Nocardioides sp. J-326TK의 adenosine deaminase gene을 분리하기 위하여 genomic DNA를 제한효소로 무작위적으로 절단하여 pBluscript KS에 ligation시켰다. 또한 hu-man과 mouse, E. cali 등의 adenosine deaminase gene의 보존적인 부위를 primer로 합성을 하여 PCR reaction을 행하였다. Genomic DNA를 cloning시킨 pKSN60은 5kb정도의 DNA를 포함하고 있으며 sourthern hybridization 등의 여러 확인 실험을 통하여 adenosine deaminase gene을 포함하고 있다는 알았다. PCR product를 cloning시켜 형성된 recombinant plasmid를 PCR reaction의 primer로서 pTBN20를 sequencing을 행하였다. 그 결과를 다른 ade-nosine deaminase gene의 서열과 비교를 하였는데 미생물인 E. coli와는 nucleotide sequence는 99.5%, amino acid sequence는 98.9%의 homology를 나타내고 human과는 각각 59.5%, 46.8%의 homolosy를 나타내었다.
풍부한 식물의 화분을 이용하여 재조합단백질의 생산연구를 위하여 UreB 단백질 정보를 지닌 1.7 kb DNA를 Helicobacter pylori urease gene cluster를 지니는 pH808로보터 PCR을 통하여 증폭하고 이를 CaMV35S promoter에 연결하여 백합(Lilium longiflorum)화분내로 도입하고 기내배양을 실시하였다. 발아초기의 화분을 Agrobacterium과 함께 진공침윤시켜 ureB DNA를 형질전환시키고 kanamycin을 지니는 화분배지에서 16-24시간 배앵하여 완전한 화분관신장을 이루도록 하였다. 이들 형질전환화분의 유전자도입 및 발현을 분석하였으며 그 결과 기내배양하는 하분을 일회성의 단백질공장으로 이용할 수 있다는 가능성을 제시하였다.
The purpose of this study is to develop species-specific DNA probe for detection and identification of Prevotella intermedia (P. intermedia) G8-9K-3. This study procedure includes (1) whole-genomic DNA extraction of P. intermedia G8-9K-3 (2) construction of the genomic DNA library, (3) screening of strain-specific DNA probe by reverse dot hybridization, (4) confirmation of strain-specific DNA probe by Southern blot hybridization, (5) determination of nucleotide sequences of strain-specific DNA probe. Twenty-eight recombinant plasmids containing Hind III-digested DNA fragments of P. intermedia G8-9K-3 were obtained. Reverse Dot Hybridization and Southern blot analysis data showed that one of them, Pig3, could be P. intermedia G8-9K-3-specific DNA probe. This datum indicates that this Pig3 DNA probe could be useful in detection and identification of the P. intermedia G8-9K-3 strain.
Human CDX2 is known as a caudal-related homeodomain transcription factor that is expressed in the intestinal epithelium and is important in differentiation and maintenance of the intestinal epithelial cells. The caudal-related homeobox proteins bind DNA according to a helix-turn-helix structure, thereby increasing the structural stability of DNA. A cancer-tumor suppressor role for Cdx2 has been shown by a decrease in the level of the expression of Cdx2 in colorectal cancer, but the mechanism of transcriptional regulation has not been examined at the molecular level. We developed a large-scale system for expression of the recombinant, novel CDX2, in Escherichia coli. A highly purified and soluble CDX2 protein was obtained in E. coli strain BL21(DE3)RIL and a hexahistidine fusion system using Ni-NTA affinity column, anion exchange, and gel filtration chromatographies. The identity and secondary structure of the purified CDX2 protein were confirmed by MALDI-TOF MS, Western blot, and a circular dichroism analyses. In addition, we studied the DNA-binding activity of recombinant CDX2 by ELISA experiment and isolated human CDX2-binding proteins derived from rat cells by an immobilized GST-fusion method. Three CDX2-binding proteins were found in the gastric tissue, and those proteins were identified to the homeobox protein Hox-D8, LIM homeobox protein 6, and SMC1L1 protein.
