In this study we developed the analytical methods for the determination of three neurotoxin; anatoxin-a, saxitoxin and neosaxitoxin using HPLC/FLD system and this analytical methods were applied to real sample; algae culture and algae extracts. For the HPLC/FLD analysis of anatoxin-a samples were concentrated on WCX(Weak Cation Exchanger) SPE and then anatoxin-a in concentrate was derivatized with NBD-F solution. Supernatant was injected on HPLC system. For the HPLC/FLD analysis of saxitoxin and neosaxitoxin samples were separated on the column and then derivatizied by post column reactor for fluorescen detection. For post column reaction of saxitoxin we feed two kinds of reaction solution; Oxidizing Reagent of which composition was periodic acid(7mM) in 50mM potassium phosphate buffer, pH 9 and acidifying reagent of which Composition was 0.5M acetic acid. The LOD value for anatoxin-a, saxitoxin and neosaxitoxin in HPLC/FLD method was 24.3 ng. $35{\mu}g/L$, $27{\mu}g/L$ respectively. We determined the anatoxin-a content of lyophilized anabaena flos-aquae and $20{\mu}g/g$ d.w. of anatoxin-a was detected. We analyzed saxitoxin and neosaxitoxin in algae culture media and extracts of lypopyllized algal cell cultured and that of Deachung reservior. Saxitoxin and neosaxitoxin in real sample were below the limit of detection. Although there are various water treatment processes for removing neurotoxins were suggested no process give simultaneous and complete removal of neurotoxins. It was cocluded that nanofiltration which reject material by size can be a process for removal of neurotoxins.
Cyanobacteria were dominant from June to September in the Nakdong River and the Hoedong Reservoir. Microcystis aeruginosa was dominant from June to September; Anabaena flos-aquae from June to August and Aphanizomenon flos-aquae from July to August. Cyanobacterial neurotoxins, Anatoxin-a and saxitoxin were analyzed by electrospray ionization-mass spectrometry with strains of Aphanizomenon flos-aquae NIES-81 and Anabaena flosaquae NIER-10002. Anatoxin-a was not detected from the cultured Anabaena flos-aquae nor from the wild samples. Low levels of saxitoxin were detected in the cultured Aphanizomenon flos-aquae however, those of field samples were below the detection limit.
Journal of the Korea Academia-Industrial cooperation Society
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v.14
no.7
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pp.3582-3588
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2013
Expressed sequence tag (EST) library was constructed from A. tamarense. Base sequences of EST clones were analyzed and saxitoxin biosynthesis-related genes were cloned. Sequences of 827 clones were analyzed and 564 EST were functionally clustered using Blast searches against GenBank. Main genes in the EST had functions on cellular organization, cell metabolism, energy, cell cycle and DNA processing, cellular transport and transport, cell rescue, defense, death and aging, and transcription. Moreover, expression of S-adenosylmethionine synthetase and H2A histone family genes were increased in the toxic A. tamarense. These results show that two genes could be a good biomarkers for the detection of saxitoxin biosynthesis in the A. tamarense.
Chang, Man;Lee, Gunsup;Moh, Sang Hyun;Shin, Kyoungsoon;Auh, Chung-Kyoon;Lee, Taek-Kyun
Journal of the Korea Academia-Industrial cooperation Society
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v.13
no.12
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pp.6208-6214
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2012
The most essential but missing components to understand and use toxic substances from marine microalgae are developing the fast, easy and economical determining technology for detecting it. In this paper we produced the antibodies against saxitoxin (STX). Mariculture keyhole limpet hemocyanin (mcKLH) and ovalbumin (OVA) were used as carrier proteins. mcKLH-STX conjugates were injected into the peritonial cavity of BALB/c mouse for immunization. After bleeding from mouse, anti-STX antiserum was isolated. Indirect enzyme-linked immunosorbent assays (ELISA) was performed to determine antiserum titer using the microtiter plate coated with free STX and OVA-STX. A goat anti-mouse IgG-phosphatase conjugate was used as secondary antibody to enable chromogenic reaction. Reactions of anti-STX antiserum were very specific on the OVA-STX and free STX. Sensitivity of anti-STX antiserum on STX was very high and STX detection limit was to be 64.9 ng/kg for indirect ELISA.
Studies on detoxification of Paralytic Shellfish Poison (PSP)-infested oyster, Crassostrea gigas were carried out using available processing resources. Changes of paralytic shellfish toxin components and specific toxicity during canning process were also investigated with high performance liquid chromatography (HPLC). Toxic oysters collected at Hachong in Koje Bay were used for experimental samples. The toxicity of oysters with range of 185-778 ug/100g was reduced below the quarantine limit of 80 ug/100g or not detected level by the mouse bioassay after canning process. The mole $\%$ of toxin components in the shucked oyster was in the order of 25.1 mole $\%$ of gonyautoxin 1, 19.2 mole $\%$ of gonyautoxin 3, 17.2 mole $\%$ of gonyautoxin 4 and 14.6 mole $\%$ of gonyautoxin 2. This sample had tracing amounts of Cl, C2, saxitoxin and neosaxitoxin. In the case of specific toxicity, the major toxins were consisted of gonyautoxin 1-4. The sum of gonyautoxin 1, 2, 3 and 4 was 80% of total toxicity of oyster. Saxitoxin and decarbamoylsaxitoxin were the more thermostable than any other toxin components.
