혈합육어 (멸치와 전어)와 백색육어 (농어와 도다리)의 육과 내장에서 추출한 조효소에 대하여 천연기질 및 합성 기질에 대한 효소 활성과 disc-PAG 전기영동에서 분리된 효소 단백질의 분포를 선택적 합성기질을 써서 비교 검토하였다. 육에는 SH-proteinase인 cathepsin L, B, 및 H 유사 효소가 분포하는 것을 확인 할 수 있었으며, 이 밖에도 cathepsin G 및 D도 다소 분포하는 것으로 추정되었다. 그리고 내장에는 강한 활성의 chymotrypsin 및 trypsin 유사 효소가 주로 분포하고 있음이 확인되었다. 육과 내장에서 추출한 조효소들은 공통적으로 멸치, 전어, 도다리 그리고 농어의 순으로 활성이 높은 것을 알 수 있었으며, 전체적으로 혈합육어에 분포되어 있는 효소가 백색육어류에 분포되어 있는 효소에 비하여 약 100배정도 높았다. 육과 내장의 조효소를 방어의 근원섬유단백질에 작용시킨 결과, 육 중의 조효소는 myosin heavy chain의 분해가 두드러졌으며, 특히 멸치의 효소가 근원섬유 단백질의 구성 subunit 모두에 대하여 강한 분해능을 보였다. 내장 조효소의 경우는 반응 초기에 myosin heavy chain과 actin을 현저하게 분해시켰으며, 혈합육어인 멸치와 전어 조효소의 분해능이 백색육어인 농어와 도다리의 조효소보다 강한 것을 확인 할 수 있었다. 육의 조효소는 어종에 따라 서로 다른 분해 양상을 보였으며, 내장 조효소는 혈합육어와 백색육어의 효소 활성뿐만 아니라 효소의 분포상으로도 많은 차이가 있었다.
육류 조리에 사용되거나 또는 육류 섭취시 부식으로 제공되는 농산물을 위주로 단백분해효소의 활성을 측정한 결과, 청양고추, 꽈리고추, 깻잎, 콩나물, 숙주나물에서 높은 효소 활성을 보였으며, 이중 콩나물의 단백질분해 활성이 가장 높았다. 또한 효소의 사용시 중요한 지표인 효소의 안정성을 투석과 동결 해동 후 잔존 효소활성을 측정하였다. 투석 후 숙주나물, 청양고추, 꽈리고추와 깻잎은 12, 23, 45%와 37%의 잔존 활성을 보였으며, 콩나물은 64%의 잔존 활성을 보임에 따라 비교적 다른 효소에 비해 안정한 것을 확인하였다. 동결 해동 후 숙주나물과 콩나물의 단백분해효소는 100%와 65%의 높은 잔존 활성을 보였다. 비교적 효소의 활성이 높고 또한 안정성이 우수한 콩나물의 단백분해효소의 활성은 소고기보다는 돼지고기에 대한 분해 효과가 우수하였으며, stroma protein보다는 myofibrillar과 sarcoplasmic protein에 대한 분해력이 우수하였다. SDS-PAGE에 의한 육 단백의 분해 특성은 myosin heavy chain, actin, tropomyosin과 myosin light chain이 관찰되었으며, 반응시간이 경과할수록 myosin heavy chain, actin, tropomyosin이 분해되는 경향을 보였다. 특히 2시간 효소처리 시 근원섬유 단백질의 분해 효과가 뛰어났다. 육 단백의 농도가 증가할수록 단백분해 활성은 완만히 증가하다가 평형을 이루는 경향을 보였다.
The present study was undertaken to determine whether p38 mitogen-activated protein kinase participates in the regulation of vascular smooth muscle contraction by endothelin-I (ET-1) in rat thoracic aorta. ET-1 induced a sustained contraction. In contrast, both the intracellular Ca$\^$2+/ and myosin light chain (MLC) phosphorylations were not sustained.(omitted)
Kim, Young-Ok;Park, Eun-Mi;Nam, Bo-Hye;Kong, Hee-Jeong;Kim, Woo-Jin;Noh, Jae-Koo;Lee, Sang-Jun;Kim, Kyung-Kil
Animal cells and systems
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제14권1호
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pp.25-30
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2010
We employed a new and improved differential display reverse transcription-polymerase chain reaction (DDRT-PCR) method, which involves annealing control primers (ACPs), to identify the genes that are specifically or prominently expressed in olive flounder (Paralichthys olivaceus) juveniles (35 days post-hatch; dph) compared to larval-stage (dph 21) flounder. Using 60 ACPs, we identified eight differentially expressed genes (DEGs) and basic local alignment search tool (BLAST) searches revealed eight known genes. Gene expression levels were confirmed by RT-PCR. Phosphoglucose isomerase (PGI) was highly expressed at 21 dph, while nephrosin, myosin light chain (MLC), myosin heavy chain (MHC), carboxypeptidase A, chymotrypsin B, fish-egg protein, and matrix protein were expressed at 35 dph. PGI, MLC, and MHC expression was further analyzed by RT-PCR. The differentially expressed genes identified in this study may provide insights into the molecular basis of development in olive flounder.
