식물배양세포의 항산화기구를 이해하기 위하여 다양한 유도조건에서 확립된 24종의 세포주를 대상으로 환원형 (GSH)과 산화형 (GSSG)의 glutathione 함량을 조사하였다. 배양세포의 전체 glutathione 함량 ($\mu$g/g cell fresh wt)은 98$\pm$27로 식물종에 따라 큰 차이가 없었다. 배양세포의 환원형 GSH과 산화형 GSSG의 평균함량 ($\mu$g/g fr wt)은 각각 72$\pm$20와 26$\pm$10을 나타내었다. 배양세포의 전체 glutathione 중에서 평균 환원형 GSH는 약 73%를 차지하였다. 황금 (Scutellaria baicalensis)배양세포의 현탁배양에 따른 GSH 함량 ($\mu$g/g cell fresh wt)은 계대배양부터 대수증식기까지는 계속하여 감소하여 세포생장 정지기인 배양후 13일에는 84까지 감소한 후 다시 증가하였다가 배양후기에는 크게 감소하였다. 한편 GSSG의 함량 ($\mu$g/g cell fresh wt)은 오히려 대수증식기까지는 증가하여 배양후 13일에는 31을 나타내었고 배양후기인 25일에는 48로 오히려 산화형 GSSG의 비율이 높았다. 이러한 결과는 GSH와 GSSG의 비율이 배양세포의 생장과 항산화기구에 주요하게 관여하고 있음을 시사한다.
에탄올의 급성적 및 만성적 투여가 흰쥐의 간 및 소뇌 중의 glutathione(GSH) 양상과 지질과산화물 수준에 미치는 영향을 알아 본 결과는 다음과 같다. 간조직에서는, 만성적 에탄을 투여 (6~9g/kg, per day, 10% 음료수로서, 4주간)에 의해 총 GSH 농도가 14. 5% 저하되었고, 산화형 GSH(GSSG)는 변화가 없었으며, 따라서 GSSG/총 GSH 비율은 증가하였다. 그러나 지질과산화 수준은 변함이 없었다. 급성적 에탄올 투여에 의해 간 조직 중 지질과산화 수준이 상승되고 총 GSH 농도가 감소함은 이미 보고되고 있다. 본 실험에서는 이와 관련시켜 급성적 에탄을 투여 (50mmole/kg, i.p.)후 post-hepatic 혈장 중의 총 GSH 수준을 측정한 결과 현저히 상승하였다. 이러한 GSH의 간에서 혈액으로의 유출은, GSH의 항산화적 소모 이외에도, 급성적 그리고 아마도 만성적인 에탄을 투여에 의한 간 조직 중의 총 GSH의 감소의 한 가능한 원인으로서 간접적으로나마 추정될 수 있겠다. 소뇌에서 는 급성적 에탄을 투여는 지질과산화 수준을 증가시켰으나 GSH 양상은 변화시키지 않았으면, 만성적인 경우엔 모두 변동시키지 못하였다.
백서에 bromate의 장기간 섭취로 간 및 신장의 glutathion량이 감소되는데, 간과 신장은 유사한 감소양상을 나타냈고, 폐 및 혈액에서는 감소하는 경향은 있었으나 통계적인 유의성은 없었다. Bromate 섭취로$\gamma-glutamyl$-cysteine synthetase와 $\gamma-glutamyl$ transpeptidase 활성이 감소되었다. 따라서 간과 신장의 glutathione 감소로 $\gamma-glutamyl$cysteine synthetase 활성이 감소됨으로서 glutathione 합성저하에 의해 나타난 결과로 생각되고, 폐에서 $\gamma-glutamyl$cysteine synthetase 및 $\gamma-glutamyl$- transpep-tidase 활성에는 별다른 영향이 없었다. 혈액에서는$\gamma-glutamyl$cysteine synthetase와 $\gamma-glutamyl$ transpeptidase 활성 감소로 glutathione의 혈액내로 유입과 타장기로 유출이 모두 저하되어 glutathione량의 변화가 없는 것으로 생각된다. Bromate에 의한 장기내 glutathione량 감소는 유리기 소거기능이 저하되어 bromate에 의해서 생성된 유리기 제거가 미흡할 것으로 생각되므로 bromate 독성의 한 요인이 될 것으로 추측된다.
