Interspecific hybrids between the ASpergillus spp., A. awamori, A. usamii and A. oryzae, were obtained by nuclear transfer technique. Nuclei isolated from an auxotrophic mutant strain were transferred into the protoplasts of a recipient strain of different species. The frequency of interspecific hybrid formation by nuclear transfer was $2*10^{-5}$$-7*10^{-4}$ In contrast, no interspecific hybrid was isolated by protoplast fusion. Among the hybrids tested, 10 strains showed increased activity of some or all components of cellulases, xylanases and amylase up to more than two times. Isozyme pattern of the hybrids were analyzed by polyacrylamide gel electrophoresis and isoelectric focusing followed by activity staining, which showed that some of the hybrids have isozyme patterns unidentical to either of the two parents. By measuring the DNA contents and the sizes ofthe conidia, the karyotypes of the hybrids were estimated to be aneuploid near to haploid, diploid or triploid. It was concluded that the unclear transfer technique is much more efficient in the formation of interspecific hybrids than protoplast fusion and is very useful for the improvement of Aspergillus strains.
A horizontal starch gel electrophoresis for enzyme proteins extracted from 2 species of Korean viviparid snails; Cipangopaludina chinensis malleata and C. japonica was carried out in order to elucidate their genetic relationships. A total of 10 enzymes were employed in three different kinds of buffer systems. Two loci from each enzyme of alcohol dehydrogenase, esterase, glucose phosphate isomerase, isocitrate dehydrogenase, iditol dehydrogenase, malate dehydrogenase and peptidase(VL); and only one locus dach from two enzymes, glycerlo-3-phosphate dehydrogenase and phosphoglucomutase were detected; but, four loci from peptidase(LGG) were observed. Most of loci in two viviparid species showed homozygous monomorphic banding patterns and some of them were specific as genetic markers between two different species. However, EST-1, MDH-1, PEP(VL)-1loci showed polymorphic banding patterns. Foru populations of C. chinensis malleata were more closely clustered in a dendrogram within the range of genetic identity values of 0.928-1.00, and these clusters were lineated with C. japonica at the value of 0.355. In summarizing the above results, two viviparid snail species dmployed in this study mostly showed monomorphic enzyme protein banding patterns, and genetic differences specific between two species.
Leaves of two-week old seedlings of tomato (Lycopersicon esculentum) were treated with various concentrations (0∼100 M) of $CdCl_2$ for up to 9 days and subsequent growth of seedlings, symptoms of oxidative stress and isozyme activities of antioxidant enzymes including superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), ascorbate peroxidase (APX) and peroxidase (POX) were investigated. Compared with the non-treated control, Cd exposure decreased biomass but increased Cd accumulation, hydrogen peroxide production and lipid peroxidation as malondialdehyde (MDA) formation in leaves and roots. Further studies on the developmental changes of isozyme activities showed that Fe-SOD, Cu/Zn-SOD and one of three APX isozymes decreased and CAT and one of four POX isozymes increased in leaves, whereas Fe-SOD, one of three POX isozymes and two of four APX isozymes decreased and CAT increased in roots, showing different expression of isozymes in leaves and roots with Cd exposure level and time. Based on our results, we suggest that the reduction of seedling growth by Cd exposure is the oxidative stress resulting from the over production of $H_2O_2$ and the insufficient activities of antioxidant enzymes particularly involved in the scavenging of $H_2O_2$. Further, the decreased activities of SOD and APX isozymes of chloroplast origin, the increased activities of CAT and POX and high $H_2O_2$ contents with Cd exposure might indicate that Cd-induced oxidative stress starts outside chloroplast.
Phlebia sp. MG-60 is the salt-tolerant, white-rot fungus which was isolated from a mangrove forest. This fungus expresses three kinds of manganese peroxidase (MGMnP) isozymes, MGMnP1, MGMnP2 and MGMnP3 in low nitrogen medium (LNM) or LNM containing NaCl. To date, there have been no reports on the biochemical salt-tolerance of these MnP isozymes due to the difficulty of purification. In present study, we established forced expression transformants of these three types of MnP isozymes. In addition, the fact that this fungus hardly produces native MnP in a high-nitrogen medium (HNM) was used to perform isozyme-selective expression and simple purification in HNM. The resulting MGMnPs showed high tolerance for NaCl compared with the MnP of Phanerochaete chrysosporium. It was worth noting that high concentration of NaCl (over 200 mM to 1200 mM) can enhance the activity of MGMnP1. Additionally, MGMnP1 showed relatively high thermo tolerance compared with other isozymes. MGMnPs may have evolved to adapt to chloride-rich environments, mangrove forest.
