목 적 : 로타바이러스는 영유아에서 설사를 일으키는 주요 원인 바이러스로서 세계적으로 유행하며 국내에서도 해마라 유행하고 있다. 국내에서 유행하는 로타바이러스의 유전자형을 규명하고 이를 기초 역학자료 및 백신 개발에 유용한 자료로 사용함과 동시에 로타바이러스 감염 환자들의 연령, 계절적인 분포 및 임상양상을 조사하여, 최근의 국내 로타바이러스 감염의 역학변화를 알아보는 것이 본 연구의 목적이다. 방 법 : 2000년 9월부터 2001년 4월까지 마산파티마병원 소아과에 내원하거나 입원하는 환자들 중 대변 검체에서 Latex agglutination검사(Slidex Rota-Kit2, Bio Merieux, France)로 로타바이러스 양성 판정을 받은 환자들의 검체를 이용하였다. 환자의 검체에서 RNA를 추출한 후 추출된 RNA를 주형으로 하여 cDNA를 합성한 뒤 VP4, VP7에 대한 PCR을 실시하여 유전자형을 결정하였다. 결 과 : 1) 총 대상 환자들은 120명이었고 남자가 79명(65.8%), 여자가 41명(34.2%)이었다. 연령별로는 생후 2일에서부터 12세까지 분포하였고 2세이하 환자가 97%인 l16명으로 대부분을 차지하였다. 계절적인 양상은 9월, 10월 사이에는 산발적인 발생을 보이다가 12월부터 급격히 증가하여 익년 4월까지 환자의 발생을 보이는 분포를 보였다. 2) 전체 대변 검체 120개중에서 C형은 97개(80.8%)에서 결정이 되었고 P형은 102개(85%)에서 결정되어 120개 검체 중 l16개(97%)가 적어도 하나이상의 유전자형이 결정되었다. 3) p형은 P[4]가 77례(64.2%)로 가장 많았으며 P[6]가 22례(18.3%), P[8]가 1례(0.8%)이었다. 혼합감염은 P[4]/P[6]가 12례(10%), P[4]/P[8](0.8%) 1례로 나타났고 유전자형이 결정되지 않은 것이 7례(5.9%)이었다. 4) G형은 G2가 74례(61.7%)로 가장 많았고 G1이 17례(14.2%), G4, G1이 각각 1례였다. 혼합감염은 G1/G2, G1/G4, G1/G9, G8/G9이 각각 1례로 나타났고 유전자형이 결정되지 않은 것이 23례(19.2%)이었다. 5) 조합형에 대한 분석을 하면 P[4]G2가 62례(51.7%)로 가장 많았고 P[6]가 7례(5.8%), P[6]G2가 7례(5.8%), P[4]/P[6]G1가 4례(3%), P[4]/P[6]G2가 4례(3%), P[4]가 3례(2.5%), P[8]G2가 1례(0.8%), P[4]G4가 1례(0.8%)로 나타났다. 결 론 : 2000년에서 2001년 사이 경상남도 지방에서 다양한 로타바이러스의 유전자형의 유행이 있었고 조합형에 대한분석을 해보면 P[4]G2가 62례(51.7%)로 가장 많았고 P[6]G1가 7례(5.8%), P[6]G2가 7례(5.8%), P[4]/p[6]G1가 4례(3%), P[4]/P[6]G2가 4례(3%), P[4]G1가 3례(2.5%), P[8]G2가 1례(0.8%), P[4]G4가 1례(0.8%)로 나타났다. 이번 연구의 결과에서 국내에서 다양한 로타바이러스의 유전자형의 유행이 확인되었고, 역학이 변화하고 있음을 알 수 있었으며 유전자형의 결과는 향후 로타바이러스 백신의 개발과 도입에 있어 기초 자료로 사용되어질 수 있을 것이다. 로타바이러스는 특성상 변이가 잘 일어나 새로운 유전자형이 쉽게 나타날 수 있고 백신은 유전자형에 특이하게 작용하므로 추후 지속적인 로타바이러스의 유전자형에 대한 연구가 이루어져야 할 것으로 사료된다.
Bovine rotaviruses(A, 288, 55086 strains) isolated from fecal samples in Korea were propagated onto MA104 cells and were confirmed tentatively as G6, G8, and G10, respectively, by RFLP analysis. Full-length VP7 gene of these isolates was amplified by reverse transcriptase polymerase chain reaction(RT-PCR) using VP7 specific primers and cloned into TA vector. Nucleotide and deduced amino acid sequences of VP7 genes of the isolates were determined and compared with those of bovine rotavirus reference strains(NCDV; G6, UK; G6, Cody I-801; G8 and B223; G10). A, 288 and 55086 isolates showed high degree of nucleotide sequence homology with NCDV and UK(93% and 94%), Cody I-801(86%) and B223(97%), respectively, However, they showed 71~74% of nucleotide sequence homlogy with bovine rotavirus reference strains which belong to different serotypes. From the results of deduced amino acid sequence homology analysis, three isolates showed 94~96% of homology with the same serotype reference strains but 80~84% of homology with the different serotype reference strains. Three bovine rotavirus isolates, A, 288 and 55086 strains, were confirmed as G6, G8, and G10, respectively, by nucleotide and deduced amino acid sequence analysis.
