• 자연과학논문집
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• 제9권1호
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• pp.31-37
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• 1997

세포의 자살 현상은 항암제를 이용한 치료법에 있어 중요하다. p53 은 세포 자살을 유발하여 암세포를 죽이는 핵심적 요소임이 밝혀졌다. 그러나 최근의 연구는 p53 과 무관한 세포 자살 경로가 있음을 보였다 (Gaftenhaus 외, 1996). 본 저자들은 유전독성적 항암제인 아드리아마이신에 의하여 유도된 세포 자살 과정에서 p53 유전자의 돌연변이가 일어나는지를 관찰하였다. 그러므로 본 연구는 아드리아마이신에 의하여 유도된 세포 자살 과정에서 HeLa 세포 집단에서의 p53 유전자의 돌연변이 상태를 조사하였다. DNA 분절 현상으로 관찰한 바, 본 실험 조건하에서는 아드리아마이신을 1 uM 농도로 12 시간 처리하였을 때 세포 자살 현상이 일어났다. p53 유전자의 돌연 변이 상태를 관찰하고자 돌연변이 빈발 부위가 존재한다고 알려진 exon 5, 7 및 8 부위를 종합 효소연쇄반응으로 증폭변화는 관찰되지 않았다. 그러므로 본 연구는 p53 유전자 손상없이 아드리아마이신에 의하여 세포 자살이 유도됨을 밝혔다.

• Asian Pacific Journal of Cancer Prevention
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• 제16권18호
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• pp.8239-8245
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• 2016

The p53 gene is inactivated by the human papillomavirus (HPV) E6 protein in the majority of cervical cancers. Treatment of HeLa S3 cells with siRNA for HPV E6 permitted adenovirus-mediated transduction of a p53 gene linked to an upstream estrogen response element (ERE). Our previous study in non-siRNA treated HHUA cells, which are derived from an endometrial cancer and express estrogen receptor ${\beta}$, showed enhancing effects of an upstream ERE on adenovirus-mediated p53 gene transduction. In HeLa S3 cells treated with siRNA for HPV E6, adenovirus-mediated transduction was enhanced by an upstream ERE linked to a p53 gene carrying a proline variant at codon 72, but not for a p53 gene with arginine variant at codon 72. Expression levels of p53 mRNA and Coxsackie/adenovirus receptor (CAR) mRNA after adenovirus-mediated transfer of an ERE-linked p53 gene (proline variant at codon 72) were higher compared with those after non-ERE-linked p53 gene transfer in siRNA-treated HeLa S3 cells. Western blot analysis showed lower ${\beta}$-tubulin levels and comparatively higher p53/${\beta}$-tubulin or CAR/${\beta}$-tubulin ratios in siRNA-treated HeLa S3 cells after adenovirus-mediated ERE-linked p53 gene (proline variant at codon 72) transfer compared with those in non-siRNA-treated cells. Apoptosis, as measured by annexin V binding, was higher after adenovirus-mediated ERE-linked p53 gene (proline variant at codon 72) transfer compared with that after non-ERE-linked p53 gene transfer in siRNA-treated cells.

• Journal of Gastric Cancer
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• 제3권3호
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• pp.145-150
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• 2003

Purpose: The p53 tumor suppressor gene is believed to play a pivotal role in preventing the uncontrolled cellular growth characteristic of cancer. Mutation of the p53 gene represent one of the most common genetic alterations in human cancers, and the acquisition of such defects is strongly associated with tumor progression and metastasis. The aim of this study was to evaluate the relation between p53 immunoreactivity and the mutation of p53 gene in gastric adenocarcinoma obtained by laser capture microscope. Materials and Methods: Formalin fixed paraffin embedded tissue specimens were obtained from 20 patients who underwent surgery for gastric cancer. According to UICC TNM system, 3 of the cases were Ia, 2 cases II, 4 cases IIIa, 5 cases IIIb, and 6 cases IV. Results: Immunohistochemical staining revealed eight cases as negative (less than $10\%$), twelve cases as postive (more than $10\%$). The locations of mutations were as follows; 7 cases had point mutation at exon 4, and 3 cases point mutation at exon 8. There was no mutation at exon 5, 6, 7 and 9. The mutation was observed in 1 case out of 8 p53 oncoprotein negative cases, and 7 cases out of 12 p53 positive cases. The mutation was more common in p53 positive cases (P<0.05), However, there was no significant correlation between p53 mutation observed by DNA sequencing after laser capture microdissection and expression of p53 oncoprotein. Conclusion: These result suggest that he expression of p53 oncoprotein not to be related to the mutation of p53 gene at exons 4 through 9 in gastric cancer.

