• Journal of Plant Biotechnology
• /
• 제3권2호
• /
• pp.95-100
• /
• 2001

To select the section with shoot formation ability, the calli and shoot formation from three sections (first leaf including cotyledonary node, hypocotyl and cotyledon explants) of 5-days-seedlings of soybean were induced on MS medium supplemented with 1.0 mg/L BAP, 3% sucrose, and 0.3% gelrite for one month. The first leaf section exhibited the highest shoot formation rate (51%), followed the hypocotyl section (10%) and the cotyledon section (0%). The shoot formation rates and shoot number of the four excised sections (whole first leaf, a half of the first leaf, a third of the first leaf and only node) of the first leaf were also investigated on the same medium. A half of the first leaf explant and the third of the first leaf explant had higher shoot formation rates (76-80%) and numbers (3-4 / explants) than those in other two explants. Effects of six cytokinins (kinetin, zeatin, BAP, 2iP, PBA, and TDZ) on shoot formation were determined, using the half of the first leaf explants. Zeatin (1.0 mg/L) exhibited the highest in shoot formation rate (94%) and numbers (8 / explant). In addition, the combined effects of three cytokinins (zeatin, BAP, and TDZ; 0.5, 1.0, 2.0 mg/L, respectively) and an auxin (IAA; 0.0, 0.5, 1.0, 2.0 mg/L) were determined. The combination (1:1, v/v) of zeatin (1.0 mg/L) and IAA (1.0 mg/L) exhibited the highest in shoot formation rate (96%) and numbers (16 / explant), twice more than zeatin (1.0 mg/L) alone. The shoot cuttings were transferred and cultivated on the rooting media supplemented with only auxin, IBA at various concentrations. The highest root formation (8 / shoot) was achieved on the medium supplemented with 1.5 mg/L. After 4 weeks of cultivation, the plantlets with an extensive root system were transplanted in pots with a soil mixture of vermiculite and fine sand. Transferred to field, about 75% of the plantlets survived.

• Journal of Plant Biotechnology
• /
• 제34권4호
• /
• pp.293-298
• /
• 2007

Robinia pseudoacacia var. umbraculifera, commonly called umbrella black locust were regenerated after co-cultivation of internode segments with Agrobacterium tumefaciens which included yeast cadmium factor 1 (YCF 1) gene. The tolerance to cadmium and lead for plants can be increased by the YCF1 gene expression. Moreover, the recent studies have shown that YCF1 gene transgenic plants increase the accumulation of cadmium and lead into plant vacuoles. The effect of plant growth regulator such as 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D), ${\alpha}$-naphthaleneacetic acid (NAA), 6-benzyladenine (BA), and thidiazuron (TDZ) were studied to evaluate the propagation of plants through internode explants. The efficient induction of multiple adventitious shoots and callus were observed on a medium supplemented with 0.1 mg/L TDZ + 0.2 mg/L BA. To induce shoot elongation and rooting, regenerated shoots were transferred into basal MS medium without any plant growth regulator. Successful Agrobacterium tumefaciens mediated transformation was obtained by 20 min vacuum-infiltration with $50{\mu}M$ acetosyringone on the optimal multiple shoot induction medium with 30 mg/L hygromycin and 300 mg/L cefotaxime. To confirm the integration and expression of transgene, Polymerase Chain Reaction (PCR) and Reverse Transcriptase PCR (RT-PCR) were performed with specific primers. The frequency of transformation was approximately 18.94%. This study can be used to genetic engineering of phytoremediator.

• 식물조직배양학회지
• /
• 제26권2호
• /
• pp.85-91
• /
• 1999

고구마의 정단분열조직을 배양하여 생장조절제의 종류와 농도 및 정단분열조직의 크기에 따른 다아체 증식효과를 조사하였다. NAA와 BA 혼용처리의 경우 0.1 ㎎/L NAA에 2.0 ㎎/L BA혼용처리에서 '목포 29호'와 '산천자'의 경우 배양 30일 후에 100% shoot분화율을 보였고, 뿌리발생률은 '목포 29호'는 66.7%, '산천자'는 69.2%였으며 줄기의 기부 부분에서 형성되었다. Cytokinin류인 kinetin과 BA 0.5∼4.0 ㎎/L 단독처리에서 다아체 분화율이 좋았으며 발달된 shoot의 대부분은 배양 60일 이내에 뿌리발생과 더불어 정상적인 식물체로 재분화되었다. 반면에 '금시'에서는 cytokinin류 단용처리에서 분화된 shoot가 캘러스화되어 정상적인 shoot를 생산하지 못하였다. 캘러스로 덮인 다아체의 shoot가 1∼2마디로 신장된 shoot를 분리하여 4.0 ㎎/L BA 또는 kinetin 처리구에 계대배양하였을 때, 분할된 shoot의 대부분이 줄기의 기부에 캘러스가 형성되면서 계대배양 30일 후에는 정상적인 shoot와 뿌리를 가진 재분화된 식물체의 생산이 가능하였다.

