용균성 야생 점액세균 204균주를 국내 토양으로부터 순수분리하였고, 분리균주의 16S rRNA 부분 염기서열을 결정하였다. Ribosomal Database Project(RDP) II를 이용하여 분리균주 각각의 16S rRNA 염기서열을 분석한 결과 전체 분리균주의 65%를 차지하는 132 균주들이 Myxococcus 속에 속할 것으로 예상되었으며, 29%를 차지하는 59 균주들이 Corallococcus 속, 4 균주가 Archangium 속, 그리고 4 균주가 Stigmatella 속에 속할 것으로 분석되었다. 그리고 나머지 5 균주는 알려진 균주와의 유연관계가 멀어 분류가 확실하지 않았다. 한편, 16S rRNA염기서열의 비교분석은 분리균주의 50%가 16S rRNA부분 염기서열상에 적어도 한 염기 이상의 차이를 지니고 있음을 보여주었다. 하지만 동일한 염기서열을 지니는 것으로 분석된 균주에서도 서로 다른 집락모서리를 형성하는 등 다른 균주로 판명되는 것으로 보아 전체 분리균주는 다양성이 81% 이상인 다양한 균주들인 것으로 사료되었다.
Phylogenetic analysis of the groEL1 and xynB1 gene sequences from Sorangium cellulosum strains isolated in Korea previously revealed the existence of at least 5 subgroups (A-E). In the present study, we used sequence analysis of polymerase chain reaction-amplified biosynthetic genes of strains from the 5 subgroups to indicate correlations between S. cellulosum subgroups and their secondary metabolic gene categories. We detected putative biosynthetic genes for disorazol, epothilone, ambruticin, and soraphen in group A, group C, group D, and group E strains, respectively. With the exception of KYC3204, culture extracts from group A, group B, and group C strains exhibited no noticeable antimicrobial inhibitory activities. By contrast, culture extracts from group D strains inhibited the growth of Candida albicans, whereas culture extracts from group E strains inhibited the growth of C. albicans and Staphylococcus aureus. High performance liquid chromatography analysis of the culture extracts from the strains of each subgroup revealed unique peak patterns. Our findings indicate the existence of at least 5 subgroups of S. cellulosum strains, each of which has the potential to produce a unique set of secondary metabolites.
고추탄저병을 생물학적으로 방제할 수 있는 미생물을 얻기 위하여 고추탄저균 C. acutatum ACYSJ001의 성장을 억제하는 점액세균을 탐색하였다. Myxococcus속에 속하는 59균주와 Corallococcus 속에 속하는 34균주 등 총 93균주의 용균성 점액세균에 대해 고추탄저균인 C. acutatum ACYSJ001에 대한 성장 억제 활성을 조사한 결과, Corollococcus속에 속하는 대부분의 점액세균들이 C. acutatum ACYSJ001의 성장을 저해하지 않는 반면, Myxococcus속으로 동정된 10균주들은 C. acutatum ACYSJ001의 성장을 강하게 저해하는 것으로 나타났다. 이러한 결과는 Myxococcus속에 속하는 여러 점액세균들이 고추탄저병을 억제하는 미생물로서 활용될 수 있는 가능성이 높으며, 또한 새로운 항진균물질 탐색을 위한 좋은 생물연구소재임을 보여주었다.
국내 토양시료에서 분리한 174 Corallococcus 속 균주와 207 Myxococcus 속 균주들의 배양추출물을 제조하고 Candida albicans, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus에 대한 항균 활성을 비교하였다. 항진균 활성을 보이는 균주의 비율은 Corallococcus가 7.5%(174균주 중 13균주)로 51.7%(207균주 중 107균주)를 보인 Myxococcus에 비해 낮았다. 하지만, 항세균 활성을 보인 균주의 비율은 Corallococcus가 12.1%(21균주)로 1%(2균주)를 보인 Myxococcus에 비해 상대적으로 높았다. Corallococcus 균주 중 P. aeruginosa, S. aureus에 모두 활성을 보이는 6 C. coralloides 균주들은 자실체 형성에서는 차이를 보였지만 항세균 활성을 나타내는 배양추출물의 HPLC 크로마토그램은 유사하였는데, 이들이 생산하는 항세균 물질의 생산은 CYS 배지에서 6일 이상 배양할 때 가장 높았다.
충남 대둔산의 토양으로부터 분리한 점액세균을 ARJ라 명명하고 그 특성을 알아보았다. CT 배지에서 swarming을 하며 성장한 이 균주는 slime을 형성하였고, 액체 및 고체배지 상에서 황록색의 색소를 방출하였으며 swarming 부분을 파장이 366 nm인 자외선으로 조사하였을 때 초록색의 형광을 띄었다. 또한 이 균주는 영양분이 고갈되었을 때 fruiting body를 형성하는 것으로 보아 Myxobacteria라고 생각되었으며 주사전자 현미경 관찰 결과 이 균주가 형성한 fruiting body는 stalk이 없었고 naked myxospore를 가지고 있었다. Myxobacteria의 분류에 있어서 가장 중요한 이러한 형태학적 특성들로 볼때 이 균주는 Myxococcus virescens와 가장 유사한 것으로 밝혀졌다. 한편 이 균주는 특히 gram 양성 세균에 대해 antimicrobial activity가 있는 것으로 나타났는데, 여과한 배양 여액에서도 이렇ㄴ activity가 있었지만 비변성 polyacrylamide 전기영동을 하여 본 결과 이 물질이 단백질은 아닌 것으로 밝혀졌다. 또한 이 배양 여액은 상당한 proteolytic activity가 있었으며 최소한 2개의 proteolytic enzyme이 있는 것으로 비변성 polyacrylamide 전기영동을 통하여 밝혀졌다.
