NOD/SCID 마우스는 선천성 면역결핍을 지닌 마우스로서 이종 세포 및 조직 이식을 위한 실험동물로서 가장 많이 활용되고 있다. 본 연구는 돼지의 골수조직에서 채취한 조혈줄기세포를 면역결핍마우스의 정맥 주입을 통하여 생체 내 주입을 실시한 결과, 마우스의 조혈조직에서 대단히 높은 돼지 T면역세포의 증식이 관찰되었다. 유세포 분석기를 이용해 돼지 골수 조혈세포 생체 이식 6주의 마우스에서의 돼지 T면역세포의 증식과 분화 특성을 분석한 결과, 마우스 조혈조직인 골수($5.4{\pm}1.9%$), 비장($15.4{\pm}7.3%$), 간($21.3{\pm}1.4%$), 림프절($33.5{\pm}32.8%$)에서 돼지 조혈줄기세포 유래 T 세포의 증식과 분화가 관찰되었고, 돼지 helper T 세포와 cytotoxic T 세포의 발달도 확인되었다. 또한 조직 면역염색을 통하여 마우스의 비장조직에 이식한 돼지 면역세포의 중식을 관찰하였다. 본 연구는 NOD/SCID 마우스를 이용해 돼지 조혈줄기세포로부터 T 면역세포로의 분화 및 발달과정을 생체 내에서 분석할 수 있는 유용한 동물모델로서 이용할 수 있음을 보여준다.
Pigs have anatomically and physiologically very similar to human and because of this, pigs are the possible xenotransplantation donors for human organs. PERVs (Porcine Endogenous Retroviruses) are known to be one of the possible obstacles for using porcine organs regardless of the immunological barriers. In order to understand the expression patterns of PERVs in Korean native pigs, we investigated PERV expressions in porcine liver, heart, spleen, and lung samples. After RNA extraction, two types of specific PERV envelope genes (ENV-A and ENV-B) were amplified using specific primers by RT-PCR. The results indicated that the variable PERV expressions were observed in inconsistent patterns among animals and tissues. The PERV expressions were verified with semi-quantitative real-time PCR with three replicates. Even though, these results confirm the previous findings that the PERVs were differentially expressed between animals and tissues. These results also give some valuable information for xenotransplantation when using the Korean native pigs as the organ donor.
Several animal species including pigs are directly involved in the zoonotic transmission of the hepatitis E virus (HEV) to humans. This study was conducted to detect HEV in bovine and porcine raw livers by nested reverse transcription-polymerase chain reaction. Zoonotic HEV strains were identified in 1.0 and 3.0% of the tested bovine and porcine livers, respectively. HEV-4 was detected in the bovine livers, but both HEV-3 and HEV-4 were identified in the porcine livers. These results indicate that zoonotic transmission of HEV may occur via consumption of raw or undercooked livers of pigs and cattle.
도축 후 생산되는 돼지 혈액과 간을 이용한 효모의 최적 배양조건과 효모배양물이 육계의 성장에 미치는 영향을 조사하였다. 10% 돼지 혈액 상등액에 Glucose 5%를 첨가 한 BSG 배지와 20% 간 상등액에 Glucose 5%를 첨가한 LSG배지에서 24시간 동안 효로를 배양한 결과 YEPD(Yeast Exract(DIFCO) 1%, Bacto Pepton(DIFCO) 2%, Glucose 4%)배지에서 자란 효모의 수보다 각각 4%, 10% 증가하였다. 효모수를 증가하기 위해 BSG 배지에 첨가한 Ammonium sulfate 최적 농도는 각각 24시간 배양하였을 때 100mM(1.3%)이었으며, 48시간 배양하였을 때에는 50mM(0.65%)로 나타났다. BSG 배지에서 효모배양의 최적 pH는 약 6에서 7 정도였다. LSG 배지에서 Ammonium sulfate와 Taurine을 1%씩 첨가하였을 때 첨가하지 않은 배지에 비해 효모수가 각각 18%와 9% 증가하였을 때 체중이 무첨가구에 비해 4주령에서 10% 증가하였다. 따라서 본 연구의 결과 도축부산물인 혈액과 간을 가축사료를 위한 효모배양 배지 원료로서 재활용할 수 있다는 것을 의미한다.