40종류 이상의 식물의 유식물체, 채소 그리고 가공식품의 글루타치온과 그의 산화형 글루타치온(GSSG)함량을 측정하였다. 유식물체를 이용한 실험에서 총글루타치온 함량은, 100 g(생체중)당 $0-120{\mu}mol$의 범위였으며, 같은 과, 종 및 품종에 있어서도 현저한 차이를 나타내었다. 특히, 시판되고 있는 곡물과 채소를 이용한 실험에서는 콩과의 팥과 강낭콩에서 높은 글루타치온 함량을 나타내었다. 콩을 이용한 가공식품(고추장, 된장, 간장 등)에서는 글루타치온 함량이 거의 검출되지 않았다. 식품에 있어서 고농도의 글루타치온은 식품의 높은 부가가치가 되리라 생각된다.
We have cloned the CGR1 gene encoding glutathione reductase (GR) which catalyzes the reduction of oxidized glutathione (GSSG) to reduced glutathione (GSH) from Candida albicans. The cgr1/cgr1 mutants were not viable when CaMAL2 promoter repressed the CGR1 expression. The growth of the mutants could be partially overcome by thiol compounds such as GSH, dithiothreitol, cysteine, N-acetylcysteine and GSSG. Interestingly, C. albicans with CGR1 overexpressed showed defective hyphal growth on solid medium and attenuated virulence. We have also cloned the GCS1 gene encoding ${\gamma}$-glutamylcysteine synthetase which catalyzes the first step of glutathione biosynthesis. The gcs1/gcs1 mutants were nonviable in minimal defined medium. The growth of the mutants could be resumed by supplementing with GSH, GSSG and ${\gamma}$-glutamylcysteine in the medium. The mutants had increased intracellular D-erythroascorbic acid level up to 2.25-fold when transferred to GSH-free medium. When the mutants were depleted of GSH, they showed typical markers of apoptosis. In conclusion, these results suggest that glutathione is an essential metabolite, and involved in hyphal growth, virulence and apoptosis in C. albicans.
목 적: $^{60}Co\;{\gamma}$선을 생쥐에 전신조사로 유도된 생쥐 간의 장해에 대한 발효인삼의 방사선방호효과를 방호제인 glutathione(GSH) 함량 변화를 통하여 실험적 연구를 하였다. 대상 및 방법: ICR종 수컷 생쥐를 발효인삼 투여군, 백삼 투여군, 방사선 조사군, 대조군으로 각각 분류하여 발효인삼 투여군(FG+Rad), 백삼 투여군(WG+Rad)은 $^{60}Co\;{\gamma}$선 조사 전에 백삼과 발효인삼을 7일간(150 mg/kg/day) 경구 투여하였고, 방사선 조사군(Rad)은 $^{60}Co\;{\gamma}$선을 5 Gy(1.01 Gy/min) 선량으로 조사하였으며, 대조군(Co)은 0.1 mL의 생리적 식염수를 투여하였다. 각각의 실험군을 통하여 생쥐 간 조직에서의 환원형 glutathione와 산화형 glutathione(GSSG)의 함량 변화를 조사한 결과 아래와 같다. 결 과: 1. 발효인삼 투여군과 백삼 투여군에서 방사선 조사군보다 유의성 있게 glutathione함량이 증가하였고 산화형 glutathione(GSSG)의 함량은 유의성 있게 감소하였다. 2. 발효인삼투여군과 백삼투여군에서 방사선 조사군보다 산화형 glutathione(GSSG)의 함량과 총 glutathione함량 비율은 유의성 있게 감소하였다. 결 론: 발효인삼투여군이 백삼투여군보다 glutathione함량을 증가시킴으로서 효율적으로 생쥐간의 방사선 방호효과를 증진시킴을 알 수가 있었다.
적변인삼의 원인 물질을 구명코저 인삼뿌리의 적변현상과 항산화 활성과의 상관관계를 조사하기 위하여 적변뿌리와 건전뿌리의 각 부위별 항산화 활성을 조사하였다. 적변삼의 표피와 피층조직의 superoxide dismutase(SOD) 활성(units/mg protein)은 각각 126.9와 79.6으로 정상뿌리에 비해 각각 3.5배, 2.0배 높았다. 적변뿌리의 catalase활성은 약 1.6배 높았으나, peroxidase 활성은 오히려 약간 낮았다. 적변뿌리 각 조직의 DPPH 자유라디칼 포착활성은 정상뿌리에 비해 약 2.0배 높았다. 정상뿌리의 ascorbate 함량은 조직에 따라 약간의 차이를 나타내었지만(166~240 $\mu$g/g fr. wt.), 산화형dehydroascorbate(DHA) 함량이 전체 ascorbate 함량의 약 97~79%를 차지하였다. 적변뿌리의 전체 ascorbate함량은 정상뿌리와 비슷하였지만 환원형 ascorbate의 함량은 조직에 따라 다르지만 정상뿌리에 비해 3.5~7.5배 높았다. 적변뿌리의 표피조직, 피층조직, 중심주 조직의 전체 glutathione 함량은 정상조직에 비해 각각 7.3배, 4.8배, 1.2배 높았다. 적변화에 따른 환원형 glutathione(GSH)과 산화형 glutathione(GSSG)의 함량비는 전체 glutathione 함량변화와 비슷하였다. 이상의 결과는 인삼의 적변조직은 어떤 외부스트레스에 의해 과다하게 발생되는 활성산소종을 제거하기 위하여 SOD 활성, 환원형 ascorbate 함량, 환원형 glutathione 함량이 크게 증가하는 것으로 사료된다.