Rotavirus A (RVA) is recognized as a major etiology responsible for the development of acute gastroenteritis in children worldwide. The purpose of the present study was to perform the molecular characterization of RVA. A total of 323 stool specimens collected from hospitalized children with acute gastroenteritis in Chiang Rai, Thailand, in 2016-2018 were identified for G- and P-genotypes through RT-PCR analysis. RVA was more prevalent in 2017-2018 (37.8%) than in 2016-2017 (23.2%). The seasonal peak of RVA occurred from March to April. G3P[8] was predominant in 2016-2017 (90.6%) and 2017-2018 (58.6%). Other genotypes including G1P[8], G8P[8], G9P[8], and mixed infections were also identified. G3P[8] strains clustered together in the same lineage with other novel human equine-like G3P[8] strains previously identified in multiple countries and presented a genotype 2 constellation (G3-P[8]-I2-R2-C2-M2-A2-N2-T2-E2-H2). Several amino acid differences were observed in the antigenic epitopes of the VP7 and VP8* capsid proteins of the equine-like G3P[8] compared with those of the RVA vaccine strains. The homology modeling of the VP7 and VP8* capsid proteins of the equine-like G3P[8] strains evidently exhibited that these residue differences were present on the surface-exposed area of the capsid structure. The emergence of the equine-like G3P[8] strains in Thailand indicates the rapid spread of strains with human and animal gene segments. Continuous surveillance for RVA is essential to monitor genotypes and genetic diversity, which will provide useful information for selecting rotavirus strains to develop a safe and effective RVA vaccine that is efficacious against multiple genotypes and variants.
Rotavirus and Norovirus are major causative agents of acute diarrhea and gastroenteritis. In our study, Each viral RNA was isolated from the feces of patients for viral diarrhea in Korea, respectively. And cDNA library were constructed using RT-PCR. Also, cDNAs encoding VP8 derived from Rotavirus and Capsid protein derived from norovirus were subesequently cloned and expressed in Echerichia coli as a fusion antigen. Molecular weight of fusion antigen was approximately 60kDa. Also, substantial overexpression was accomplished. We yielded egg yolk lgY which is potentially useful in controlling of Rotavirus and Norovirus which are one of the most prevalent pathogenic viruses.
목 적: 설사 환아에서 rotavirus 장염의 빈도는 매우 높으며 rotavirs에 대한 예방 접종이 실용화되었으나 국내 rotavirus 혈청형 분포에 대한 체계적인 연구 결과는 매우 드물고, 혈청형의 정확한 분포비율도 아직까지는 알려져 있지 않다. Rotavirus 설사 환아의 G 혈청형 분포를 RT-PCR 기법을 이용하여 조사하였다. 대상 및 방법: 1998년 6월부터 1999년 5월까지 설사를 주소로 내원 또는 입원한 소아 202명을 대상으로 하였다. 설사 시작 후 3일 이내의 대변을 채취하여 영하 $20^{\circ}C$의 냉동고에 보존하였다. EIA(TestPack Rotavirus, Abbott Laboratories)법으로 rotavirus 양성인 검체를 선별하였으며, 양성 반응을 보인 검체를 대상으로하여 RT-PCR을 이용하여 rotavirus G serotype을 결정하였다. 결 과: 총 202 검체 중에서 rotavirus 양성은 95례였으며, 이 중 serotype 판정이 가능했던 것은 50례이었다. G serotype 1이 5례(10%), 2 (G2)가 5례(10%), 3 (G3)가 14례(28%), 4 (G4)가 13례(26%), 9(G9)이 10례(20%)였으며, G1과 G9이 함께 있는 것과, G2과 G9이 함께 있는 것, G4와 G9이 함께 있는 경우가 각 1례씩 있었다. G8은 발견되지 않았다. 결 론: 국내에 기존에는 알려지지 않았던 G9이 상당수 있으며, 일반적으로 제일 많다고 알려진 G1보다 G3, G4가 더 많은 비율을 차지하는 등 이번 연구 결과는 기존에 발표되었던 자료와는 많은 상이점을 보인다. 이는 지역적인 요인 및 시기 상의 일시적인 현상이라고 볼 수도 있으나, 보다 정확한 역학적인 자료를 얻기 위해서는 보다 광범위하고 장기적인 조사가 필요할 것으로 판단된다.