• 식물조직배양학회지
• /
• 제28권4호
• /
• pp.227-230
• /
• 2001

내한성이 강하여 수원지역에서 재배가 가능한 참다래$\times$다래 교잡종의 기내번식은 액아배양과 캘러스 배양으로 증식이 가능한 것으로 나타났다. 액아에서 줄기유도는 St 배지에 0.2 mg/L BA, 3.0 mg/L GA$_3$처리로 4주마다 약 3배의 증식이 가능했다. 줄기의 발근은 기내발근보다 기외삽목이 매우 효과적이었으며 환경순화 후 포지에서 95% 이상 활착되었다. 한편 캘러스 유도는 엽육을 절편으로 MS및 B$_{5}$배지에 2,4-D 및 NAA 처리로 100%가능하였으며 처리 농도에 따른 차이는 없었다. 캘러스에서 줄기의 재분화는 NAA 처리로 유도된 캘러스에서만 가능하였다. 줄기의 재분화는 MS 배지에 3.0 mg/L. zeatin 처리로 평균 64% 가능했으며 정상적인 생장이 가능했다. 이상의 결과로 볼 때 새로운 키위 교잡종은 기내배양으로 대량번식이 가능할 것으로 사료된다.다.

• 식물조직배양학회지
• /
• 제28권2호
• /
• pp.97-101
• /
• 2001

동화산물의 분배 효율 개선을 통한 생산성 향상 가능성을 조사하고자 감자의 sucrose 수송자 유전자를 벼에 형질전환 하였다. 동진벼로부터 유도된 callus를 감자의 sucrose 수송자 유전자가 도입된 A. tumefaciens LBA 4404와 공동배양한 후, 선발배지에서 증식된 callus를 250 mg/L carbenicillin, 2 mg/L kinetin, 0.1 mg/L NAA가 첨가된 MS 배지에 옮겨 약2주 후부터 소식물체를 얻었다. Carbenicillin 250 mg/L 첨가된 MS 기본 배지에서 소식물체의 발근을 유도하여 재분화 식물체를 얻었다. 선발된 callus는 약 150%의 높은 식물체 재분화율을 보였다. 재분화 식물체에 대한 PCR 분석을 수행하여 감자의 sucrose수송자 유전자가 삽입된 형질전환 벼 식물체를 선발하였다. 선발된 형질전환 식물체에 대한 Southern blot 분석을 통하여 외래유전자인 감질 sucrose 수송자 유전자가 벼 genome 내에 안정적으로 도입되었음을 확인하였다.

• 식물조직배양학회지
• /
• 제27권3호
• /
• pp.169-173
• /
• 2000

Amaranthus hypochondriacus의 저장 단백질을 encoding 하는 AmA1 유전자를 RT-PCR 방법을 이용하여 분리하고 특성화하였다. AmAl 유전자를 담배에 형질전환 시키기 위해 CaMV 35S promoter와 3'NOS를 가지고 있는 식물 발현 vector에 subcloning 하고 이 재조합 vector를 이용하여 Agrobacterium-mediated형질전환 방법을 이용하여 담배에 도입시켰다 신초는 0.1 mg/L NAA, 1.0 mg/L BA, 100 mg/L kanamycin 그리고 250 mg/L cefotaxime이 첨가된 MS 선발 배지에서 선발했고, 선발된 신초는 식물 생장 조절제를 첨가 하지 않고 200 mg/L kanamycin과 250 mg/L cefotaxime이 첨가된 MS배지에서 뿌리를 유도하였다. 선발된 담배의 게놈내의 AmA1 유전자의 존재는 PCR 방법과 hybridization을 이용하여 확인되었고, AmA1 유전자의 발현은 RT-PCR방법과 Southern blot hybridization을 사용하여 확인되었다.

• 원예과학기술지
• /
• 제19권1호
• /
• pp.34-38
• /
• 2001

사과 M.9 자근대목의 효과적인 기내 급속 대량 번식법을 구명하기 위하여 본 연구를 수행한 결과, 신초 증식에 적합한 배지는 $1.0mg{\cdot}L^{-1}$ BA, $0.1mg{\cdot}L^{-1}$ IAA, $30g{\cdot}L^{-1}$ sucrose, $8g{\cdot}L^{-1}$ agar가 첨가된 MS 배지이며, 치상방법은 신초 정단부를 제거한 후 수평치상하는 것이 효과적이었다. 발근에 적합한 배지는 $0.5mg{\cdot}L^{-1}$ IBA, $20g{\cdot}L^{-1}$ sucrose, $8g{\cdot}L^{-1}$ agar가 첨가된 1/2 MS 배지였다.

