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Knockdown of Archvillin by siRNA Inhibits Myofibril Assembly in Cultured Skeletal Myoblast

  • Lee, Yeong-Mi;Kim, Hyun-Suk;Choi, Jun-Hyuk;Choi, Jae-Kyoung;Joo, Young-Mi;Ahn, Seung-Ju;Min, Byung-In;Kim, Chong-Rak
    • 대한의생명과학회지
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    • 제13권4호
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    • pp.251-261
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    • 2007
  • A myofiber of skeletal muscle is composed of myofibrils, sarcolemma (plasma membrane), and constameres, which anchor the myofibrils to the sarcolemma. Achvillin is a recently identified F-actin binding muscle protein, co-isolates with dystrophin and caveolin-3 in low-density sarcolemma of striated muscle, and colocalizes with dystrophin at costameres, the specialized adhesion sites in muscle. Archvillin also binds to nebulin and localizes at myofibrillar Z-discs, the lateral boundaries of the sarcomere in muscle. However other roles of archvillin on the dynamics of myofibrillogenesis remain to be defined. The goal of this study is, by using siRNA-mediated gene silencing technique, to investigate the effect of archvillin on the dynamics of myofibrillogenesis in cell culture of a mouse skeletal myogenic cell line (C2C12), where presumptive myoblasts withdraw from the cell cycle, fuse, undergo de novo myofibrillogenesis, and differentiate into mature myotubes. The roles of archvillin in the assembly and maintenance of myofibril and during the progression of myofibrillogenesis induced in skeletal myoblast following gene silencing in the cell culture were investigated. Fluorescence microscopy demonstrated that the distribution of archvillin was changed along the course of myofibril assembly with nebulin, vinculin and F-actin and then located at Z-lines with nebulin. Fluorescence microscopy demonstrated that knockdown of mouse archvillin expression led to an impaired assembly of new myofibrillar clusters and delayed fusion and myofibrillogenesis although the mouse archvillin siRNA did not affect those expressions of archvillin binding proteins, such as nebulin and F-actin. This result is corresponded with that of RT-PCR and western blots. When the perturbed archvillin was rescued by co-transfection with GFP or Red tagged human archvillin construct, the inhibited cell fusion and myotube formation was recovered. By using siRNA technique, archvillin was found to be involved in early stage of myofibrillogenesis. Therefore, the current data suggest the idea that archvillin plays critical roles on cell fusion and dynamic myofibril assembly.

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통초.희렴 추출물의 항산화.항비만 활성 및 혼합물의 항비만 시너지 효과 (Anti-Oxidative and Anti-Obesity Activities of Tetrapanax papyriferus and Siegesbeckia pubescens Extracts and their Synergistic Anti-Obesity Effects)

  • 박정애;진경숙;이지영;권현주;김병우
    • 한국미생물·생명공학회지
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    • 제41권3호
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    • pp.341-349
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    • 2013
  • 본 연구에서는 통초(Tetrapanax papyriferus)와 희렴(Siegesbeckia pubescens)의 항산화 및 항비만 활성을 DPPH radical 소거능과 세포실험계를 이용하여 분석하였다. 통초와 희렴의 DPPH radical 소거능의 50% 저해능($IC_{50}$)은 각각 65.23과 47.79 ${\mu}g/ml$로 나타났다. 또한 두 시료 모두 농도 의존적으로 lipase 효소 활성을 유의적으로 억제시켰으며, 3T3-L1 preadipocyte를 이용하여 지방세포 분화 및 지방생성에 미치는 영향을 분석한 결과 통초와 희렴 모두 지방 세포 분화, 지방 축적, TG 함량 등을 독성 없이 농도의존적으로 억제함을 보였다. 이러한 통초와 희렴의 지방세포분화억제능은 핵심 작용 인자인 $C/EBP{\alpha}$, $C/EBP{\beta}$, 그리고 $PPAR{\gamma}$의 유전자 및 단백질 발현조절에서 기인함을 확인하였다. 또한 통초와 희렴 간의 항비만 시너지 효과를 분석한 결과 각 시료의 단독 처리시보다 병용 처리시 더 높은 지방세포분화억제능을 보여 두 시료간에 시너지 효과를 보유함을 확인하였다. 이러한 결과는 통초 및 희렴의 항비만 활성 및 그 작용 기전을 밝힌 것이며 추후 계속적인 연구를 통해 활성 물질의 규명이 필요할 것으로 판단된다.