• Tuberculosis and Respiratory Diseases
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• 제50권1호
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• pp.67-75
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• 2001

배경 : 대표적인 종양억제유전자인 p53 및 p16은 세포주기 조절 및 자연괴멸 유도에서 서로 다른 역할을 하고 있으며 폐암에서는 동시에 비활성화 되어 있는 경우가 흔하다. 이 종양억제유전자들 동시에 이입시 서로 상호작용을 통해 효과가 증진되리라 기대되고 있다. 방법 : 본 연구에서는 p53 및 p16을 아데노바이러스 벡터를 이용하여 폐암세포주에 동시에 이입하여 그 상호작용을 관찰하였다. 복합투여시 세포성장곡선을 분석하여 isobologra을 이용한 상호작용을 검증하고 세포주기의 변화 및 체외종양형성능의 변화도 관찰하였다. 결과 : Isobologram을 이용한 분석에서 adeno-virus-p53와 adenovirus-p16의 복합투여는 NCI H358에서는 상승적인 성장억제를, NCI H23에서는 부가적인 성장 억제를 보였다. 유세포분석기를 이용한 세포주기의 분석 및 체외종양형성능 검사에서도 p53 및 p16의 복합투여시 단독 투여보다 강한 억제효과를 보였다. 결론 : 이러한 상승적인 p53 및 p16의 상호작용은 이 복합요법이 새로운 유전자치료법으로 발전할 수 있는 가능성을 보였다.

• IMMUNE NETWORK
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• 제1권2호
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• pp.151-161
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• 2001

Background: Inactivation in p53 tumor suppressor gene through a point mutation and deletion is one of the most frequent genetic changes found in human cancer, with 50% of an incidence. This high rate of mutation mostly suggests that the gene plays a central role in the development of cancer and the mutations detected so far were found in exons 5 to 8. Mutation of p53 locus produced accumulation of abnormal p53 protein, and negative regulation of cell proliferation and transcriptional activation as a suppressor of transformation were lost. In addition, inhibition of its normal cellular function of wild-type by mutant is an important step in tumorigenesis. Method: 4 colon cancer cell lines (SNU C1, C2A, C4, C5) were examined for mutation in exons 5 to 8 of the p53 tumor suppressor gene by PCR-SSCP analysis and expression pattern by western blotting and immunoprecipitation. p53-mediated transactivation ability were examined by CAT assay and base substitution of p53 in SNU C2A cell were detected by DNA sequencing. Results: 1) SNU C2A cell and SNU C5 cell were detected mobility shifts each in exon 5 and exon 7 of p53 gene by the PCR-SSCP method, implicating being of p53 mutation. 2) 3 colon cancer cell lines (SNU C1, SNU C2A, SNU C5) expressed wild type and mutant type p53 protein. 3) In northern blot experiment, SNU C2A and SNU C5 cell expressed high level of p53 mRNA. 4) Results of p53-mediated transactivation in colon cancer cell lines by CAT assay represented only SNU C2A cell has transcriptional activity. 5) DNA sequencing in SNU C2A cell showed missense mutation in codon 179 of one allele, histidine to arginine and wild type p53 in the other allele. Conclusion: Colon cancer cell lines showed correlation with mutation in p53 gene and accumulation of abnormal p53 protein. Colon cancer cell SNU C2A retained p53-mediated transactivation as heterozygous p53 with one mutant allele in 179 codon and the other wild-type allele.