KANG, DU KYUNG;KI WAN KIM;PYEUNG-HYUN KIM;SEUNG YONG SEOUNG;YONG HEE KIM;ICK CHAN KWON;SEO YOUNG JEONG;EUI-YEOL CHOI;KYUNG MEE LEE
Journal of Microbiology and Biotechnology
/
제8권4호
/
pp.369-377
/
1998
Rotavirus is a major cause of severe gastroenteritis in young children and animals throughout the world. The VP7 of rotavirus is thought to induce the synthesis of neutralizing antibodies and to be responsible for determining viral serotypes. The cDNA coding for the VP7 capsid protein of human rotavirus, obtained from Korean patients (HRV-Y14), was cloned and its nucleotide sequence was determined. Comparative analysis of the nucleotide sequences between VP7 of Y14 and that of other foreign isolates showed $92.7~95.2\%$ homology to G1 serotypes (RV-4, KU, K8, WA), $74.2\%$ homolgy to G2 serotype HU-5, $76.4\%$ homology to G3 serotype SA-11, and $77.6\%$ homology to G4 serotype A01321. These data suggest that HRV-Y14 can be classified as a G1 serotype. cDNA coding for VP7 of HRV-YI4 was subcloned into the baculovirus vector and the VP7 glycoprotein was expressed in insect cells. The expressed proteins in Sf9 cell extract and tissue culture fluid were separated on SDS-PAGE, and Western blot analysis with monoclonal antibody raised against the synthetic peptide containing 21 amino acids within the VP7 conserved region was performed. The molecular weight of recombinant VP7 was estimated to be 36 kDa which is about the same size as the native VP7. Addition of tunicamycin in the culture media caused a reduction of the molecular weight of the recombinant VP7 indicating that the expressed protein was glycosylated.
Kim, Sun-Young;Song, Eun-Joo;Chang, Keun-Hye;Kim, Eun-Hee;Chae, Suhn-Kee;Lee, Han-Soo;Lee, Kong-Joo
BMB Reports
/
제34권4호
/
pp.355-364
/
2001
Major human Nucleoside diphosphate kinases (NDPKs) exist as hetero-oligomers, consisting of NDPK-A and NDPK-B, rather than homo-oligomer. To investigate their biological function depending on the oligomeric structure in vivo, we characterized the biochemical properties of cellular NDPK. Cellular NDPKs, which are made up of a unique combination of isoforms, were purified from human erythrocyte and placenta. We found that cellular NDPK and recombinant isoforms NDPKs have their own distinct biochemical properties in autophosphorylation, stability toward heat or urea, and DNA binding. Cellular NDPK was found to have unique characteristics rather than the expected additive properties of recombinant isoforms. The mutations in the dimeric interface of NDPK-B (R34G, N69H or K135L) caused defective DNA binding and simultaneously reduced the enzymatic stability These results suggest that the oligomeric interaction could play a major role in the stability of catalytic domain and might be related to the regulation of various cellular functions of NDPK.
플라스미드 pKM101과 이의 돌연변이제 pSLA의 mutator 유전자를 subcloning하여 재조합 플라스미드 pJB200과 pJB210을 선별하였고, umuC36- uvrA6-(TK 610) 균주에 도입하여 UV와 MMS에 대해서 보호효과와 돌연변이율에 미치는 영향을 조사하였다. 재조합된 플라스마드는 UV와 MMS에 대해서 nonmutability인 umu- 균주에서 완전히 돌연변이율을 회복시켰고 보호효과를 크게 증가시켰다. 이 사실은 muc 유전자가 cloning된 재조합 플라스미드가 돌연변이원의 처리에 의해 효과적인 발현을 하며, muc 유전자 만으로도 pKM101의 기능을 나타낸다는 것을 확인하였고, pSLA의 muc 유전자가 그 효과에 었어서 높은 영향을 미쳤다. 또한 pKM101의 muc gene을 포함한 pJB210 은 recA - (JC2926) 균주에서 돌연변이 유발능에 영향을 미치지 못한 것은 muc 유전자가 recA 유전자에 의존함을 알 수 있었다.