Wang, Y.F.;Yu, M.;Liu, B.;Fan, B.;Wang, H.;Zhu, M.J.;Li, K.
Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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제17권7호
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pp.897-902
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2004
PSMC5 subunit, which belongs to the 26S proteasomal subunit family, plays an important role in the antigen presentation mediated by MHC class I molecular. Full-length cDNA of porcine PSMC5 was isolated using the in silico cloning and rapid amplification of cDNA ends (RACE). Amino acid was deduced and the primary structure was analyzed. Results revealed that the porcine PSMC5 gene shares the high degree of sequence similarity with its mammalian counterparts at both the nucleotide level and the amino acid level. The RT-PCR was performed to detect the porcine PSMC5 expression pattern in seven tissues and the result showed that high express level was observed in spleen, lung, marrow and liver while the low express level was in muscle. The full-length genomic DNA sequence of porcine PSMC5 gene was amplified by PCR and the genomic structure revealed that this gene was comprised by 12 exons and 11 introns. Best alignment of the cDNA and genomic exon DNA sequence presents 4 mismatches and this information potentially bears further study in gene polymorphisms.
The gene expression of porcine adiponectin and stearoyl coenzyme A desaturase (SCD) was investigated in this study. The partial gene sequences for adiponectin and SCD were amplified by RT-PCR from subcutaneous adipose tissue and cloned by TA cloning techniques. Sequences of these genes were determined and found to be highly homologous to that of other species, suggesting similar function of these genes as in other species. The transcripts of these adipocyte-related genes in pig tissues were measured by Northern analysis. The transcripts for adiponectin and SCD were highly expressed in porcine subcutaneous adipose tissue; the transcripts for SCD were also barely detected in the liver, but the greatest concentrations were in the adipose tissue. In porcine stromalvascular cells (S/V cells) cultured in vitro, transcripts for adiponectin and SCD increased gradually during adipocyte differentiation. The level of adipocyte adiponectin mRNA was associated with late adipocyte differentiation, indicating the gene may not be involved in adipocyte differentiation but has great importance in porcine adipocyte functions. The SCD transcripts were not detectable until 2 d after induction of adipocyte differentiation. It was highly expressed in differentiating porcine adipocytes (2 to 10 d after the induction of adipocyte differentiation), indicating a significant role of SCD in adipocytes.
An inverse finite element (FE) model parameter estimation algorithm can be used to characterize mechanical properties of biological tissues. Using this algorithm, we can consider the influence of material nonlinearity, contact mechanics, complex boundary conditions, and geometrical constraints in the modeling. In this study, biomechanical experiments on macro and micro samples are conducted and characterized with the developed algorithm. Macro scale experiments were performed to measure the force response of porcine livers against mechanical loadings using one-dimensional indentation device. The force response of the human liver cancer cells was also measured by the atomic force microscope (AFM). The mechanical behavior of porcine livers (macro) and human liver cancer cells (micro) were characterized with the algorithm via hyperelastic and linear viscoelastic models. The developed models are suitable for computing accurate reaction force on tools and deformation of biomechanical tissues.
Safety of recombinant porcine somatotropin administration on pig was studied using 32 Landrace x Yorkshire crossbred pigs. The starting body weight ranged from 55.5kg to 65.3kg. Eight pigs were allotted to each low dose group of sustained releasing rPST(SL), high dose group of sustained releasing rPST(SH), daily injection group of rPST(DI), and control group(C). Pigs in SL group and SH group were injected subcutaneously twice in 3 week-interval with 1000$\mu\textrm{g}$ and 2000$\mu\textrm{g}$ of sustained releasing rPST per kg body weight, respectively. Pigs in DI group were injected intramuscularly with 100$\mu\textrm{g}$ of rPST everyday for 6 weeks. Blood was collected from anterior vena cava just before the first treatment, and at four weeks and six weeks of experiment. Hematological parameters and blood chemical parameters indicating liver function, kidney function, electrolyte metabolism, mineral metabolism and lipid metabolism were determined. Necropsy and urinalysis were performed after final blood collection. The results were summarized as follows, and it is concluded that rPST administration does not affect pig health negatively. 1. rPST administration did not affect kidney function as manisfested by BUN, creatinine and urinalysis. 2. rPST administration did not affect liver function as manisfested by total protein, albumin, serum AST activity serum ALT activity serum ALP activity, serum LDH activity, serum GGT activity and serum SDH activity. 3. rPST administration did not affect skeletal muscle, cardiac muscle and brain as manifasted by serum AST activity and serum LDH activity. 4. rPST administration increased blood glucose level within normal range. 5. rPST administration did not affect lipid metabolism as manisfested by triglyceride, cholesterol, and phospholipid concentrati on. 6. rPst administration dia not affect mineral metabolism as manisfested by calcium, phosphorus, magnesium and iron concentration. 7. rPST administration did not affect electrolyte metabolism as manisfested by Na, K, chloride concentration. 8. rPST administration did not affect erythrocyte count, leukocyte count, thrombocyte count, and plasma fibrinogen level.