• Journal of Korean Neurosurgical Society
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• 제37권1호
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• pp.48-53
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• 2005

Objective: The purpose of this study is to elucidate in vitro responses to combined gamma knife irradiation and p53 gene transfection on human malignant glioma cell lines. Methods: Two malignant human glioma cell lines, U87MG (p53-wild type) and U373MG (p53-mutant) were transfected with an adenoviral vector containing p53 (MOI of 50) before and after applying 20Gy of gamma irradiation. Various assessments were performed, including, cell viability by MTT assay; apoptosis by annexin assay; and cell cycle by flow cytometry, for the seven groups: mock, p53 only, gamma knife (GK) only, GK after LacZ, LacZ after GK, GK after p53, p53 after GK. Results: Cell survival decreased especially, in the subgroup transfected with p53 after gamma irradiation. Apoptosis tended to increase in p53 transfected U373 MG after gamma irradiation (apoptotic rate, 38.9%). The G2-M phase cell cycle arrest markedly increased by transfecting with p53, 48 hours after gamma knife irradiation in U373 MG (G2-M phase, 90.8%). Conclusion: These results suggest that the in vitro effects of combined gamma knife irradiation and p53 gene transfection is an augmentation of apoptosis and G2-M phase cell cycle arrest, which are more exaggerated in U373 MG with p53 transfection after gamma knife irradiation.

• Journal of Chest Surgery
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• 제37권3호
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• pp.261-266
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• 2004

식도암 환자에서 조기진단 및 수술적 치료 방법의 상당한 진전에도 불구하고 환자의 예후는 여전히 좋지 않다. p53 종양 억제유전자는 세포의 성장과 증식을 조절하는 것으로 알려져 있고 nm23 유전자는 설치류 흑색종에서 종양의 전이억제 효과가 있다고 알려져 있다. 이 실험은 p53과 nm23유전자 발현과 식도암 환자의 임상병리학적인 특징상의 관련성을 알아보고자 하였다. 가톨릭대학교 의과대학 부속 성모병원에서 수술한 식도암 환자 40명의 조직을 대상으로 하였고, p53 변이형 단백질과 nm23단백질을 면역화학적 염색을 시행하여 <10% 양성 종양세포 : negative ; 10∼30% 양성 종양세포: ＋; 30∼50% 양성 종양세포 : ＋＋; >50% 양성 종양세포: ＋＋＋의 4개의 군으로 분류하였고, 또한 종양의 침습 정도는 none, mild, moderate, severe로 분류하여 평가하였다. p53 변이형 단백질과 nm23 단백질의 과발현은 생존율 및 임상병리학적 특징과 연관성이 없었고, 또한 p53 및 nm23유전자 발현의 조합 분석에서도 유의한 상관관계를 발견하지 못하였다.

• 미생물학회지
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• 제31권4호
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• pp.279-285
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• 1993

p53 유전자의 변화는 인간의 여러 암에서 가장 흔하게 발견되며 종양세포내에서는 이러한 변형된 p53 단백질의 양의 증가가 초래된다. 세포내에 축적된 p53 단백질의 발견은 인간의 암증세를 판단할 유용한 기중이 되기도 한다. 본 연구에서는 이러한 면역조직화학 검사에 쓰일 수 있는 폴리클로날 항체를 만들기 위햐여 사람의 p53 유전자를 glutathione S-transferase 와의 융합 단백질의 형태로서 대장균내에서 발현시켰다. p53 의 아미노산 1-158번을 코딩하고 있는 NeoI fragment 와 아미노산 159-393 번을 코딩하는 NocI-BamHI fragment 를 BamHI linker 를 이용하여 in frame 으로 pGEX-2T 의 BamHI 자리에 삽입하여 재조합 플라스미드 pGTNS 와 pGTNL 을 각각 만들었다. 또 PCR 에 의한 증폭에 의햐여 아미노산 38-145번을 코딩하는 유전자 부위를 증폭하였으며 BamHI 과 PvuII 로 절단하여 pGEX-2T의 BamHI 과 SmaI 자리에 삽입함으로써 pGTBP 를 제조하였다. 이들 재조합 균주들을 IPTG 로 4시간 induction 한 후 세포 추출물로부터 glutathione Sepharose bead 를 이용하여 융합단백질을 분리하였다. Bead 에 결합된 단백질은 10% SDS-polyacrylamide gel 에서 전기영동하였으며, 각각의 분자량은 54 kDa, 53 kDa 와 40 kDa 였다. 이러한 방법으로 1리터 배양으로부터 약 1mg 의 단백질을 정제하였다.