To develope the novel baculovirus transfer vector, the p10 gene was cloned from the Bombyx mori nuclear polygedrosis virus (BmNPV) vB2 strain isolated from the B. mori larvae of sericultural farms. The novel transfer vector was constructed by using the p10 gene of BmNPV vB2 strain was 210 bp. The TAAG sequence at the -71 bp of upstream from translation initiator ATG and two polyadenylation signal site at the downstream from terminator TAA were also detected in the p10 gene. The 5' and 3' flanking region of the p10 gene amplified by PCR was cloned into pBluescriptII SK(+) and then transfer vector pBm10 was construceted. The 7.9 kb pBm10 was analysed by restriction enzymes and the map was confirmed. In order to determine the expression of foreign gene of pBm10, $\beta$-galactosidase gene was inserted in the SmaI site of foreign gene cloning site of pBm10. The pBm10 containing $\beta$-galactosidase gene was cotranfected wth genomic DNA of BmNPV vB2 into BmN-4 cells. The recombinant baculovirus expressing $\beta$-galactosidase was also produced polygedra in the infected cells. The results indicated that pBm10 is functional, suggesting that in the baculovirus expression vector system, the recombinant virus produced by pBm10 was effective by oral infection for the producing recombinant proteins in in vivo expression.
Thiostrepton 내성 유전자(tsr)를 포함하는 multi-copy 재조합 플라스미드 pJY7J2의 제한효소 절단지도를 작성하였다. pJY, 712는 Streptomyces에서 넓은 host range를 나타내었으며 cloning 목적에 사용할 수 있는 단일 BgtIl 제한효소 인식부위를 갖고 있었다. 플라스미드 pJY 712는 lethal zygosis(Ltz+) 현상을 보였다. pJY 712의 혁질전환빈도는 S. lividans에서 $5.0\times 10^{4}$ TFU였다. pJY 712의 Bell 제한효소 인식부위에 tyrosmase 유전자(mel)를 삽입하여 플라스미드 PJY713을 제조하였다. met 유전자를 포함한 재조합 플라스미드 pJY 714는 pJY 713의 일부분(1.9kb BgllI-BelI 단편)을 제거하여 제고하였다.
PARK JUNHO;YU SUNGRYUL;YOON JAESEUNG;BAEK KWANGHEE
Journal of Microbiology and Biotechnology
/
제15권6호
/
pp.1397-1401
/
2005
Bone morphogenetic protein-4 (BMP-4) is a signaling homodimeric molecule that acts as a morphogen to influence cell fate in a concentration-dependent manner. The limited supply of a pure preparation of BMP-4, due to very low level of their expression in vivo, makes it difficult not only to study the biological activities of BMPs, but also to use them as a clinical tool. For a large-scale production of BMP-4, human BMP-4 cDNA was expressed in Chinese hamster ovary (CHO) cells by a recently development vector system, which confers position-independent stable expression of the foreign genes. The CHO cell line expressing recombinant human BMP-4 (rhBMP-4) at the level of $7\;{\mu}g/ml$ could be obtained after stepwise selection with methotrexate. This level of expression is about 70 times higher than those previously reported. The partially processed form of BMP-4 as well as mature form could be detected, when the aliquots of culture media were analyzed by Western blot. The glycosylation pattern and biological activity of the rhBMP-4 were determined by glycosidase treatment and the induction rate of alkaline phosphatase in mouse osteoblastic cells.
본 웹사이트에 게시된 이메일 주소가 전자우편 수집 프로그램이나
그 밖의 기술적 장치를 이용하여 무단으로 수집되는 것을 거부하며,
이를 위반시 정보통신망법에 의해 형사 처벌됨을 유념하시기 바랍니다.
[게시일 2004년 10월 1일]
이용약관
제 1 장 총칙
제 1 조 (목적)
이 이용약관은 KoreaScience 홈페이지(이하 “당 사이트”)에서 제공하는 인터넷 서비스(이하 '서비스')의 가입조건 및 이용에 관한 제반 사항과 기타 필요한 사항을 구체적으로 규정함을 목적으로 합니다.
제 2 조 (용어의 정의)
① "이용자"라 함은 당 사이트에 접속하여 이 약관에 따라 당 사이트가 제공하는 서비스를 받는 회원 및 비회원을
말합니다.
② "회원"이라 함은 서비스를 이용하기 위하여 당 사이트에 개인정보를 제공하여 아이디(ID)와 비밀번호를 부여
받은 자를 말합니다.
