발효식품에서 분리한 야생 효모 12 균주의 주류 제조 가능성을 조사하기 위해, 알코올 발효에 관여하는 특성을 분석하였다. 알코올 및 당 내성을 조사한 후, 당화액을 제조하여 pH, 고형분 함량, 적정산도, 아미노산도, 알코올, 유기산 및 향기성분 등을 분석하였다. S. cerevisiae 효모의 알코올 내성은 10%에서 보였으나 non-Saccharomyces 효모는 P. kudriavzevii N77-4를 제외하고 내성이 낮았다. 당 내성은 H. opuntiae HP1-2, C. tropicalis Y447을 제외한 효모에서 모두 우수하였다. 야생 효모를 이용한 알코올 발효액의 pH는 3.01−3.61, 고형분 함량은 8.73−13.10°Brix로 S. cerevisiae보다 non-Saccharomyces가 높았다. 적정산도는 0.25−0.33%로, 아미노산도는 1.61−2.61 g/100 ml으로 non-Saccharomyces 효모가 높은 값을 나타내었다. 알코올 함량은 2.25−8.5%로 S. cerevisiae에 비해 non-Saccharomyces 효모가 매우 낮았다. 야생 효모로 알코올 발효시 유기산은 사과산, 초산, 호박산 등이 증가하였고, 그 중 P. kudriavzevii N77-4는 낮은 초산 함량과 높은 사과산 및 호박산 함량을 나타내었다. 당화액을 전자코로 분석한 결과, DF1의 오른쪽 범주에 속했으며, 효모 발효액은 DF1의 왼쪽 범주에 속하여 발효에 따른 뚜렷한 차이를 보였다. 휘발성 향기성분은 non-Saccharomyces 효모에서 ethyl acetate가, S. cerevisiae 효모는 ethanol 화합물이 높은 향기성분을 나타내었다.
non-Saccharomyces 효모는 야생효모로서, 다양한 효소를 세포 밖으로 분비하여 와인의 향기 성분 증가에 중요한 영향을 준다고 알려져 있다. 본 연구에서는 한국의 발효식품에서 분리된 효모 1,007주의 세포외 효소 활성을 조사하였다. 그 결과, β-glucosidase 566, glucanase 45, protease 401로 나타났으며, AA decarboxylase 활성 균주는 각 아미노산 별로 His 69, Tyr 306, Phe 171, Trp 23, Lys 197, Leu 198 균주로 나타났다. Cerulenin 과 TFL 내성 균주는 각각 563, 610주로, 15% 에탄올 내성 균주는 307주로 나타났다. 황화수소 생성균은 500주로 조사되었다. AA decarboxylation와 황화수소 저생성 균주 중 유용 효모 12 균주를 선발하여 26S rDNA 염기서열을 분석한 결과, C. tropicalis, H. opuntiae, H. uvarum, P. kudriavzevii, S. cerevisiae, W. anomalus로 각각 동정되었다. 12주의 효모 중 당 내성 우수 균주는 9주이며, 알코올 내성 우수 균주는 5 균주로 나타났다. 알코올 발효능은 Saccharomyces 효모는 8% 이상으로 나타났으며, non-Saccharomyces 효모는 3% 내외로 나타났다.
본 연구에서는 진균류 유래의 새로운 항치매성 BChE저해물질을 생산할 목적으로 대전광역시 하천에서 분리하여 선별한 비병원성 야생효모들의 무세포추출물들을 제조하여 이들의 BChE 저해활성 측정하였다. 비병원성 야생효모들 중 S. cerevisiae WJSL0113의 무세포추출물이 85.2%의 BChE 저해활성을 보여 최종 선발하였다. 선발 균주의 BChE 저해활성은 시판 주류용 S. cerevisiae과 식용 버섯들의 추출물보다 높은 저해활성을 보였고 선발 균주인 S. cerevisiae WJSL0113을 30℃에서 48시간 배양하였을 때 가장 높은 항치매성 BChE 저해활성을 보였다.
본 연구는 기존에 과실주 발효 시, non-Saccharomyces 효모를 혼합 발효하여 향기성분을 증가시키는 기술을 확대하여 단독 및 혼합 발효로 제조한 탁주 술덧의 향기성분을 증가시킨 후 증류 과정을 통해 주질을 향상시킬 수 있다는 이론을 검증하고자 한 연구이다. 연구를 진행하기 전, 예상한 것처럼, 혼합 발효 증류식 소주에서 과실향을 나타내는 저분자 ester 계열의 휘발성 향기성분들의 함량이 증가하는 것이 입증되었으며, H. uvarum 계열의 효모를 사용한 경우, HU SJ69 혼합 발효구는 S. cerevisiae 단독 발효구와 비슷한 아미노산 함량을 나타냈으나, HU S6 혼합 발효구의 경우, 아미노산 함량이 감소하는 것으로 나타났다. 관능검사 결과, 휘발성 향기성분이 증가한 HU S6 혼합 발효구에서 SC NY21을 사용한 다른 증류식 소주들과 비교하여 유의적으로 큰 차이를 나타내지는 않았지만, 조금 더 높은 향미 점수를 얻은 것을 통해, 향후 non-Saccharomyces 효모의 혼합 발효를 통한 증류식 소주의 품질을 향상시킬 수 있는 기초연구로써 중요한 의미를 가진다고 판단된다. 또한, H. uvarum 계열 효모의 경우에는 국내에서는 식품 원료로 등재되지 않았기 때문에, 향후 산업적 이용을 위한 안전성 검증 등의 연구가 추가되어야 할 것으로 사료된다.
