee;Young-Seok Han
Journal of Food Hygiene and Safety
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v.38
no.6
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pp.409-419
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2023
Okadaic acid (OA) group toxins, including OA and its analogs, such as dinophysis toxins (DTXs), have been reported to cause diarrheal shellfish poisoning (DSP). These toxins are primarily produced by dinoflagellates and are accumulated in bivalves. Recently, the presence of Dinophysis sp., a causative alga of DSP, has been reported along the coasts of Korea, posing a potential risk of contamination to domestic seafood and exerting an impact on both the production and consumption of marine products. Accordingly, the European Food Safety Authority (EFSA) and the World Health Organization (WHO) have established standards for the permissible levels of OA group toxins in marine products for safety management. Additionally, in line with international initiatives, the domestic inclusion and regulation of DTX2 among the substances falling under the purview of management outlined by the 2022 diarrheal shellfish toxin standard have been implemented. In this study, we reviewed the physicochemical properties of OA group toxins, their various exposure routes (such as acute toxicity, genotoxicity, reproductive and developmental toxicity), and the relative toxicity factors associated with these toxins. We also performed a comparative assessment of the methods employed for toxin analysis across different countries. Furthermore, we aimed to conduct a broad review of human exposure cases and assess the international guideline for risk management of OA group toxins.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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