Algae bloom occurred in reservoir in summer can cause taste and odor in water and disturb the flocculation and sedimentation processes in water treatment plant and cause sand filter plugging. It was also reported that microcystins, anatoxin and saxitoxin released from cyanobacteria had acute toxic effects on liver and nervous system. For these reasons, many advanced countries inclusive of WHO set the guideline for these toxins and cyanotoxins have been managed with regular monitoring in Korea as well. However, complex sample preparation steps such as a solid phase extraction (SPE) and derivatization are required with an existing analysis method with HPLC. We needed to improve an analysis method for low extraction efficiency and long sample preparation time. In this study, we have established a new LC/MS/MS method which can simultaneously determine 6 cyanotoxins (Microcystins-LR, Microcystins-RR, Microcystins-YR, Anatoxin-a, Saxitoxin, Neosaxitoxin) with only simple filtration step. When $75{\mu}L$ filterated sample was injected onto the LC-MS/MS, the recovery ranged from 86% to 112% and the MDL was $0.025{\sim}0.581{\mu}g/L$. We can make the MDL be lower than the guideline ($1{\sim}3{\mu}g/L$) of advanced countries with simple preparation.
Changes of paralytic shellfish toxin components and specific toxicity in blue mussel, Mytilus edu/is and oyster, Crassostrea gigas during canning process were investigated by high performance liquid chromatography (HPLC). The $mole\%$ of the frozen shucked blue mussel were in order of $27.5\;mole\%$ of gonyautoxin 1, $23.0\;mole\%$ of gonyautoxin 8 (C1) and $23.0\;mole\%$ of epi-gonyautoxin 8 (C2), while those of the frozen shucked oyster were in order of $29\;mole\%$ of C1, $22\;mole\%$ of C2, $16.7\;mole\%$ of gonyautoxin 2. Both samples had minor amounts of saxitoxin and neosaxitoxin. On the other hand, in case of specific toxicity, the major toxins were consisted of gonyautoxin $1\~4$ in both sample. The toxicity of gonyautoxin $1\~4$ were 88 and $84\%$ in blue mussel and oyster, respectively. According to the experimental results, C1, C2 and gonyautoxin 4 were very sensitive to heat treatment, while gonyautoxin 2 and saxitoxin were pretty heat resistant than any other toxin components.
Lee, Sang Yoo;Im, Ju Hee;Woo, So Young;Choi, Hwa Young;Park, Su Been;Yoo, Cha Nee;Chun, Hyang Sook
Journal of Food Hygiene and Safety
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v.35
no.6
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pp.521-534
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2020
Paralytic shellfish poisoning (PSP) occurs when saxitoxin (STX), which is produced by harmful algae (dinoflagellates) and then accumulated in bivalve shellfish by filter-feeding, is consumed by humans. With recent advances in analysis technology, it has been reported that dinoflagellates also produce a variety of analogues such as the gonyautoxin (GTX) group and the N-sulfo-carbamoyl toxin (C toxin) group, in addition to STX. Accordingly, CODEX and the EFSA are stepping forward to manage STX and analogues as STX groups requiring safety management. In Korea, the occurrence of dinoflagellates producing STX analogues has already been reported, and contamination of analogues (GTX group, C toxin group) in live mussels has also been reported. In this study, in order to provide the basis for systematic monitoring and safety management of STX and analogues, their physicochemical characteristics, occurrence of dinoflagellates, toxicity and toxic equivalency factor, analytical method and occurrence were widely reviewed. This review is expected to contribute to strengthening the safety management of STX and its analogues.
Proceedings of the Korean Society of Fisheries Technology Conference
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2002.10a
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pp.84-85
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2002
우리나라에서는 패류에 있어서 마비성패류독 함유량이 가식부 100g당 saxitoxin으로서 80$\mu\textrm{g}$이하로 기준을 정하고 국립수산과학원에서는 패류독의 발생 여부를 년중 감시하고 있으며, 특히 독소가 주로 발생하는 봄철에는 집중적으로 검사하여 패류독이 기준치를 초과하는 경우에는 채취 및 유통을 금지하여 패류의 안전성을 확보하고 있다. (중략)
Attempts were made to analyze the toxin composition of the toxic mussel Mytilus edulis galloprovincialis which were collected from aquaculture pond in Apr. 1988 in Hachung, Koje, southern Korea. The toxins were partially purified from the ethanolic extract of the mussel digestive glands by activated charcoal and Bio Gel P-2 column chromatography. HPLC analysis demonstrated that the toxin consisted mainly of gonyautoxin 1-4 (GTX 1-4), along with trace amounts of saxitoxin (STX) and protogonyautoxin 1-2 (PX 1-2).
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[게시일 2004년 10월 1일]
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