북한의 2012년 교육과정 개정 전후 수학교과서 분석 : 초급중학교 1학년을 중심으로 (Analysis of Mathematics Textbooks Before and After the Curriculum Revision in 2012 of the North Korea : Focused on the 1st Grade of Middle School)

  • 정혜윤;이경화
    • 대한수학교육학회지:학교수학
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    • 제18권1호
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    • pp.143-157
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    • 2016
  • 본 연구에서는 개정 전후 교과서인 2009년과 2013년 북한 초급중학교 1학년 수학교과서를 대상으로 하여 내용 조직, 내용 전개, 내용 구성 방식 등의 변화방향을 분석하였다. 연구결과는 다음과 같다. 첫째, 내용 조직과 관련하여 대단원이 1단원 감소하였지만 중단원의 수는 그대로이며 소단원의 수는 4단원 증가하였다. 둘째, 내용 전개에 상당한 변화가 나타났다. 학생의 참여를 독려하고 학생에게 친근한 형태의 전개를 추구하는 경향이 확인되었다. 셋째, 내용 영역 구성과 관련하여, 분명한 변화가 나타났다. 수와 연산, 문자와 식 영역의 비율이 절반 가까이 줄어드는 대신 규칙성, 기하, 함수, 확률과 통계, 도형의 방정식, 집합과 명제 영역에 새로운 내용이 추가되었다. 이상과 같이 초급중학교 1학년 수학교과서의 내용 조직, 내용 전개, 내용 구성에 나타난 변화는 남한의 수학교과서와 비교할 때 여전히 큰 차이를 보이지만 과거에 비해 간격이 좁혀지고 있음을 시사한다. 결론적으로 2012년에 이루어진 북한의 수학교육과정 개정과 그에 따른 수학교과서는 남한에서 추구하는 수학교육의 기본 방향과 부합되는 측면이 증가되는 방향으로 변화하였다.

백두구 추출물의 항산화 및 항비만 효과 (Anti-Oxidative and Anti-Obesity Effects of Amomum Cardamomum L. Extract)

  • 박정애;진경숙;이지영;권현주;김병우
    • 한국미생물·생명공학회지
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    • 제42권3호
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    • pp.249-257
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    • 2014
  • 본 연구에서는 백두구(A. cardamomum L.) 메탄올 추출물(ACME)의 항산화 및 항비만 활성을 DPPH radical 소거능과 췌장 lipase 효소 활성 억제능, 그리고 세포실험계를 이용하여 분석하였다. 그 결과 ACME는 DPPH radical을 농도 의존적으로 소거하였으며 DPPH radical 소거능의 50% 저해농도($IC_{50}$)는 $25.15{\mu}g/ml$로 나타났다. 또한 ACME는 농도 의존적으로 lipase 효소 활성을 유의적으로 억제시켰으며, 3T3-L1 preadipocyte를 이용하여 지방세포 분화 및 지방생성, 생성된 지방의 분해에 미치는 영향을 분석한 결과 ACME는 지방세포 분화, 세포 내 지방 축적, TG 함량 등을 독성 없이 농도의존적으로 억제하였으며 지방세포 내 중성지방을 유의적으로 분해시키는 것으로 나타났다. 이러한 백두구의 지방세포 분화 억제능은 핵심 작용 인자인 $C/EBP{\alpha}$, $C/EBP{\beta}$, 그리고 $PPAR{\gamma}$의 유전자 및 단백질 발현조절에서 기인함을 확인하였다. 이러한 결과는 백두구가 보유한 항산화능과 췌장 lipase 활성 저해능, 지방세포 분화 억제능, 지방세포 내 지방 분해능을 통한 항비만 활성을 처음으로 밝혀낸 것이며 추후 계속적인 연구를 통해 활성 물질의 규명이 필요할 것으로 판단된다.