Objectives : This study was performed to investigate the effects of Semen Persicae(SP) on muscle type change and vascularization effect by measuring expression of Myosin heavy chain (MHC) and Vascular endothelial growth factor (VEGF) protein in the Middle cerebral artery occlusion(MCAo) rats. Methods : The middle cerebral artery was occluded, SP extraction was administrated for 4 days. The effects of SP on muscle type change and vascularization were measured. Results : 1. VEGF protein expressions in the Semen Persicae oral administration group of MCAo group were increased compared to the control group. 2. There were no significant difference between the Semen Persicae oral administration of MCAo group and the control group in MHC isoform (Type I, Type IIa) expression change. Conclusions : The present study demonstrates the effect of Semen Persicae in the vascularizing after ischemia, but has no significant effect in musle type change and the improvement of musle atrophy.
The differentiation of mouse embryonic stem(ES) cell into smooth muscle cells(SMC) may play a major role in cardiovascular development and under pathophysiological conditions. Therefore, in the present study, we have examined the differentiation of ES cells and its related gene expression. SMC differentiation was indicated by cellular morphology and time-dependent induction of dibutyryl adenosine 3,5-cyclic monophosphate(DBcAMP)and retinoic acid(RA) on smooth muscle ${\alpha}$-actin($SM{\alpha}A$), smooth muscle myosin heavy chain(SMMHC) gene expression. The control was undifferentiated ES cells(protein expressions represent 50-60kDaOct-4). The results of this study show that morphology of embryoid body and confirmation of $SM{\alpha}A$ expression by immunocytochemistry. Moreover, SMMHC and desmin expression was significantly increased by time dependent manner(5, 7, 15 days), in contrast to $SM{\alpha}A$ expression was slightly decreased on 15days. In conclusion, DBcAMP and RA stimulate mouse ES cells differentiation into SMC and enhanced $SM{\alpha}A$, SMMHC and desmin expression.
The present study characterized the fast skeletal myosin light chain-2 gene (mlc2f) in the euryhaline Javanese ricefish (Oryzias javanicus: Beloniformes). Coding nucleotide and deduced amino acid sequences of Javanese ricefish mlc2f were well conserved in the vertebrate lineage. Javanese ricefish mlc2f showed a typical seven-exon structure, and its promoter exhibited transcription factor binding motifs common to most muscle-specific genes. However, Javanese ricefish mlc2f also displayed tandem duplications of intronic sequences in both intron 1 and intron 3. Based on quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction, the mlc2f transcripts were highly predominant in skeletal muscles of adults and were differentially modulated during embryonic development. Microinjection of the mlc2f promoter-driven red fluorescent protein (RFP) reporter construct successfully exhibited heterologous expression of the fluorescent reporter, primarily in muscular areas of hatchlings, although the distribution pattern of RFP signals was not uniform due to the mosaic nature of the introduced transgene. Data from this study indicate that the Javanese ricefish mlc2f gene has undergone "intra-intronic" duplication events in a species-specific manner and that the mlc2f regulator may also be useful in heterologous expression assays of the skeletal muscles of this species.
Acute pancreatitis is a multifactorial disease associated with the premature activation of digestive enzymes. The genes expressed in pancreatic acinar cells determine the severity of the disease. The present study determined the differentially expressed genes in pancreatic acinar cells treated with cerulein as an in vitro model of acute pancreatitis. Pancreatic acinar AR42J cells were stimulated with $10^{-8}$ M cerulein for 4 h, and genes with altered expression were identified using a cDNA microarray for 4,000 rat genes and validated by real-time PCR. These genes showed a 2.5-fold or higher increase with cerulein: lithostatin, guanylate cyclase, myosin light chain kinase 2, cathepsin C, progestin-induced protein, and pancreatic trypsin 2. Stathin 1 and ribosomal protein S13 showed a 2.5-fold or higher decreases in expression. Real-time PCR analysis showed time-dependent alterations of these genes. Using commercially available antibodies specific for guanylate cyclase, myosin light chain kinase 2, and cathepsin C, a time-dependent increase in these proteins were observed by Western blotting. Thus, disturbances in proliferation, differentiation, cytoskeleton arrangement, enzyme activity, and secretion may be underlying mechanisms of acute pancreatitis.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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