③ "회원 아이디(ID)"라 함은 회원의 식별 및 서비스 이용을 위하여 자신이 선정한 문자 및 숫자의 조합을
말합니다.
④ "비밀번호(패스워드)"라 함은 회원이 자신의 비밀보호를 위하여 선정한 문자 및 숫자의 조합을 말합니다.
제 3 조 (이용약관의 효력 및 변경)
① 이 약관은 당 사이트에 게시하거나 기타의 방법으로 회원에게 공지함으로써 효력이 발생합니다.
② 당 사이트는 이 약관을 개정할 경우에 적용일자 및 개정사유를 명시하여 현행 약관과 함께 당 사이트의
초기화면에 그 적용일자 7일 이전부터 적용일자 전일까지 공지합니다. 다만, 회원에게 불리하게 약관내용을
변경하는 경우에는 최소한 30일 이상의 사전 유예기간을 두고 공지합니다. 이 경우 당 사이트는 개정 전
내용과 개정 후 내용을 명확하게 비교하여 이용자가 알기 쉽도록 표시합니다.
제 4 조(약관 외 준칙)
① 이 약관은 당 사이트가 제공하는 서비스에 관한 이용안내와 함께 적용됩니다.
② 이 약관에 명시되지 아니한 사항은 관계법령의 규정이 적용됩니다.
제 2 장 이용계약의 체결
제 5 조 (이용계약의 성립 등)
① 이용계약은 이용고객이 당 사이트가 정한 약관에 「동의합니다」를 선택하고, 당 사이트가 정한
온라인신청양식을 작성하여 서비스 이용을 신청한 후, 당 사이트가 이를 승낙함으로써 성립합니다.
② 제1항의 승낙은 당 사이트가 제공하는 과학기술정보검색, 맞춤정보, 서지정보 등 다른 서비스의 이용승낙을
포함합니다.
제 6 조 (회원가입)
서비스를 이용하고자 하는 고객은 당 사이트에서 정한 회원가입양식에 개인정보를 기재하여 가입을 하여야 합니다.
제 7 조 (개인정보의 보호 및 사용)
당 사이트는 관계법령이 정하는 바에 따라 회원 등록정보를 포함한 회원의 개인정보를 보호하기 위해 노력합니다. 회원 개인정보의 보호 및 사용에 대해서는 관련법령 및 당 사이트의 개인정보 보호정책이 적용됩니다.
제 8 조 (이용 신청의 승낙과 제한)
① 당 사이트는 제6조의 규정에 의한 이용신청고객에 대하여 서비스 이용을 승낙합니다.
② 당 사이트는 아래사항에 해당하는 경우에 대해서 승낙하지 아니 합니다.
- 이용계약 신청서의 내용을 허위로 기재한 경우
- 기타 규정한 제반사항을 위반하며 신청하는 경우
제 9 조 (회원 ID 부여 및 변경 등)
① 당 사이트는 이용고객에 대하여 약관에 정하는 바에 따라 자신이 선정한 회원 ID를 부여합니다.
② 회원 ID는 원칙적으로 변경이 불가하며 부득이한 사유로 인하여 변경 하고자 하는 경우에는 해당 ID를
해지하고 재가입해야 합니다.
③ 기타 회원 개인정보 관리 및 변경 등에 관한 사항은 서비스별 안내에 정하는 바에 의합니다.
제 3 장 계약 당사자의 의무
제 10 조 (KISTI의 의무)
① 당 사이트는 이용고객이 희망한 서비스 제공 개시일에 특별한 사정이 없는 한 서비스를 이용할 수 있도록
하여야 합니다.
② 당 사이트는 개인정보 보호를 위해 보안시스템을 구축하며 개인정보 보호정책을 공시하고 준수합니다.
③ 당 사이트는 회원으로부터 제기되는 의견이나 불만이 정당하다고 객관적으로 인정될 경우에는 적절한 절차를
거쳐 즉시 처리하여야 합니다. 다만, 즉시 처리가 곤란한 경우는 회원에게 그 사유와 처리일정을 통보하여야
합니다.