Taxifolin Inhibited the Nitric Oxide Production and Expression of Pro-inflammatory Cytokine mRNA in Lipopolysaccharide-stimulated RAW264.7 Cells

  • Rhee, Man-Hee;Endale, Mehari;Kamruzzaman, SM;Lee, Whi-Min;Park, Hwa-Jin;Yoo, Myung-Jo;Cho, Jae-Youl
    • 대한의생명과학회지
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    • 제14권3호
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    • pp.147-155
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    • 2008
  • In previous works, we found that solvent extract of Opuntia humifusa Raf., a member of the lactaceae family, displayed potent anti-oxidative and anti-inflammatory activities. Thus, all solvent fractions, except for the water layer, showed potent scavenging effects. According to activity-guided fractionation, one of active radical scavenging principles in the ethyl acetate fraction was found to be taxifolin. In this study, we investigated whether taxifolin showed anti-oxidative activity. In addition, taxifolin modulated nitric oxide (NO) release and the expression of pro-inflammatory cytokine mRNA such as interleukin-$1{\beta}$ (IL-$1{\beta}$), IL-6, granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF), and TNF-${\alpha}$. Taxifolin showed potent anti-oxidant activity with the $IC_{50}\;of\;8.5{\pm}1.4\;and\;9.3{\pm}1.0{\mu}M$ using xanthine/xanthine oxidase (XO) assay and 2,2-Diphenyl-lpicrylhydrazyl radical (DPPH) assay, respectively. We next determined the role of taxifolin on the immunomodulating activity using murine macrophage cell line RAW264.7 cells. Taxifolin dose-dependently inhibited NO production in lipopolysaccharide (LPS)-activated RAW264.7. It also significantly blocked the expression of inducible NO synthase (iNOS) mRNA in the LPS-stimulated RAW264.7 cells. In addition, taxifolin potently suppressed the expression of IL-$1{\beta}$, IL-6 and GM-CSF mRNA in LPS-activated RAW264.7 cells, but not that of TNF-${\alpha}$ Moreover, taxifolin significantly inhibited the transcriptional activity of nuclear factor-${\kappa}B$ (NF-${\kappa}B$) and activator protein -1 (AP-1). These results suggest that taxifolin may downregulate inflammatory iNOS, IL-$1{\beta}$, IL-6 and GM-CSF gene expressions through inhibition of NF-K and AP-1 activation in LPS-stimulated RAW264.7 cells.

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Immunohistochemical Expressions of Sodium/Iodide Symporter (NIS) and Thyroid Transcription Factor-l (TTF-1) and Their Relationship in Primary Pulmonary Adenocarcinoma

  • Lee Kyung-Eun;Kang Do-Young;Choi Phil-Jo;Hong Young-Seoub;Roh Mee-Sook;Shon Jae-Jeong;Lee Jung-Min;Hwang Soo-Myoung
    • 대한의생명과학회지
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    • 제12권3호
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    • pp.171-176
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    • 2006
  • Sodium iodide symporter (NIS) plays a key role in thyroid hormone production by efficiently accumulating iodide from the circulating blood into the thyocytes, and this is done against an electrochemical gradient. Thyroid transcription factor-l (TTF-l) is a homeodomain-containing protein expressed in embryonic diencephalons, thyroid, and lung and has been found to bind to thyroid specific promoters and to activate their transcriptional activity. TTF-l may be one of the factors capable of activating NIS gene expression in the thyroid gland, thus it accounts for the lower levels of NIS gene expression that are seen in the extrathyroidal tissues. However, a high frequency of TTF-l expression has been observed, especially in primary lung adenocarcinoma. The present study was undertaken in order to elucidate the relationship between the expression of NIS and TTF-l in primary lung adenocarcinoma. Immunohistochemical studies for NIS and TTF-l were performed in 64 primary lung adenocarcinomas. Immunoreactivities for NIS and TTF-l were found in 49 (76.6%) and 45 (70.3%) out of 64 cases, respectively. Forty-one (83.7%) of the 49 cases with positive NIS immunoreactivity showed positive TTF-l expression, whereas 11 (73.3%) of the 15 cases with negative NIS immunoreactivity showed negative TTF-l expression (P<0.05). So the NIS expression was significantly associated with the TTF-l expression. These findings suggest that TTF-l may be one of the factors capable of activating NIS gene expression in primary lung adenocarcinoma. Further studies are needed to define the relation between NIS and TTF-l for examining the mechanisms of tissue-specific NIS expression.