• Asian Pacific Journal of Cancer Prevention
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• 제14권11호
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• pp.6739-6742
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• 2013

Background: Breast cancer is a major health problem worldwide. Olive oil induces apoptosis in some cancer cells due to phenolic compounds like oleuropein. Although oleuropein has anticancer activity, the underlying mechanisms of action remain unknown. The study aimed to assess the mechanism of oleuropin-induced breast cancer cell apoptosis. Materials and Methods: p53, Bcl-2 and Bax gene expression was evaluated by semi-quantitative reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) in luminal MCF-7 cells. Results: Oleuropein-induced apoptosis was accompanied by up-regulation of both p53 and Bax gene expression levels and down-regulation in Bcl2. Conclusions: Oleuropein induces apoptosis in breast tumour cells via a p53-dependent pathway mediated by Bax and Bcl2 genes. Therefore, oleuropein may have therapeutic potential in breast cancer patients by inducing apoptosis via activation of the p53 pathway.

• Tuberculosis and Respiratory Diseases
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• 제40권6호
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• pp.653-658
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• 1993

연구배경 : 최근 분자유전학의 진보로 인하여 암은 다단계의 복잡한 과정을 거쳐 발생됨이 밝혀졌으며, 이러한 단계는 크게 암유전자의 활성화와 종양억제 유전자의 비활성화로 구분하게 되었다. 본 연구는 p53 종양억제 유전자에 대하여 연구하였는데, 이는 p53 유전자의 변이는 현재까지 밝혀진 종양억제 유전자중 가장 광범위한 종류의 암에서 변이가 확인되고 있기 때문이다. 폐암은 우리나라에서 비교적 흔한 암이나 분자유전학적 발암기전은 아직 불분명하다. 본 연구에서는 폐암 발생에 있어 p53 유전자의 역할을 연구하고자 사람 폐암세포주를 대상으로 p53 유전자중 변이가 높은 비율로 발생되는 영역으로 알려진 exon 4-8에 대한 유전자 변이를 연구하였다. 방법 : 사람 폐선암 세포주인 PC-9와 PC-14 그리고 사람 소세포폐암 세포주인 H69를 대상으로 proteinase K에 의한 소화와 phenol-chloroform-ethanol 방법으로 genomic DNA를 추출하였다. 추출한 DNA를 p53 유전자중 exon 4-8 영역에 대한 primer를 사용하여 polymerase chain reaction(PCR)을 하여 각 exon에 대한 DNA를 증폭시킨 뒤 single strand conformation polymorphism(SSCP) 방법으로 전기영동과 자기방사기록을 하여 전기영동상 이동변화를 관찰하여 변이를 연구하였다. 결과 : 사람 폐선암세포주인 PC-9와 PC-14 에서는 exon 7에, 사람 소세포폐암 세포주인 H69에서는 exon 5에서 전기영동상 이동변화가 관찰되어 이 영역에 p53 유전자 변이가 있음이 인정되었다. 결론 : 대상으로 하엿던 3종류의 사람 폐암세포주 모두에서 p53 유전자의 변이가 확인된 것은 p53 종양억제 유전자의 변이가 비소세포 및 소세포 폐암 발생에 중요한 역할을 하고 있음을 시사하는 소견으로 사료된다.