수삼부패와 관련된 미생물을 선발 및 동정한 결과 부패한 수삼으로부터 20종의 미생물을 분리하고 이중 수삼을 빨리 부패시키는 균주 6종(세균 5종,사상균 1종)을 분리하였다. 수삼부패 세균은 Pseudomonas putida, Pseudomonas putidaa biotype A, Bacillus spp., Enterobacter cloecae 및 Klebsiella pneumoniae로 각각 동정되었으며, 수삼부패사상균은 Rhiaopu oryzae로 동정되었다. 이중 수삼부패를 가장 빨리 일으키는 균주는 Bacillu spp.이였다. 수삼부패 억제물질을 선택하기 위하여 생약추출물과 정유 50여 종으로부터 가자 및 오미자의 물추출물과 감국, 누노, 선복화, 자초 및 지유의 정유를 Bacillus spp.에 대하여 항균활성이 강한 물질로 선발하였다. 이 중 가자추출물과 오미자추출물은 Bacillu spp의 생육을 크게 억제하였다. 특히 가자추출물은 천연 보존제로 시판되고 있는 DF-100(자몽씨 추출액)과 비슷한 수준의 항균력을 나타내었고, 가자추출물의 항균활성물질은 약한 지용성을 띠는 극성의 산성물질로 판단되며 현재 이물질을 분리,정제 중에 있다. 수삼을 가자 추출물의 $1\%$수용액에 5분간 침지하였으나 $30^{\circ}C$에서 보관하였을 때 Bacillus spp에 의한 부패가 다소 억제되었다. 결론적으로, 가자 및 오미자의 물추출물과 감국, 누노, 선복화, 자초 및 지유의 정유를 수삼부패 억제활성물질로 선발하였으며 앞으로 원료삼(수삼)의 장기저장에 이들 생약추출물의 활용방안을 검토하는 것이 필요하다고 판단된다.
Pseudomonas의 분해계 플라스미드와 이들에 유용한 벡터를 개발하기 위해서 본 연구실에서 분리, 보존하고 있는 Pseudomonas 중에서 P.putita KU 190으로부터 하나의 플라스미드를 분리하여 그 특성을 해석코저 하였다. size marker로 RP4와 pSy343를 사용하여 플라스미드의 크기를 결정한 바 41Kb로 나타났으며, 이 플라스미드를 pKU 41라 명명하였다. 제한효소 Bglll, BamHl, Eco Rl, HindIII, Sall등으로 이 플라스미드를 소화하여 이들의 제한효소 pattern을 조사한 결과, Bg III가 1. BamHl 3, Hin dIll는 3, EcoRI은 6 그리고 SalI은 13개 이상의 절단부위를 가지고 있었다. 이 제한효소의 절단부위, 토막들의 크기로부터 BamHI, HindIII에 대한 지도를 작성하였다. 플라스미드의 생울학적 기능을 조사하기 위하여 탄화수소 자화능에 대한 큐어링 실험을 하였으나 이로부터 뚜렷한 관련성 여부를 관찰할 수 없었다.
Kang, Du-Kyeong;Lee, Cho-Ryong;Lee, Sun Hee;Bae, Jung-Hoon;Park, Young-Kwon;Rhee, Young Ha;Sung, Bong Hyun;Sohn, Jung-Hoon
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제27권5호
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pp.990-994
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2017
Polyhydroxyalkanoates (PHAs) are biodegradable plastics produced by bacteria, but their use in diverse applications is prohibited by high production costs. To reduce these costs, the conversion by Pseudomonas strains of PHAs from crude sludge palm oil (SPO) as an inexpensive renewable raw material was tested. Pseudomonas putida S12 was found to produce the highest yield (~41%) of elastomeric medium-chain-length (MCL)-PHAs from SPO. The MCL-PHA characteristics were analyzed by gas-chromatography/mass spectrometry, gel permeation chromatography, and differential scanning calorimetry. These findings may contribute to more widespread use of PHAs by reducing PHA production costs.
부산의 하천에서 채취한 진흙과 물에서 분리한 나프탈렌 분해균주 중 분해력이 강한 3 균주에 대하여 실험한 결과 Acinetobacter calcoaceticus, R-88, Pseudomonas testosteroni R-87 및 Pseudomonas putida R-89로 동정하였다. 이들 3 균주중에서는 Acinetobacter calcoaceticus R-88이 나프탈렌 분해력이 가장 우수하였고, 이 균주의 최적 pH는 7.0, 온도는 $30^{\circ}C$였고, 나프탈렌의 농도는 10mM이였다. 이 균주는 salicylic acid의 경로를 통하여 분해되고, ampicillin, tetracyclin, chloramphenicol 및 Kanamycin에 대하여 강한 저항성을 보여주었다. Acinetobacter calcoaceticus, R-88는 나프탈렌 분해에 관여하는 plasmid DNA를 1개 가지고 있는 것으로 나타났다.
