이 연구의 목적은 이종산업인 섬유산업에서 사용되고 있는 천연염색의 원료인 천연염료의 항산화 활성을 확인하는 것으로 이를 위해 총 페놀 함량 분석, DPPH 라디칼소거능, ABTS 라디칼 소거능 및 단일항산소 억제 효과를 분석하였다. 7종의 천연염료 열수추출물에서 DPPH 라디칼 소거 활성을 나타내는 $IC_{50}$ 값은 0.012~0.239 mg/mL를 나타내어 일부 색소 추출물의 DPPH 소거 활성이 우수하다는 것을 알 수 있었다. 특히 폴리페놀함량이 높은 자단향과 아선약 추출물의 $IC_{50}$ 값이 각각 $12.4{\mu}g/mL$, $24.2{\mu}g/mL$로 높은 DPPH 라디칼 소거 활성을 확인하였다. 단일항산소 억제 효과 역시 아선약, 자단향 추출물에서 각각 0.19, 0.21 mg/mL을 나타내어 높은 소거 활성을 띄는 것으로 강한 빛에 의해 야기되는 단일항산소(singlet oxygen)를 억제할 수 있는 것을 알 수 있었다. 총 페놀 함량도 열수추출물에서 높은 수준을 나타내었다. 반면, 플로라워터의 항산화 활성은 열수추출물 대비 미비한 효과를 보였으나 한련초의 경우 열수추출물 보다 우수한 결과를 나타내었다. 플로라워터의 경우 액상시료를 첨가하여 수행되는 실험 방법에 의해 정량적 수치를 명확히 나타내기 어렵기 때문에 연구 방법적 측면에서 개선이 필요할 것으로 판단된다. 결론적으로 일부 천연색소 추출물은 생물체의 산화적 스트레스로부터 야기되는 활성산소를 억제하는 중요한 역할을 하며, 보다 심도 깊은 연구를 진행한다면 새로운 생물 소재로 활용성이 높을 것으로 사료된다.
본 연구는 Asp. terreus ATCC 20542 변이주로부터 lovastatin 생산용 seed culture의 대량제조를 위한 방법을 개발한 것이다. 배양체의 선발, 분석 및 최적 배양용기를 검토한 결과 대두를 이용하여 petri dish(${\phi}150{\times}20mm$)에 배양하였을 때 lovastatin의 생산성이 우수하였다. 포자의 발아 촉진을 위하여 대두에 Asp. terreus를 접종한 다음 열처리를 달리하여, 각 전배양체를 미강에 본배양하였다. 본배양액을 추출한 후 HPLC를 이용하여 lovastatin 생산량을 검토한 결과 $30^{\circ}C$에서 1시간 동안 열처리한 전배양체가 본배양 12일째에 가장 높은 lovastatin 생산성을 보이며, in vitro assay 결과, 대두를 $30^{\circ}C$에서 1시간 열처리하여 본배양하였을 경우에 HMG-CoA reductase가 82% 저해되는 것으로 나타났다. 따라서 기존의 포자현탁액 접종법보다 대두를 이용한 방법이 더욱 높은 HMG-CoA reductase 저해활성 및 배양시간의 단축성을 보여 산업화에 유리한 것으로 사료되었다.
This study was performed to define the cytotoxicity and the anti-inflammatory action of Pulsatilla koreana extracts. To analyze cytotoxic effects, gingival and periodontal ligament fibroblasts were used, and anti-inflammatory actions related to reduction of $IL-1{\beta}$ and $PGE_2$ production were performed in vitro, for the suggestion of efficacy and safety on periodontal therapeutic use of Pulsatilla koreana extracts. We extracted ethylacetate and butylalcohol from well-dried and ground Pulsatilla koreana throughout multiple processing, then used different concentration solution(0.1 %, 0.2 %, 0.4 %, 0.01 %, 0.02 %, 0.04 %, 1 %, 2 %) of ethylacetate and butylalcohol extracts to examine eytotoxic effects and anti-inflammatory actions Cytotoxic effects were examined by ELISA reader using MTT(Methyl Thiazol-2-YL-2, 5-diphenyl Tetrazolium bromide)solution following culture of human gingival and periodontal ligament fibroblasts. Synthesis of $IL-1{\beta}$was examined by $IL-1{\beta}$ enzyme-immunoassay(EIA)system after separation and culture of monocyte, and $PGE_2$ was examined by $PGE_2EIA$ system after culture of gingival fibroblasts. The results were as follows: 1. In the MTT test of gingival fibroblasts, the change of optical density was decreased significantly at 2 % of butylalcohol extracts and 0.04 %, 0.1 %, 0.2 %, 0.4 %, 1 %, 2 % of ethylacetate extracts.(p<0.05) 2. In the MTT test of periodontal ligament cells, the change of optical density were not differ significantly. but butylalcohol and ethylacetate extracts except from butylalcohol 0.01 % showed high cell cytotoxity. 3. Both ethylacetate and butylalcohol extracts from Pulsatilla koreana inhibited the synthesis of $IL-1{\beta}$and inhibition effect of ethylacetate extracts were higher than butylalcohol extracts. 4. Both ethylacetate and butylalcohol extracts from Pulsatilla koreana inhibited the synthesis of $PGE_2$, and ethylacetate extracts were higher than butylalcohol extracts. In conclusion, ethylacetate and butylalcohol extracts from Pulsatilla koreana showed little cell cytotoxity for gingival and periodontal ligament fibroblasts, and the inhibition of $IL-1{\beta}$ and $PGE_2$ sysnthesis, therefore it is considered that these extracts can be developed as the therapeutics of the periodontal disease.