본 연구에서는 밀웜으로 잘 알려진 갈색거저리 유충(Tenebrio molitor larvae)분말을 Saccharomyces cerevisiae M1(KACC 93023)으로 발효하였다. 그 후 발효물을 orotic acid에 의해 비 알코올성 지방간이 유발된 흰쥐에 급여하여 개선 여부를 판단해보았다. Orotic acid로 인해 지질 대사에 이상이 생긴 대조군의 경우 장기 무게 및 체중이 증가한 것에 반해 발효 갈색거저리 유충 분말을 급여한 군에서는 정상군과 흡사한 중량을 나타냈다. 그리고 간 건강의 지표로 알려진 AST, ALT, ALP 및 LDH 활성 역시 가장 낮았으며, 각종 지질 관련 지표들도 긍정적으로 나타나 개선 효과가 있는 것으로 판단된다. 또한 간 조직 및 혈청 내 과산화지질, glutathione 함량 역시 정상군과 흡사하거나 더 뛰어난 수치를 띄었다. 마지막으로 H&E 염색, Oil red O 염색을 통한 간 조직의 형태학적 관찰 결과, 발효 갈색거저리를 급여한 군에서 정상군과 흡사한 간세포의 형태 및 배열과 함께 염색된 지방이 눈에 띄게 감소된 모습을 나타내었다. 위 결과를 종합해본다면, 일반 갈색거저리를 급여하였을 때 일부 실험에서 수치가 개선됨을 확인할 수 있었고, 이를 효모로 발효시켰을 경우 대부분의 지표에서 정상치에 가까울 만큼 더욱 긍정적인 개선효과를 나타내었다. 이를 통해 발효물이 비 알코올성 지방간의 개선에 도움을 주는 것으로 판단, 향후 다양한 제품의 소재로 활용될 가능성을 시사하였다.
Saccharomyces cerevisiae를 이용하여 효율적인 호흡저해 스크리닝 방법을 개발하고자 실험하였다. S. cerevisiae균을 glucose 발효와 미토콘드리아 호흡이 가능한 yeast extract-peptone-dextrose (YPD) 배지와 단지 미토콘드리아 호흡만이 가능한 non-fermentable carbon source-yeast extract (NFY) 배지로 수확하였다. 96-well plate의 각 well에 균 현탁액을 분주한 다음 다양한 작용기작의 46개 살균제를 여러 가지 농도로 처리하였다. NFY배지에서의 non-fermentable carbon source로는 ethanol (NFY-E배지) 및 glycerol (NFY-G배지), lactate (NFY-L배지)를 이용하였다. 접종 후 $1{\sim}3$일 동안 배양한 다음 최소억제농도 (minimum inhibitory concentration, MIC)를 결정한 결과, 4개의 호흡억제 살균제인 azoxystrobin, kresoxim-methyl, metominostrobin, trifloxystrobin은 YPD 배지에서 균의 생육을 전혀 억제하지 못하였으나, 세가지 NFY배지에서는 높은 항균활성을 보였다. 이와는 반대로 5개의 N-trihalomethylthio계 살균제는 NFY배지보다 YPD 배지에서 높은 활성을 보였다. 그리고 11개 살균제는 두 배지 모두에서 같은 항균활성을 나타내었고, 나머지 26개의 살균제는 모든 배지에서 전혀 항균활성을 보이지 않았다. 그러므로 S. cerevisiae와 96-well plate를 이용한 호흡저해제 검정법은 신속하고 편리하게 호흡저해제를 스크리닝 할 수 있는 방법으로 여겨진다.
Successive application of Saccharomyces cerevisiae DSM 70424 and Saccharomyces rouxii DSM 2535 or DSM 2531 in the production of non-alcoholic beer was investigated. The aim of the study was to consider the impact of the 2 mentioned strains of S. rouxii on the reduction of alcohol content in wort fermented at 12 or $24^{\circ}C$ for 96 hr, applying periodic aeration. The 2 S. rouxii strains were added at the $48^{th}$ hr of fermentation after thermal inactivation of S. cerevisiae cells. The greatest alcohol decrease rate was observed for the treatment containing S. rouxii DSM 2535-fermented at $24^{\circ}C$ (from 1.56 to 0.36%). The concentration of acetaldehyde, diacetyl, and 2,3-pentandione, that have a key role in appearance of 'wort' and 'buttery' off flavors, were significantly lower in S. rouxii-containing treatments fermented at $24^{\circ}C$. S. rouxii-containing treatment fermented at $24^{\circ}C$ showed slightly lower overall flavor acceptability compared to S. cerevisiae-containing treatment fermented at the same temperature. Such score was improved for the products obtained at $12^{\circ}C$.