목적: 한국에 백신이 도입된 이후 장염으로 입원한 소아에서 확인된 로타바이러스 유전형의 분포를 알아보고자 하였다. 방법: 2009년 8월부터 2013년 6월 사이에 급성 위장관염으로 입원한 소아에게서 수집된 201개의 로타바이러스 양성 대변 검체를 대상으로 로타바이러스 유전형 분석이 시행되었다. 결과: G 유전형은 G9 (33.3%), G1 (22.4%), G3 (15.9%), G2 (6.0%), G4 (3.0%), G10 (1.5%)이었고 혼합형(15.4%) 및 분류불능(2.5%)이 관찰되었다. P 유전형은 P[4] (45.3%)과 P[8] (43.8%)가 주로 검출되었고 혼합형(10.4%)과 P[2] (0.5%)가 발견되었다. G9P[4] 유전형이 2010/2011년에 자주 검출되었으나 이후에 G1P[8] 유전형이 주로 검출되었다. 결론: 로타바이러스 백신 도입 이후 2009-2013년 동안 G1, G3 및 G9이 번갈아가며 주로 검출되는 것을 확인하였다.
This study was conducted to see what types of bovine rotaviruses were isolated at Jedong farm in Jeju province and Seohwa farm in Chungnum province. The results were as follows. 1. Rotavirus was positively detected in 18 out of 39 fecal samples from calves with diarrhea in Jeju province and in 13 out of 18 fecal samples from calves with diarrhea in Chungnam province. 2. The electropherotype pattern of dsRNA for 31 viruses was shown to be 4 : 2 : 3 : 2 type like traditional group A and the imigration pattern of dsRNA was the long type like NCDV (G6), JBR (G6), B223 (G10) and KK3 (G10). 3. The serotypes of the 18 viruses of Jedong and 9 viruses of Seowha were shown to be group A, subgroup I, G6, and P1 by ELISA and PCR analyses. The serotypes of S-2, S-6, S-9 and S-12 viruses of Seowha were shown to be group A, subgroup I, G10, but was not shown to be P type. 4. The partial nucleotide sequence of VP4 of S-8 was 97% homology with that of BRV 033. VP4 of J-10 showed 96% homology with that of BRV 033 in nucleotide sequence.
로타바이러스는 선진국과 개발도상국의 영 유아에게 급성위장염을 일으키는 주요원인이다. 위장질환의 치료를 위한 유산균의 사용은 안전하며 간단하게 이용할 수 있다. 본 연구는 Sprague-Dawley 랫드에서 유산균혼합물의 로타바이러스에 대한 항 바이러스 효능을 조사하였다. 24마리의 새끼와 그들의 어미를 무작위로 네 그룹으로 나누었다; placebo, phosphate buffered saline (PBS)와 유산균 혼합물-1, 유산균 혼합물-2 그룹. 5일령인 모든 랫드에게 8 log plaque forming units의 농도로 로타바이러스를 접종하고 유산균혼합물-1, 유산균 혼합물-2 그룹은 4일 동안 하루에 한번 각각 8 log colony forming units의 농도로 유산균 혼합물을 경구 투여하였다. 대조군인 placebo와 PBS 그룹은 4일 동안 하루에 한번 각각 동일한 양의 placebo (말토오스, 폴리덱스트로스 포함)와 PBS를 경구 투여하였다. 항 바이러스 효능분석을 위해 Real-time quantitative PCR (RT-qPCR)과 소장융모관찰을 수행하였으며, 그 결과 유산균 혼합물-1, 유산균 혼합물-2 그룹의 소장무게는 대조군 보다 무거웠다. 대조군의 융모는 길이가 짧아지고 융모상피세포의 괴사가 일어났지만 유산균 혼합물-1과 유산균 혼합물-2 그룹에서는 이러한 형태학적 변화를 관찰할 수 없었다. RT-qPCR 분석에서는 유산균 혼합물-1과 유산균 혼합물-2 그룹의 분변샘플과 소장상피세포에서 로타바이러스의 VP7 유전자 레벨이 낮았다. 이러한 연구결과는 유산균혼합물이 로타바이러스 위장염에 대한 대체요법이나 치료에 유용하게 사용될 수 있음을 시사한다.
Monoclonal antibodies(MAbs) against field isolates of the bovine rotavirus A strain(G6), V strain(G10) and reference I-801 strain(G8) were produced and characterized. Six MAbs(4C2, 4D9, 5E1, 5E7, 5D5, 3E4) against A strain had neutralizing activity and reacted only with the G6 bovine rotaviruses determined by fluorescence focus neutralization (FFN) test. Otherwise, five neutralizing MAbs(1G2, 2G6, 5E2, 5E12, 5H7) against I-801 strain neutralized the G6 and G8 bovine rotaviruses. Five non-neutralizing MAbs(5F12, 7F12, 5E11, 2A11, 2B12) were VP6-specific and cross-reacted with all bovine and porcine rotaviruses examined by fluorescence antibody(FA) test. None of the MAbs reacted with bovie viral diarrhea virus(BVDV) and bovine coronavirus(BCV) determined by FA and FFN test.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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