백서에 paraquat(PQ)투여로 간, 신장 및 폐 glutathione량이 감소되는데, 간과 신장은 유사한 감소양상을 나타냈고, 폐에서 감소율이 가장 높았으며, 혈액에서는 유의한 변화를 나타내지 않았다. PQ투여로 γ-glutamylcysteine synthetase와 γ-glutamyl transpeptidase 활성이 감소되었다. 따라서 간과 신장의 glutathione 감소는 γ-glutamylcysteine synthetase 활성이 감소되어 glutathione 합성저하에 의해 나타난 결과로 생각되고, 폐에서는 간과 신장의 γ-glutamylcysteine synthetase 활성감소로 glutathione합성이 감소되고, 폐 γ-glutamyl transpeptidase활성감소로 인해 혈액으로부터 폐세포로 glutathione 이동이 감소될 것으로 추정되므로 폐 γ-glutamyl transpeptidase 활성감소는 glutathione량 감소의 한 원인이 될 것으로 생각되며, 혈액에서는 γ-glutamylcysteine synthetase와 γ-glutamyl transpeptidase활성감소로 glutathione의 혈액내로 유입과 타장기로 유출이 모두 저하되어 glutathione량의 변화가 없는 것으로 생각된다. PQ에 의한 장기내 glutathione량 감소는 유리기 소거기능이 저하되어 PQ에 의해서 생성된 유리기 제거가 미흡할 것으로 생각되므로 PQ독성의 한 요인이 될 것으로 추측된다.
본 연구는 선형가속기의 고에너지 엑스선을 조사한 생쥐 간에 대한 백삼과 동충하초의 방사선방호효과를 연구하였다. ICR계 수컷생쥐 군에 7일 동안에 경구적으로 백삼(150 mg/kg/day)과 동충하초(200 mg/kg/day)를 각각 방사선조사 전에 투여했고 다른 생쥐 군에 5 Gy(1.01 Gy/min)의 방사선량으로 전신조사를 했고 대조군에 생리적 식염수 (0.1 ml)를 투여 한 후 간 조직에서 환원형 글루타치온(GSH)과 산화형 글루타치온(GSSG)의 함량을 각각 검사하였다. 그 결과 방사선조사군(Rad)보다 동충하초투여군(EF+Rad)과 백삼투여군(WG+Rad)에서 환원형 글루타치온 (GSH)함량이 유의성 있게 증가했으나 산화형 글루타치온(GSSG)의 함량은 유의성 있게 감소하였다. 총 환원형 글루타치온(total GSH)과 산화형 글루타치온(GSSG)의 함량 비율은 방사선조사군(Rad)보다 동충하초투여군(EF+Rad)과 백삼투여군(WG+Rad)에서 유의성 있게 감소하였다.
We identified a bovine $B_{12}$ trafficking chaperone bCblC in Bos taurus that showed 88% amino acid sequence identity with a human homologue. The protein bCblC was purified from E. coli by over-expression of the encoding gene. bCblC bound cyanocobalamin (CNCbl), methylcobalamin (MeCbl) and adenosylcobalamin (AdoCbl) in the base-off states and eliminated the upper axial ligands forming aquo/hydroxocobalamin ($OH_2$/OHCbl) under aerobic conditions. A transition of $OH_2$/OHCbl was induced upon binding to bCblC. Interestingly, bCblC-bound $OH_2$/OHCbl did not react with reduced glutathione (GSH), while the reaction of free$OH_2$/OHCbl with GSH resulted in the formation of glutathionylcobalamin (GSCbl) and glutathione disulfide (GSSG). Furthermore we found that bCblC eliminates the GSH ligand of GSCbl forming $OH_2$/OHCbl. The results demonstrated that bCblC is a $B_{12}$ trafficking chaperone that binds cobalamins and protects $OH_2$/OHCbl from GSH, which could be oxidized to GSSG by free $OH_2$/OHCbl.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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