국내에서 분리한 9균주의 Sorangium cellulosum로부터 중합효소연쇄반응(PCR)을 통해 polyketide synthase(PKS)의 ketosynthase(KS) domain을 암호화하는 DNA를 증폭하고, 플라스미드 벡터에 클로닝한 후, 염기서열을 결정하였다. 전체 83개의 클로닝된 DNA 조각을 분석하여 유사한 조각을 배제한 결과, 43조각이 KS domain을 암호화하는 독립된 DNA 조각으로 판명되었다. 43조각 중 32조각의 아미노산 서열이 이미 클로닝된 PKS 유전자의 아미노산 서열과 70%-100% 유사하였으며, 나머지 11 조각은 알려진 서열과 67% 이하의 상동성을 가져 새로운 PKS 유전자일 가능성이 매우 높음을 보여주었다.
Proteolytic 활성을 나타내는 균주 KYC 1028, 1100, 1134, 1139, 1151, 1159, 1182등 7개 균주를 선발하였고, 이중 KYC 1134와 KYC 1139이 azocazein을 이용한 proteolytic 활성 조사에서 높은 활성을 나타내었다. 선발된 7개 균주의 동정은 16S rDNA 염기서열를 조사하였으며, NCBI에서 myxobacteria의 16S rDNA와 비교분석 하여 Myxococcus속 M. macrospores와 M. Fulvus에 높은 상동성을 나타내었다. 활성이 가장 높은 KYC 1134배양액의 생화학적 특성은 배양 7일까지 활성이 10배 증가하고, 단백질 생산도 함께 증가하였다. 배양액의 적정 proteolytic활성 온도는$60^{\circ}C$이고, pH 5에서 10까지 활성이 안정적이었다. 배양액의 proteases의 종류를 확인하기 위하여 11개의 inhibitors를 조사하여 bestatin만이 억제효과를 나타내어 amino peptidases와 exopeptidases와 종류가 배양액에 존재하는 것으로 보인다.
국내에서 분리된 에포틸론 생산 점액세균 Sorangium cellulosum KYC3013의 에포틸론 생합성 유전자군(epoA~F, epoK)을 클로닝하였다. 이 유전자들이 암호화하고 있는 단백질들의 아미노산 서열을 다른 대륙 또는 나라에서 분리된 S. cellulosum SMP44, S. cellulosum So ce90, S. cellulosum So0157-2의 단백질들과 비교한 결과 서로 97.4-99.8% 동일하였다. 이러한 결과는 에포틸론 생합성 유전자들이 S. cellulosum 균주들 사이에서 잘 보존되어 있음을 보여주었다.
국내 토양으로부터 Chondromyces crocatus KYC2823을 순수 분리하고, 또 다른 5균주를 동반 세균이 함께 존재하는 상태로 분리하였다. 균주 KYC2823은 경북 청도군에서 채취한 토양시료에서 분리하였으며, 자실체 형태와 특이한 향의 발산을 포함한 여러 특성이 전형적인 C. crocatus임을 보였다. 이에 더해, 16S rDNA 염기서열이 C. crocatus의 새 표준균주로 제안된 Cm c5과 99.8% 유사하였다. 한편, PCR을 이용한 polyketide 생합성 유전자 조각의 클로닝 및 분석은 균주 KYC2823이 전자전달계 저해물질인 ajudazol과 actin cytoskeleton의 기능에 영향을 미치는 물질인 chondramide의 생합성 유전자, 그리고 아직까지 클로닝되지 않은 polyketide 계열 물질의 생합성 유전자를 가지고 있음을 보여주었다.
점액세균은 포식활동, 자기방어, 세포 간 신호전달 및 아직까지 알려지지 않은 다른 기능을 위해 다양한 이차대사산물을 생산한다. 점액세균에서 분리된 많은 이차대사산물들은 독특한 작용기작을 가지며 항암, 항세균, 항진균 등과 같은 약학적으로 유용한 생리활성을 보인다. 따라서 전 세계적으로 많은 점액세균 균주들이 분리되었고 이들로부터 다양한 생리활성물질들이 탐색되었다. 하지만 16S rRNA 데이터베이스 분석에 의하면 야생에는 지금까지 분리된 종류 이외에도 다양한 점액세균 종류들이 존재할 것으로 추정되며, 유전체 서열 분석에 의하면 각 점액세균들은 기존에 알려진 물질보다 더 많은 물질을 생산할 수 있는 능력이 있는 것으로 나타났다. 본 총설에서는 점액세균 유래 이차대사산물들과 이들의 유전자, 점액세균에서의 기능, 생합성 유전자의 발현을 조절하는 전사조절인자 등에 대한 최근까지의 연구 현황을 살펴보았다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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