본 연구는 세포간극물질을 추출코자 실시하였다. 2. Vacuum flask에 물을 넣은 후 볏잎을 물에 잠기게 하고, 280mb로 기압을 줄여 벼조직의 세포간극내의 공기를 뺀 후 Vacuum을 끊고 증류수로 세포간극을 채운다. 볏잎에 묻은 증류수를 제거하고 본 연구에서 사용한 leaf holder에 끼워 3,000rpm으로 5분간 원심분리하면 세포간극물질만 채취할 수 있다. 3. 세포내물질과 세포간극물질의 성분분석 및 Peroxidase와 Easterase의 isozyme pattern을 비교한 결과 내용성분의 함량이 서로 다르고 효소의 활성과 isozyme pattern이 다르게 나타나 세포간극물질 추출액 속에는 세포내물질이 혼입되어 있지 않음을 증명하였다.
저온에 대한 생육 반응이 다른 호박 두 품종 간 항산화효소의 활성 변화를 분석해 본 결과, 저온에 강한 '흑종'의 잎에는 Rm이 0.20인 Mn-SOD와 와 0.52인 Fe-SOD가 주된 밴드였고, 저온에 약한 '재래 13'호의 잎에는 an이 0.20인 Mn-SOD와 0.58인 Cu/Zn-SOD가 주된 밴드였다. 저온 처리 후 10일째에 '흑종'의 잎에는 Rm이 0.58인 Cu/Zn-SOD밴드가 발현되었고, '재래 13호'의 경우 밴드의 밀도가 증가하는 경향을 보였다. APX 밴드 발현 양상은 두 품종 모두 적온 처리에서는 차이가 없었지만, 저온 처리 후 10일경부터 저온에 강한 '흑종'의 잎에서 새로운 APX밴드가 발현되었다. POB밴드의 발현 양상은 품종간에 뚜렷한 차이가 있었는데, 적온 하에서 '흑종'의 잎에서는 4개의 주된 밴드가, '재래 13호'의 잎에서는 한 개의 주된 밴드가 발현되었다. 그러나 저온 처리시 '흑종'의 잎에서는 Rm이 0.36, 0.40 및 0.54인 밴드의 밀도가 급격하게 증가한 반면 '재래 13호'의 잎에서는 Rm이 0.36과 0.54인 밴드의 밀도가 증가하였다. 저온에 대한 내성과 관계없이 두 품종 모두 저온 처리 후 초기에는 SOD, APX 및 POD의 활성이 급격하게 증가하는 경향을 보였지만, 저온 처리 후 기간이 경과할수록 품종간 차이가 뚜렷하였다. '흑종'의 잎에서는 이러한 활성이 지속적으로 유지되었지만, '재래 13호'의 잎에서는 저온 처리 후 5일경부터 급격하게 감소하여 적온 처리구보다 낮은 활성을 보여 저온에 대한 품종간 내성차이를 잘 반영해 주었다.
ICR계 주령 생쥐에 PQ를 투여한 후 TS, PD, PT를 경구 투여하여 생쥐 간에 미치는 항산화 효소(SOD, CAT)활성 증대 효과를 알아보기 위하여 효소 활성도와 전기영동상밴드의 변화를 조사하였다. SOD의 활성은 PQ+PD 투여군, CAT의 활성은 PQ+PD 투여군이 활성화되었으며, SOD isozyme은 전기영동상에서 3개의 밴드를 나타내었는데 이중 한 개의 밴드는 음극에 가까이 위치하고 다른 2개의 밴드는 양극 쪽에 위치하였고, KCN 처리한 결과 Cu, Zn-SOD는 음극 쪽에 위치한 반면 Mn-SOD는 양극쪽에 있었다. 이러한 결과를 종합하여 볼때 홍삼 사포닌의 항산화 효과는 항산화 효소인 SOD, CAT의 직접적인 작용으로 인하여 산화적 손상에 대한 보호 능력을 증대시큰 것으로 생각된다.