Saccharomyces cerevisiae의 RNAI 유전자의 온도 감수성 돌연변이 균주는 성장허용 온도인 23"C에서는 정상적인 성"J--을하나, 성 장억제 온도인 36°C에서는 tRNA, rRNA 그러고 mRNA 의 선우울질을을 핵내에 축적함으후써 성장을 못한다. 본 실 험에서는 complementation 에 의하여 RNAI 유전자를 클로녕하였으며 concomitant loss 실험에 의하여 이 유천자의 클로닝 을 확인하였다. 유전자의 위치를 확인한 결과 3.5kb의 Bgl II 조각내에 RNAI 유전자가 존재함을 알 수 있였으며, 2.1kb에 해당하는 BamH I -Bgl II 조각에서는 RNAI 유전지에 의한 complementation 능력이 상실되는 것으후 보아 RNAI 유전자 는 3.5kb의 BglIl 조각내에 포함되는 BamH 1 자리 주위에 결쳐 있픔을 알 수 있었다.
This study was conducted to supplement single and complex probiotics to investigate the effect on growing-finishing pigs and compost. In experiment 1, the 64 crossbred ([Landrace × Yorkshire] × Duroc) pigs with an initial body weight of 18.75 ± 0.33 kg and a birth of 63 days were assigned to a completely randomized four treatment groups based on the initial body weight (4 pigs in a pen with 4 replicate pens for each treatment). For 13 weeks, the dietary treatments were provided: 1) Control (CON; basal diet), 2) T1 (CON + 0.2% Bacillus subtilis), 3) T2 (CON + 0.2% Saccharomyces cerevisiae), 4) T3 (CON + 0.2% Bacillus subtilis + 0.2% Saccharomyces cerevisiae). In experiment 2, the pig manure was obtained from Chungbuk National University (Cheongju, Korea) swine farm. For 12 weeks, the supplementary treatments were provided: 1) CON, non-additive compost; 2) T1, spray Bacillus subtilis 10 g per 3.306 m2; 3) T2, spray Bacillus subtilis 40 g per 3.306 m2; 4) T3, spray Saccharomyces cerevisiae 10 g per 3.306 m2; 5) T4: spray Saccharomyces cerevisiae 40 g per 3.306 m2; 6) T5, spray Bacillus subtilis 5 g + Saccharomyces cerevisiae 5 g per 3.306 m2; 7) T6, spray Saccharomyces subtilis 20 g + S. cerevisiae 20 g per 3.306 m2 and there were 6 replicates each treatment. In experiment 1, During the overall experimental period, T3 showed significantly improved (p < 0.05) feed conversion ratio and average daily gain compared to other groups. In average maturity score, T3 showed significantly higher (p < 0.05) than other groups. Supplementing complex probiotics group improved (p < 0.05) H2S emissions and fecal microflora compared to the non-supplementing group. In experiment 2, additive probiotics groups had no effect (p > 0.05) on moisture content than the non-additive group at 9 and 12 weeks. T6 showed a significantly improved (p < 0.05) average maturity score at all periods and ammonia emissions at 1 week and 4 weeks compared to other groups. In summary, supplementation complex probiotics induced positive effects on both pigs and compost.
Although engineered Saccharomyces cerevisiae fermenting cellobiose is useful for the production of biofuels from cellulosic biomass, cellodextrin accumulation is one of the main problems reducing ethanol yield and productivity in cellobiose fermentation with S. cerevisiae expressing cellodextrin transporter (CDT) and intracellular β-glucosidase (GH1-1). In this study, we investigated the reason for the cellodextrin accumulation and how to alleviate its formation during cellobiose fermentation using engineered S. cerevisiae fermenting cellobiose. From the series of cellobiose fermentation using S. cerevisiae expressing only GH1-1 under several culture conditions, it was discovered that small amounts of GH1-1 were secreted and cellodextrin was generated through trans-glycosylation activity of the secreted GH1-1. As GH1-1 does not have a secretion signal peptide, non-conventional protein secretion might facilitate the secretion of GH1-1. In cellobiose fermentations with S. cerevisiae expressing only GH1-1, knockout of TLG2 gene involved in non-conventional protein secretion pathway significantly delayed cellodextrin formation by reducing the secretion of GH1-1 by more than 50%. However, in cellobiose fermentations with S. cerevisiae expressing both GH1-1 and CDT-1, TLG2 knockout did not show a significant effect on cellodextrin formation, although secretion of GH1-1 was reduced by more than 40%. These results suggest that the development of new intracellular β-glucosidase, not influenced by non-conventional protein secretion, is required for better cellobiose fermentation performances of engineered S. cerevisiae fermenting cellobiose.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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