본 연구에서는 쓴메밀 새싹 추출물(TBS)을 대상으로 histone acetyltransferase(HAT) 활성 저해능을 평가하고 oleic acid와 palmitic acid(OPA)를 이용하여 HepG2 세포에서 비알코올성 지방간을 유도하여 그 효과를 검토하였다. HeLa 세포의 nuclear extract(NE)를 HAT의 source로 하여 in vitro에서 TBS에 의한 HAT 활성 저해능을 평가한 결과 추출물의 처리에 의하여 HAT 활성이 억제됨을 관찰할 수 있었다. 또한, 대표적인 HAT 단백질인 p300과 CBP를 이용하여 동일한 방식으로 HAT 억제능을 평가한 결과 TBS 처리에 의하여 두 단백질 모두 활성이 감소하였으며, 특히 TBS는 p300의 활성을 특이적으로 저해함을 확인할 수 있었다. 그뿐만 아니라 HepG2 세포에 $400{\mu}M$의 oleic acid 및 $100{\mu}M$의 palmitic acid와 함께 $200{\mu}g/mL$, $500{\mu}g/mL$의 TBS를 처리한 후 NE를 이용하여 세포 내 HAT 활성을 측정한 결과 역시 추출물 처리에 의하여 세포 내 HAT 활성이 저해되어 있음이 관찰되었다. TBS에 의한 HAT 활성의 억제는 세포 내 다양한 단백질들의 아세틸화 저해와 지질축적에 의하여 아세틸화 변형을 일으키는 것으로 알려진 histone H3K9, H4K8의 아세틸화 및 H3K36의 아세틸화를 감소시켰으며, 세포 내 지질합성과 관련된 대표적 유전자인 SREBP1c, ACLY, FAS의 전사 활성 역시 저해함을 관찰하였다. 이와 같은 변화를 통하여 OPA에 의하여 HepG2 세포 내에 축적되었던 지질은 TBS의 처리에 의하여 효과적으로 감소하였으며 이때 처리된 OPA와 소재에 의한 세포 내 독성은 관찰되지 않았다. 그러므로 이러한 결과는 TBS에 의한 HAT 활성의 저해가 히스톤 단백질의 아세틸활 변형을 억제하고 이를 통하여 지방 합성 관련 유전자들의 전사 활성을 감소시켜 결과적으로 세포 내 지질축적을 방지하는 것으로 생각되며, TBS은 비알코올성 지방간질환의 예방에 좋은 천연물 소재로 활용될 수 있을 것이라 여겨진다.