맥주보리 교배모본(Crossing block) 380품종 및 계통을 공시재료로 esterase 동위효소 가운데 4개의 loci에 대한 allele의 종류, 발견빈도, 유전자형 등을 분석한 결과는 다음과 같다. 1. 조사한 380 계통중 Est1 locus에서는Pr, Al, Ca, Af등 4개의 alleles이 있는 것으로 관찰되었으며 그 중 Pr allele이 약 70%, Ca allele이 28.4%로 대부분을 차지하였고, Ca 및 기타 Al allele은 2% 미만이었다. 2. Est2 locus에서는 Dr, Fr, Sp, Un, null 등 5개의 allele이 있는 것으로 나타났고 allele이 84.5%로 가장 높은 비율을 차지하였고, null allele가 10%이었다. 3. Est4 locus에서는 Nz, Su, At, null 등 4개의 allele이 발견되었는데 Su allele가 약 84%로 대부분을 차지하였으며, Nz, allele가 10.5%, At allele가 4.2%의 빈도를 보였다. 4. Est5 locus에서는 Mi, Pi, Te, od(null) 등 4개의 allele이 발견되었으며 Pi allele이 61.0% Mi allele이 34.2%이었다. 5. 4개의 Esterase loci에서 나타나는 pattern을 기준으로 한 유전자형은 25가지의 유형으로 분류할 수 있었으며, G1형(Pr-Fr-Su-Mi)이 28.1%, G2형(Pr-Fr-Su-Pi)이 39.5%로 대부분을 차지하였고 다음으로 12형(Ca-Fr-Su-Pi)이 약 8.1%의 비율로 나타났다. 기타의 유전자형들은 그 발견 빈도가 극히 낮은 편이었다.
은어의 자성발생 2배체를 유도하기 위해 자외선에 의한 정자의 유전적 불활성화 및 수정 난의 제 2감수분열과 제 1난할을 저지하기 위한 조건을 검토했다. 정자에 3,000~14,000 erg의 자외선을 조사하였는데 그 결과 3,000 erg를 조사한 시험구에서 89.3%의 높은 생존율을 보였으나 선량이 증가될수록 생존율이 저하했으며 7,000 erg의 자외선을 조사했을 때 생존율이 다시 회복되었다. 따라서 은어의 자성발생 2배체 유도시 정자를 유전적으로 불활성화시키기 위해서는 7,000 erg가 최적 선량인 것으로 나타났다. 제 2극체 방출 저지형 자성발생 2배체를 유도하기 위해서는 자외선을 조사한 정자와 정상 난을 수정 시켜 수정 5~8분 후에 15~30분간 1~2$^{\circ}C$의 저수온 처리를 한 결과 수정 5~5.5분 후에 15~17.5분간 처리한 실험구의 생존율이 비교적 높고 안정적이어서 제 2감수분열 저지를 위한 유효 조건으로 판명되었다. 제 1난할 저지형 자성발생 2배체의 유도를 위해서는 수정 70~95분 후에 수정 난을 30분간 저수온에 처리한 결과 모든 실험구의 생존율이 현저하게 낮아 생존율의 개선을 위해서는 처리방법과 강도에 대한 재검토가 필요하며 또 난 질을 유지시킬 수 있는 방안도 강구되어야 할 것이다.
Phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA), bryostatin, dioctanoyl glycero1 (DiC8)과 같은 Protein Ki-nase C (PKC)의 활성제는 세포질로부터 막이나 핵으로 PKC 동위효소의 전위를 유도한다. 활성화된 PKC는 일반적으로 암을 유발시키는 역할을 하지만 그와 반대로 사람유방암세포의 성장을 약화시키는 기능을 가지고 있다. PKC의 항증식효과와 전위가 MCF-7 세포에서 조사되었다. PMA, bryostatin, DiC8로 활성화된 PKC 동위효소의 전위는 MCF-7 세포의 여러 장소에서 나타났다. PMA는 PKC $\alpha$ 와 $\beta$는 핵이나 핵막 그리고 PKC $\delta$와 $\varepsilon$은 세포막으로 일부 전위시켰고, 반면 DiC8과 bryostatin은 PKC $\alpha$와 $\beta$를 각각 핵과 핵막으로 전위를 유도하였다. PKC 활성제의 항증식 효과에 있어서 PMA ($IC_{50}$/ values of 1.2$\pm$0.3nM)와 DiC8 ($IC_{50}$/ values of 5.0$\pm$1.1$\mu$M)는 세포의 성장을 억제시켰다. Bryostatin 역시 세포의 성장을 억제시켰지만, PMA로 관찰된 것보다는 낮은 수준이었다. 즉 100nM bryostatin에 의해 16% 정도 성장이 감소되었다. 그러나 PMA는 bryo-stalin과 함께 처리하였을 때 PMA의 항증식 효과는 낮았으나, 10$\mu$M DiC8과 함께 처리하였을 때는 효과가 없었다. 이러한 결과들은 각 PKC 동위효소들이 다른 특이한 위치로 전위되었으며, 특히 PKC $\alpha$ 동위효소가 세포성장의 항증식 기능을 조절하는데 중요한 역할을 함을 시사한다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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