The full-length cDNA of the porcine peroxisomal ${\Delta}^3$,${\Delta}^2$-enoyl-CoA isomerase (PECI) gene encodes a monofunctional peroxisomal ${\Delta}^3$,${\Delta}^2$-enoyl-CoA isomerase. Cloning and sequencing of the porcine PECI cDNA revealed the presence of an 1185-base pair open reading frame predicted to encode a 394-amino acid protein by the 5'rapid amplification of cDNA ends (5'RACE) and EST sequences. The porcine PECI gene was expressed in seven tissues (heart, liver, spleen, lung, kidney, skeletal muscle, fat) which was revealed by reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR). The porcine PECI was mapped to SSC71/2 p11-13 using the somatic cell hybrid panel (SCHP) and the radiation hybrid panel (RH) (LOD score 12.84). The data showed that PECI was closely linked to marker S0383. A C/T single nucleotide polymorphism in PECI exon 10 (3'UTR) was detected as a PvuII PCR-RFLP. Association analysis in our experimental pig population showed that different genotypes of PECI gene were significantly associated with the Average Backfat thickness (ABF) (p<0.05) and Buttock backfat thickness (p<0.01).
Objective: Mutations in low-density lipoprotein receptor (LDLR), which encodes a critical protein for cholesterol homeostasis and lipid metabolism in mammals, are involved in cardiometabolic diseases, such as familial hypercholesterolemia in pigs. Whereas microRNAs (miRNAs) can control LDLR regulation, their involvement in circulating cholesterol and lipid levels with respect to cardiometabolic diseases in pigs is unclear. We aimed to identify and analyze LDLR as a potential target gene of SSC-miR-20a. Methods: Bioinformatic analysis predicted that porcine LDLR is a target of SSC-miR-20a. Wild-type and mutant LDLR 3'-untranslated region (UTR) fragments were generated by polymerase chain reaction (PCR) and cloned into the pGL3-Control vector to construct pGL3 Control LDLR wild-3'-UTR and pGL3 Control LDLR mutant-3'-UTR recombinant plasmids, respectively. An miR-20a expression plasmid was constructed by inserting the porcine premiR-20a-coding sequence between the HindIII and BamHI sites in pMR-mCherry, and constructs were confirmed by sequencing. HEK293T cells were co-transfected with the miR-20a expression or pMR-mCherry control plasmids and constructs harboring the corresponding 3'-UTR, and relative luciferase activity was determined. The relative expression levels of miR-20a and LDLR mRNA and their correlation in terms of expression levels in porcine liver tissue were analyzed using reverse-transcription quantitative PCR. Results: Gel electrophoresis and sequencing showed that target gene fragments were successfully cloned, and the three recombinant vectors were successfully constructed. Compared to pMR-mCherry, the miR-20a expression vector significantly inhibited wild-type LDLR3'-UTR-driven (p<0.01), but not mutant LDLR-3'-UTR-driven (p>0.05), luciferase reporter activity. Further, miR-20a and LDLR were expressed at relatively high levels in porcine liver tissues. Pearson correlation analysis revealed that porcine liver miR-20a and LDLR levels were significantly negatively correlated (r = -0.656, p<0.05). Conclusion: LDLR is a potential target of miR-20a, which might directly bind the LDLR 3'-UTR to post-transcriptionally inhibit expression. These results have implications in understanding the pathogenesis and progression of porcine cardiovascular diseases.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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