• 미생물학회지
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• 제52권4호
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• pp.495-499
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• 2016

본 연구에서는 발광 세균에 존재하는 LuxG 단백질의 효소학적 성질을 알아내기 위하여 Photobacterium leiognathi ATCC 25521의 luxG 유전자를 중합효소연쇄반응으로 증폭시켜 T5 프로모터와 6X His-tag 시스템을 지닌 pQE 벡터에 삽입시킨 재조합플라스미드를 제조하여 대장균에 형질전환 후 과발현시켜 단백질을 분리, 정제 하였다. 정제된 단백질의 효소학적 실험 결과, 이 단백질은 FMN과 NADPH 기질에 대한 ferric iron reductase의 기능을 갖고 있음을 확인하였으며 이들 기질에 대한 효소 활성도 상수 $K_m$ 및 $V_{max}$ 값을 결정하였다.

• 한국어병학회지
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• 제20권1호
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• pp.71-81
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• 2007

넙치, Paralichthys olivaceus 병어에서 분리된 Photobacterium damselae subsp. damselae와 Vibrio spp.(V. anguillarum, V. splendidus, V. harveyi and V. ordalii)의 병원성을 in vitro에서 조사하였다. Extracellular products (ECPs)의 성상은 효소 활성, 양과 넙치 적혈구에 대한 용혈능과 cell-line에 대한 세포 독성을 조사하였다. 그리고 세균의 internalization에서 signal transduction pathways를 signal transduction inhibitor를 이용하여 조사하였다.P. damselae는 phospholipase 활성, 넙치 적혈구에 대한 용혈능, 세포독성이 높게 나타났으며, 분리된 vibrios 균주에 비하여 internalization에서 다양한 경로를 나타내었다. 따라서 이러한 활성은 P. damselae의 병원성과 관련이 있을 것으로 생각된다.

• Fisheries and Aquatic Sciences
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• 제16권4호
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• pp.311-318
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• 2013

The gene encoding an esterase from Photobacterium sp. MA1-3 was cloned in Escherichia coli using the shotgun method. The amino acid sequence deduced from the nucleotide sequence (948 bp) corresponded to a protein of 315 amino acid residues with a molecular weight of 35 kDa and a pI of 6.06. The deduced protein showed 74% and 68% amino acid sequence identities with the putative esterases from Photobacterium profundum SS9 and Photobacterium damselae, respectively. Absence of a signal peptide indicated that it was a cell-bound protein. Sequence analysis showed that the protein contained the signature G-X-S-X-G included in most serine-esterases and lipases. The MA1-3 esterase was produced in both soluble and insoluble forms when E. coli cells harboring the gene were cultured at $18^{\circ}C$. The enzyme was a serine-esterase and was active against $C_2$, $C_4$, $C_8$ and $C_{10}$ p-nitrophenyl esters. The optimum pH and temperature for enzyme activity were pH 8.0 and $30^{\circ}C$, respectively. Relative activity remained up to 45% even at $5^{\circ}C$ with an activation energy of 7.69 kcal/mol, which indicated that it was a cold-adapted enzyme. Enzyme activity was inhibited by $Cd^{2+}$, $Cu^{2+}$, $Zn^{2+}$, and $Hg^{2+}$ ions.

• 한국어병학회지
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• 제22권2호
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• pp.115-124
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• 2009

넙치 병어에서 Photobacterium damselae subsp. damselae와 Vibrio spp.(V. anguillarum, V. splendidus, V. harveyi and V. ordalii)를 분리한 후 in vivo에서 병원성을 비교하였다. 분리균을 인위감염 한 결과, 폐사율, 혈청의 ALT, AST, cortisol 농도가 vibrio 감염구에 비하여 P. damselae 감염구에서 높게 나타났다. 또한, P. damselae 감염구에서 비특이적 면역반응인 식세포의 nitroblue tetrazolium(NBT) 반응과 혈청의 라이소자임 활성이 유의적으로 낮게 나타났다. 따라서, P. damselae는 특이적 효소인 damselysin의 분비로 높은 용혈능과 phospholipase 활성, 감염 시 내부 장기의 손상에 의한 ALT와 AST 상승, cortisol 농도의 증가로 인한 면역기능 저하가 높은 병원성을 나타낸 것으로 사료된다.

• 대한수의학회지
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• 제49권1호
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• pp.35-38
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• 2009

The zebra shark Stegostoma fasciatum which had been reared in the commercial aquaria was found dead and submitted for postmortem examination. A pure bacterial culture was isolated from pale and enlarged liver. The analysis of ureC and 16S rRNA genes confirmed the isolate as Photobacterium (P.) damselae subsp. damselae and this pathogen was sensitive to gentamicin. Although, no mortality in mouse was observed in the experimental infection study, the isolation of this pathogen in aquarium fish is significant because it can act as a reservoir to other aquatic animals and can also be zoonotic potential to human during aquarium management. This paper describes the first isolation of P. damselae subsp. damselae from zebra shark.