제 11 조 (회원의 의무)
① 이용자는 회원가입 신청 또는 회원정보 변경 시 실명으로 모든 사항을 사실에 근거하여 작성하여야 하며,
허위 또는 타인의 정보를 등록할 경우 일체의 권리를 주장할 수 없습니다.
② 당 사이트가 관계법령 및 개인정보 보호정책에 의거하여 그 책임을 지는 경우를 제외하고 회원에게 부여된
ID의 비밀번호 관리소홀, 부정사용에 의하여 발생하는 모든 결과에 대한 책임은 회원에게 있습니다.
③ 회원은 당 사이트 및 제 3자의 지적 재산권을 침해해서는 안 됩니다.
제 4 장 서비스의 이용
제 12 조 (서비스 이용 시간)
① 서비스 이용은 당 사이트의 업무상 또는 기술상 특별한 지장이 없는 한 연중무휴, 1일 24시간 운영을
원칙으로 합니다. 단, 당 사이트는 시스템 정기점검, 증설 및 교체를 위해 당 사이트가 정한 날이나 시간에
서비스를 일시 중단할 수 있으며, 예정되어 있는 작업으로 인한 서비스 일시중단은 당 사이트 홈페이지를
통해 사전에 공지합니다.
② 당 사이트는 서비스를 특정범위로 분할하여 각 범위별로 이용가능시간을 별도로 지정할 수 있습니다. 다만
이 경우 그 내용을 공지합니다.
제 13 조 (홈페이지 저작권)
① NDSL에서 제공하는 모든 저작물의 저작권은 원저작자에게 있으며, KISTI는 복제/배포/전송권을 확보하고
있습니다.
② NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 상업적 및 기타 영리목적으로 복제/배포/전송할 경우 사전에 KISTI의 허락을
받아야 합니다.
③ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 보도, 비평, 교육, 연구 등을 위하여 정당한 범위 안에서 공정한 관행에
합치되게 인용할 수 있습니다.
④ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 무단 복제, 전송, 배포 기타 저작권법에 위반되는 방법으로 이용할 경우
저작권법 제136조에 따라 5년 이하의 징역 또는 5천만 원 이하의 벌금에 처해질 수 있습니다.
제 14 조 (유료서비스)
① 당 사이트 및 협력기관이 정한 유료서비스(원문복사 등)는 별도로 정해진 바에 따르며, 변경사항은 시행 전에
당 사이트 홈페이지를 통하여 회원에게 공지합니다.
② 유료서비스를 이용하려는 회원은 정해진 요금체계에 따라 요금을 납부해야 합니다.
제 5 장 계약 해지 및 이용 제한
제 15 조 (계약 해지)
회원이 이용계약을 해지하고자 하는 때에는 [가입해지] 메뉴를 이용해 직접 해지해야 합니다.
제 16 조 (서비스 이용제한)
① 당 사이트는 회원이 서비스 이용내용에 있어서 본 약관 제 11조 내용을 위반하거나, 다음 각 호에 해당하는
경우 서비스 이용을 제한할 수 있습니다.
- 2년 이상 서비스를 이용한 적이 없는 경우
- 기타 정상적인 서비스 운영에 방해가 될 경우
② 상기 이용제한 규정에 따라 서비스를 이용하는 회원에게 서비스 이용에 대하여 별도 공지 없이 서비스 이용의
일시정지, 이용계약 해지 할 수 있습니다.
제 17 조 (전자우편주소 수집 금지)
회원은 전자우편주소 추출기 등을 이용하여 전자우편주소를 수집 또는 제3자에게 제공할 수 없습니다.
제 6 장 손해배상 및 기타사항
제 18 조 (손해배상)
당 사이트는 무료로 제공되는 서비스와 관련하여 회원에게 어떠한 손해가 발생하더라도 당 사이트가 고의 또는 과실로 인한 손해발생을 제외하고는 이에 대하여 책임을 부담하지 아니합니다.
제 19 조 (관할 법원)
서비스 이용으로 발생한 분쟁에 대해 소송이 제기되는 경우 민사 소송법상의 관할 법원에 제기합니다.
[부 칙]
1. (시행일) 이 약관은 2016년 9월 5일부터 적용되며, 종전 약관은 본 약관으로 대체되며, 개정된 약관의 적용일 이전 가입자도 개정된 약관의 적용을 받습니다.