m-Toluate 최소배지에서 선택적 enrichment culture를 통하여 82개의 세균의 균주를 분리하였으며, ol들 중 두 균주는 Pseudomonas cepacia, 한 균주는 P. Putida, 한 균주는 Yersinia intermedia, 그리고 한 균주는 Flavobacterium odoratum으로 동정되었다. P. cepacia SUB37은 P. putida mt-2의 TOL 플라스미드와 비슷한 크기의 플라스미드를 가지고 있었으며, Flavobacterium odoratum과 Yersinia intermedia는 이보다 더 큰 플라스미드를 갖고 있었다. P. cepacia SUB37은 streptomycin에 감수성을 나타내었으나, rifampicin에는 내성을 나타내었다. 플라스미드를 갖는 P. cepacia SUB37은 탄화수소를 해당 알콜과 알데히드를 거쳐서 benzoate와 toluate 로 분해하였다. 플라스미드 제거실험으로, P. Cepacia SUB37의 플라스미드에는 탄화수소 분해과정 중 toluene과 xylene을 benzoate, toluate로 분해하는 효소와, 계속하여 meta pathway를 거치는 단계의 효소를 코딩하는 유전자들이 있음이 확인되었다. 또한 P. cepacia SUB37은 생장이 왕성하였을 때 m-toluate를 거의 분해하였다.
라세믹체 형태의 전구물질 methyl DL-${\beta}$-acetylthioisobutyrate (DL-ester)로부터 captopril 합성과정의 중간물질로 알려져 있는 D-${\beta}$-acetylthioisobutyric acid (DAT)를 효율적으로 제조하기 위해 광학선택적 esterase활성을 가진 신규 미생물을 탐색하였고 활성이 우수한 균주 CJ-317과 균주 CJ-187을 선별하고 동정한 결과, 각각 Klebsiella pneumoniae와 Pseudomonas putida로 동정하였다. 두 균주가 생산하는 esterase의 최적 반응온도와 내열성을 조사한 결과, P. putida CJ-187와 K. pneumoniae CJ-317의 최적활성은 각각 $60^{\circ}C$와 $75^{\circ}C$이었으며 또한 P. putida CJ-187의 경우, $60^{\circ}C$까지 안정한 반면 K. pneumoniae CJ-317은 $80^{\circ}C$에서도 1시간 동안 안정된 내열성 효소의 특성을 보였다. DAT에 의한 최종 산물의 활성 저해도에 있어서도 P. putida CJ-187은 2.5%와 5%의 DAT에 대해 각각 55%와 80%의 저해활성을 보인 반면 K. pneumoniae CJ-317는 각각 35%와 44%의 낮은 저해활성을 보임으로서 K. pneumoniae CJ-317은 captopril 합성의 중간체인 DAT 제조과정에 유용하게 활용할 수 있는 우수한 내열성 광학선택적 esterase 활성을 가지는 신규 균주임을 확인하였다.
In vivo expression technology (IVET) has been developed to study bacterial gene expression in Salmonella typhimurium during host infection. The expression of selected genes by IVET has been elevated in vivo but not in vitro. The selected genes turned out to be important for bacterial virulence and/or pathogenicity. IVET depends on a synthetic operon with a promoterless transcriptional fusion between a selection marker gene and a reporter gene. The IVET approach has been successfully adapted in other bacterial pathogens and plant-associated bacteria using different selection markers. Pseudomonas putida suppresses citrus root rot caused by Phytophthora parasitica and enhances citrus seedling growth. The WET strategy was adapted based on a transcriptional fusion, pyrBC'-lacZ, in P. putida to study the bacterial traits important far biocontrol activities. Several genes appeared to be induced on P. parasitica hyphae and were found to be related with metabolism and regulation of gene expression. It is likely that the biocontrol strain took a metabolic advantage from the plant pathogenic fungus and then suppressed citrus root rot effectively. The result was parallel with those from the adaptation of IVET in P. fluorescens, a plant growth promoting rhizobacteria (PGPR). Interestingly, genes encoding components for type III secretion system have been identified as rhizosphere-induced genes in the PGPR strain. The type III secretion system may play a certain role during interaction with its counterpart plants. Application of IVET has been demonstrated in a wide range of bacteria. It is an important strategy to genetically understand complicated bacterial traits in the environment.
효모나 세균을 이용한 메칠글리옥살 대사의 효소학적, 유전학적 연구로부터 생물체들은 메칠글리옥살의 해독을 위하여 보편적이고 다양한 경로를 가지고 있음을 알았다. 이들 대사경로 가운데 글리옥살라아제 I은 메칠글리옥살 해독에 있어서 가장 중요한 경로이다. 글리옥살라아제 I의 분자구조는 효소의 기원에 따라 크게 다르게 나타났고, 아연 이온은 효소활성에 필수적이었다. Pseudomonas putida의 글리옥살라아제 I은 유전자는 메칠글리옥살리아의 제거제로 작용하였고, 또한 세균의 크기를 조절하는 역활을 가지고 있었다. 본 유전자의 염기배열과 정제효소의 아미노 말단을 비교해 본 결과 아미노 말단의 메치오닌 잔기는 번역 후 제거 됨을 알았다. 그밖에 글리옥살라아제 I의 생리학적 역활에 대해서도 논의하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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