• 한국환경과학회:학술대회논문집
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• 한국환경과학회 2005년도 추계 학술발표회 발표논문집
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• pp.189-191
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• 2005

전국매립지 중 수도권, 울산, 대구 세 매립지의 침출수를 채수하여 Photobacterium을 이용한 독성 test와 Yeast Two-hybride Based Assay을 이용하여 에스트로겐성을 측정하였다. 독성도 값은 대구에서 145로 가장 높은 값을 나타냈다. 에스트로겐성은 울산이 hER 3.2ppt, mER 210ppt로 가장 높게 나타났으며, 채수지점 모두 industrial hormones에 반응성이 좋은 mER 값이 높게 나타났다. 특히 대구지점은 독성도 값은 높으나 에스트로겐성은 낮은 값을 나타내는 것으로 보아 호르몬 영향을 억제하는 antangonist chemicaldml 존재 가능성이 시사된다.

• Bulletin of the Korean Chemical Society
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• 제31권4호
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• pp.1017-1020
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• 2010

• 한국어병학회지
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• 제22권3호
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• pp.239-251
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• 2009

배양 온도, 배양 배지 중의 pH, NaCl 농도, iron 농도와 같은 배양 조건이 P. damselae의 미생물학적 성상 및 병원성에 미치는 영향을 조사하였다. P. damselae는 배양 온도 15-30${^{\circ}C}$에서 배지의 pH 5-9, NaCl 농도 0-6%와 $FeCl_{3}$ 첨가시 성장이 촉진되었지만, iron-chelator 첨가 시성장이 억제되었다. Iron-limited 조건에서 배양시 ECPs protein 농도, phospholipase, 용혈능, siderophore 및 cytotoxicity 활성 이 높게 나타났고, 넙치 혈청의 살균작용 대한 생존율도 증가 되었으나, iron-added 조건에서는 감소되어, 배양 조건 중 iron 농도에 영향을 가장 많이 받는 것으로 나타났다. 따라서, 본 연구에서 적용한 iron-limited 조건은 철농도가 낮은 숙주 내와 유사한 환경이므로 iron-limited에서 P. damselae 배양 시 나타나는 병원성의 증가는 어체에 감염시 나타나는 병원성 발현 기전과 유사할 것으로 사료된다.

• KSBB Journal
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• 제13권6호
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• pp.693-699
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• 1998

고정화한 P. phosphoreum의 biolummescence악 독생물질과의 상관관계를 이용한 수계의 독성물질 momtonng 가능성을 조사하였다. P. phosphoreum을 이용한 수계의 독성물질 momtonng을 위한 적정 세포 농도는 최대 biolummescence intensnty를 보인 $O.D_{660}$ 1.0~1.2였으며 이 농도외 세포를 2.5% NaCl 용액에 희석하여 5.0%의 alginateo에 고정화 했을 때 biolummescence 유지도까 가장 좋았다. 이러한 방법으로 monitoring이 가능한 수계의 pH는 6.0~8.0이었다. Free cell과 고정화 세포로 $CdCl_2.H_20, PbCl_2, phenol $그리고 mtrophenol에 대한 bioluminescence를 조사하였을 때 고정화 방법에 의해 독성물질에 대한 민감성0] 증가되었다. 고정화 세포외 경우 각 독성 물질에 따라 20분 이내에 0.01~1.50ppm이하까지 mornitoring이 가능하였다. 뿐만 아니라 speciflC blolurninescence reclucLion rate, biolummescence mtenslLy의 ratio 그리고 Gamma value로 분석함으로서 독성물질의 농도와 biolummescence의 변화를 직선의 관계로 나타낼 수 있어 독성 물질의 농도 예측이 가능하다.

• Journal of Microbiology
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• 제38권2호
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• pp.80-87
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• 2000

The nucleotide sequence of the luxC gene coding for lux-specific fatty acyl-CoA reductase and the upstream DNA (325bp)of the structural gene from bioluminescent bacterium, Photobacterium phosphoreum, has been deternubed. An open reading frame extending for more than 20 codons in 325 bp DNA upstream of luxC was not present in both directions. The lux gene can be translated into a polypeptide of 54 kDa and the amino acid sequences of lux specific reductases of P. phosphoreum shares 80, 65, 58, and 62% identity with those of the Photobacterium leiognathi, Vibrio fischeri, Vibrio harveyi, and Xehnorhabdus luminescenens reductases, respectively. Analyses of codon usage, showing that a high frequency (2.3%) of the isoleucine codon, AUA, in the luxC gene compared to that found in Escherichia coli genes (0.2%) and its absence in the luxA and B genes, suggested that the AUA codon may play a modulator role in the expression of lux gene in E. coli. The structural genes (luxC, D, A, B, E) of the P. phosphoreum coding for luciferase (${\alpha}$,${\beta}$) and fatty acid reductase (r, s, t) polypeptides can be expressed exclusively in E. coli under the T7 phage RNA polymerase/promoter system and identificationof the [35S]methionine labelled polypeptide products. The degree of expression of lux genes in analyses of codon usage. High expression of the luxC gene could only be accomplished in a mutant E. coli 43R. Even in crude extracts, the acylated acyl-CoA reductase intermediate as well as acyl-CoA reductrase activities could be readily detected.