• Journal of Plant Biotechnology
• /
• 제49권3호
• /
• pp.213-221
• /
• 2022

Wild garlic (Allium victorialis var. platyphyllum, AVVP) is a nontimber forest product used as an edible and medicinal vegetable. AVVP is usually propagated form offspring bulbs but it takes a long time to harvest. Using tissue culture technology could overcome this problem. This study investigated the optimal conditions for shoot multiplication, root growth, and plant growth by scooping AVVP bulbs. AVVP bulbs harvested from Ulleung Island, Korea, the main producer of AVVP, were surface-sterilized and used for in vitro propagation. Shoot multiplication was performed by the scooping method. More than five multiple shoots were induced from scooped tissue in Quoirin and Lepoivre (QL) medium containing plant growth regulators (PGRs); the maximum number of multiple shoots were induced from scooped tissue in QL medium containing 0.45 μM thidiazuron (TDZ) after 16 weeks of culture. Roots were induced directly at the base of the shoots in all treatments. In vitro rooting depended on the type of PGRs, and the best root-inducing treatment was QL medium containing 9.84 μM indole-3-butyric acid (IBA). Plants with in vitro roots were transferred to pots containing artificial soil and successfully acclimatized for 4 weeks. The acclimatized plants showed a survival rate of 80% after 20 weeks and gradually promoted growth depending on the acclimatization period. The results of this study will be of great help to AVVP dissemination through sustainable mass propagation.

• Journal of Plant Biotechnology
• /
• 제32권1호
• /
• pp.31-35
• /
• 2005

양파의 재분화 체계 확립을 위해 성숙된 양파의 종자로부터 성숙배를 적출한 후 2,4-D와 BA의 다양한 농도를 이용하여 체세포배발생 캘러스의 형성율을 조사하였다. 체세포 배발생 캘러스는 쉽게 부서지는 특성을 가지고 있었으며 비체세포배발생 캘러스는 물기를 많이 포함하고 있어 쉽게 구분이 가능하였다. 체세포배발생 캘러스는 picloram $2.5\;\cal{mg/L}$ 또는 $5\;\cal{mg/L}$가 단독으로 포함된 MS배지를 이용하여 $25^{\circ}C$ 암배양 4주 후 가장 높은 유도율을 나타내었다. 그러나 유도된 캘러스를 shoot로 재분화 시킨 결과 2,4-D와 BA $1\;\cal{mg/L}$가 혼합된 처리구에서 가장 높은 shoot 유기율을 나타내었다. 따라서 다른 처리에서 유도된 캘러스를 2,4-D와 BA $1\;\cal{mg/L}$가 포함된 액체배지에 현탁배양을 시도하였다. 현탁배양은 캘러스의 증가뿐만 아니라 캘러스의 cell cycle을 synchronized 함으로서 이후 형질전환이 용이할 것으로 판단되었다. 현탁 배양된 캘러스는 Kinetin $1\;\cal{mg/L}$가 포함된 1/2 MS 배지에서 60일간 광배양 하여 shoot 유기하였으며 유도된 shoot는 NAA $0.5\;\cal{mg/L}$가 포함된 발근배지에서 발근 후 순화하여 완전한 식물체로 재생할 수 있었다.

• 식물조직배양학회지
• /
• 제28권1호
• /
• pp.1-6
• /
• 2001

카사바 (Manihot esculenta Crantz, cv. MCol 22)의 마디 및 절간절편으로부터 부정근 발생이 분화결정되는 시기를 조사하였다. 1개의 액아를 가진 10mm 길이의 마디절편을 MS 기본배지에서 8일간 배양하면 직접 부정근이 발생되었으나, 액아를 갖지 아니한 절간절편은 동일한 배지상에서 부정근이 형성되지 않았다. 반면에 마디절편을 MS 기본배지에서 5일간 배양한 뒤, 마디절편의 중간부로부터 절단된 하부의 절간절편으로부터는 부정근이 발생되었다. 이에 따라 마디절편의 중간 부를 일정시간 단위로 절단하는 방법으로 조사된 분화결정 시기는 3∼5일이었다. 한편 절간절편을 여러가지 농도의 IBA가 첨가된 배지에서 일정 기간 배양한 후 MS 기본배지로 이식했을 때 부정근이 발생되는 시기는 옥신 농도와 배양기간 에 따라 달랐다. 0.5 mg/L IBA 첨가에서는 5일 이상 배양되어야 90% 이상의 절편에서 부정근이 발생되고, 1 mg/L IBA 첨가에서는 2.5일 이상 처리에서, 그리고 2mg/L IBA에서는 1.5일의 처리에서 90% 이상의 부정근이 발생되었다. 따라서 부정근 발생을 분화결정시킨 외래 옥신의 처리기간은 분화결정 시기이라기보다는 근원기 유도에 필요한 적정량의 옥신을 흡수축적한 기간으로 사료된다.