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Gene Transfer in Normal and Ischemic Tibialis Anterior Muscle of Rat by In Vivo Electroporation

  • ;;;;;곽병국
    • 대한의생명과학회지
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    • 제13권3호
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    • pp.207-212
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    • 2007
  • The purpose of this preliminary study is to improve the efficiency of gene transfer of nonviral plasmid DNA by in vivo electroporation in ischemic hindlimb muscle, tibialis anterior. Hindlimb ischemic model was aseptically made by excision of left femoral artery. Each $50\;{\mu}g$ of pEGFP-C1 and pGL3-control in $100\;{\mu}l$ 0.9% NaCl was injected in tibialis anterior muscle. In vivo electroporation was applied on the same site with 10 mm-distance 2 needle array electrodes and ECM830. In 3 groups of normal rat with different electric field strength 0, 200 and 800 V/cm, the expression of pEGFP-C1 was comparatively evaluated. In 8 groups of normal rats, the expression of pGL3-control was evaluated in 0, 40, 50, 80, 100, 150, 200 and 300 V/cm of electric field strength. In 5 groups of ischemic models, the expression of pGL3-control was analyzed on 0, 4, 7, 10 and 14 days elapsed after making ischemic models. In 9 groups of ischemic rats, the expression of pGL3-control was analyzed in the electric field strength 0, 60, 70, 80, 100, 150, 200, 250 and 300 V/cm. GFP expressions in normal tibialis anterior were high in the extent and degree in order of electric field strength of 200, 800 and 0 V/cm. Luciferase value was highest in $50{\sim}100\;V/cm$ electric field strength. In the case of ischemic models, luciferase expression was significantly increasing in the order elapsed time after making the model. The degree of luciferase expression was higher in cases of application of in vivo electroporation than in that of non-application and was highest in $100{\sim}150\;V/cm$. In conclusion, in vivo electroporation is effective in transfer and expression of plasmid DNA in normal and ischemic tibialis anterior of rat.

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Relationship between the Expression of Forkhead box M1 (FoxM1) and $p27^{kip1}$ in Non-Small Cell Lung Cancers

  • ;;;;;노미숙
    • 대한의생명과학회지
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    • 제14권4호
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    • pp.243-248
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    • 2008
  • The Forkhead box M1 (FoxM1) has been shown to regulate transcription of cell cycle genes essential for $G_1$-S and $G_2$-M progression, including $p27^{kip1}$. The $p27^{kip1}$ gene is a member of the universal cyclin-dependent kinase inhibitor family. Immunohistochemical studies for FoxM1 and $p27^{kip1}$ were performed in 154 lung cancers (69 squamous cell carcinomas (SCC) and 85 adenocarcinomas (ADC)). Immunoreactivity for FoxM1 and $p27^{kip1}$ were found in 79 (51.3%) and 49 (31.8%) out of 154 cases, respectively. Forty-six (58.2%) of the 79 cases with a positive FoxM1 immunoreactivity showed a negative $p27^{kip1}$ expression in 154 lung cancers. According to histologic type, 22 (53.7%) of the 41 SCC cases with a positive FoxM1 immunoreactivity showed a negative $p27^{kip1}$ expression and 24 (63.2%) of the 38 ADC cases with a positive FoxM1 immunoreactivity showed a negative $p27^{kip1}$ expression. The expression of $p27^{kip1}$ was significantly higher in the SCC than in the ADC (P=0.050). There were no significant associations between the FoxM1 and $p27^{kip1}$ expressions and other clinicopathologic factors. These findings suggest that FoxM1 overexpression may diminish the expression of $p27^{kip1}$ protein in lung cancers. Further studies are needed to define the relation between FoxM1 and $p27^{kip1}$ for examining the mechanisms of tissue-specific FoxM1 expression.

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일반담임교사와 영재담당교사의 영재성에 대한 인식 차이 (Differences of Perception on Giftedness between Homeroom Teachers and Teachers of The Gifted)

  • 정덕호;김영미;이준기;박선옥
    • 영재교육연구
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    • 제23권2호
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    • pp.161-175
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    • 2013
  • 본 연구의 목적은 일반 담임교사와 영재담당교사의 영재성에 대한 인식 차이를 조사하는 데 있다. 이를 위해 일반 담임교사 13명, 영재담당교사 8명의 자료를 수집하였다. 본 연구에서는 일반담임교사들의 교사추천서와 영재담당교사들이 영재성에 관해 토론한 전사 자료를 분석하였다. 연구의 결과는 다음과 같다. 일반 담임교사들은 수상, 학습태도, 발표, 성적을 영재를 정의하는데 사용하고 모범적인 학생을 선호하였다. 그리고 과제집착력은 중시한 반면 동기를 간과하고 있었다. 영재담당교사들은 동기나 자기만족도는 중시 여기나 그 밖의 다른 정의적 요소들은 소홀히 생각하였다. 또 담임교사들은 부모나 교육여건을 중시한 반면 영재전문가들은 그렇지 않았다. 일반 담임교사와 영재담당교사가 같은 학생에 대해 다른 단어를 사용하여 표현하는 것은 영재를 선발하는 데 있어 신뢰성을 떨어뜨릴 수 있다. 그러므로 일반 담임교사도 영재교사를 위한 교육 프로그램을 통해 영재성에 대해 더 잘 이해해야 할 필요가 있다.

섬쑥부쟁이(Aster glehni Fr. Schm.) 분획물의 항산화 및 항염증 활성 (Anti-oxidant and Anti-inflammation Activity of Fractions from Aster glehni Fr. Schm.)

  • 김한혁;박근혜;박강수;이진영;안봉전
    • 한국미생물·생명공학회지
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    • 제38권4호
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    • pp.434-441
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    • 2010
  • 최근 연구에서 폴리페놀을 함유한 천연물은 질병의 위험과 노화의 원인인 ROS와 RNS를 감소시키는 것과 연관이 있다고 밝혔다. 본 연구에서는 섬쑥부쟁이 추출물과 분획물의 산화와 염증에 대한 저해 효과가 있는지에 대한 연구를 조사하였다. 섬쑥부쟁이 70% 메탄올 추출물은 헥산층, 에틸아세테이트층, 부탄올층, 물층을 극성별로 분획하였다. 섬쑥부쟁이로부터 분획한 에틸아세테이트 추출물과 부탄올 추출물의 전자공여능은 $50\;{\mu}g/mL$에서 각각 58.0%, 46.4%를 나타냈다. 에틸아세테이트 추출물의 superoxide anion radical 소거능은 $50\;{\mu}g/mL$에서 64.65%를 나타냈고, 부탄올 추출물은 $50\;{\mu}g/mL$의 농도에서 35.66%의 저해 효과를 나타내었다. 항염증 효과와 관련된 hyaluronidase와 lipoxygenase의 저해 활성에 대한 에틸아세테이트 분획물의 효과는 $5\;{\mu}g/mL$의 농도에서 각각 24.37%, 29.5%의 저해 효과를 나타냈다. 이러한 에틸아세테이트 추출물의 항염증 효과는 nitric oxide 생성 억제에서도 유의했으며, Raw 264.7 cell 내 LPS에 의해 유도된 iNOS 단백질에서 $50\;{\mu}g/mL$의 EtOAc 추출물을 처리시 81.5%의 발현을 억제하는 효과가 확인되었다.