본 연구는 현재 국내에서 시판되고 있는 지각과민 완화 치약의 단기간 내 효과를 알아보고자 자동칫솔질 기계를 이용하여 상아세관 폐쇄효과를 평가한 후 다음과 같은 결론을 얻었다. 1. 수평왕복동작으로 50회와 150회 칫솔질 했을 때 실험치약의 상아세관 평균면적은 각각 $1.00{\sim}2.98{\mu}m^2$, $1.76{\sim}3.53{\mu}m^2$로 나타났으므로, 150회 칫솔질을 한 경우보다 50회 칫솔질 했을 때 모든 실험 치약군에서 상아세관 폐쇄효과가 높았다. 2. 50회 칫솔질을 한 경우, 질산칼륨이 주성분인 센소다인 후레쉬민트 치약의 상아세관 폐쇄효과가 가장 높았으며, 염화스트론튬이 주성분인 센소다인 오리지널 치약의 상아세관 폐쇄효과가 가장 낮게 나타났다. 또한 센소다인 오리지널 치약과 센서티브 치약에 비해 덴티가드 시린이, 센소다인 후레쉬민트, 시린메드에프 치약에서 통계적으로 유의하게 상아세관 폐쇄효과가 높게 나타났다(p<0.05). 3. SEM 사진상에서도 덴티가드 시린이, 센소다인 후레쉬민트, 시린메드 에프 치약군에서는 유효성분들이 상아질 표면을 전체적으로 덮고 있어서 노출된 상아세관을 거의 볼 수 없지만, 센소다인 오리지널 치약과 센서티브 치약군은 부분적으로 개방된 상아세관을 관찰할 수 있었다. 이상의 연구결과를 종합해 볼 때, 질산칼륨과 인산삼칼슘이 주성분인 지각과민 완화치약은 단기간내 상아세관 폐쇄효과가 뛰어났으므로, 지각과민 환자들이 자가관리법으로 치료하고자 할 때 이러한 성분이 함유된 지각과민 완화치약을 초기에 사용하고, 지각과민증상이 완화되면 마모력이 적절한 일반치약으로 전환하여 사용하는 것이 지각과민 치료에 효과적이라고 사료된다.
김치의 EtOH 추출물을 이용하여 in vitro 상에서 DPPH와 ${\cdot}OH$ radical 소거능을 측정하였고, ICR mouse의 해마 부위에 $A{\beta}$를 주입시킨 AD model을 이용하여 김치 추출물을 2주간 투여한 후 물체 인지, T-maze, water maze의 실험방법을 이용하여 인지능력 개선 효과를 살펴보았다. 김치추출물은 우수한 DPPH와 ${\cdot}OH$ radical 소거능을 나타내었다. 또한 AD 동물 model에서 해마 부위에 $A{\beta}$를 주입한 control군의 경우 물체 인지, 기억 및 학습능력의 손상을 확인할 수 있었으나, 김치 추출물을 100과 200 mg/kg/day를 투여한 군에서는 물체 인지 실험에서 새로운 물체에 대한 호기심 정도가 높았으며, T-maze 실험에서는 새로운 길에 대한 탐색 정도도 뛰어난 것을 확인할 수 있었다. Water maze 실험에서도 도피대를 찾아가는 반복 훈련을 할수록 도피대를 찾아가는 시간이 점차 단축되는 것을 확인할 수 있었으며, 도피대를 기억하는 능력도 향상됨을 확인할 수 있었다. 본 연구 결과에서는 김치 추출물이 radical을 소거함으로써 산화적 스트레스로부터 보호하여 인지능력 및 기억능력을 향상시키는 효과가 있음을 확인하였다. 이러한 연구를 바탕으로 김치의 산화적 스트레스 개선 효과 및 AD 예방에 대한 상관관계에 대한 작용기작 연구가 이루어진다면 우리나라 대표 식품인 김치의 섭취로 인한 AD 예방 효과에 대해 명확하게 규명할 수 있을 것으로 사료되어진다.
본 연구는 산부식 법랑질의 타액오염 효과를 오염 시간별 전단결합강도를 통해 알아보고 주사 전자현미경으로 표면 변화를 관찰하고자 하였다. 타액오염 시간이 전단결합강도에 미치는 영향을 관찰하기 위하여 38% 인산용액으로 15초와 60초 산부식한 후 타액으로 0초, 1초, 20초, 60초동안 오염시켜 세척과 건조 후 주사 전자현미경으로 부식면을 검경하였으며, 교정용 레진을 이용하여 브라켓 접착 후 전단결합강도를 측정하고 통계 처리하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 타액에 오염시키지 않은 15초 산부식 군과 60초 산부식 군 사이의 전단결합강도는 통계적으로 유의한 차를 보이지 않았으나, 60초 산부식군에서 전단결합강도가 조금 낮았다. 2. 15초, 60초 산부식군에서 대조군, 1초, 20초, 60초의 타액오염 시간의 차이 에 따른 전단결합강도는 통계적으로 유의한 차를 보이지 않았으나, 타액오염시간의 증가에 따라 전단결합력이 낮아지는 경향을 보였다. 3. 주사 전자현미경 관찰시 대조군에서는 특징적인 부식양상을 보였으나 타액오염 군에서는 유기물이 침착되어 있었다.
본 연구에서는 인체 두피조직에서 미세수술법을 이용하여 모낭을 성공적으로 분리하였으며 다양한 조건으로 액침기관배양을 수행하였다. 우태아 혈청첨가시 모낭의 길이 성장이 저해되는 것으로 확인되어 무혈청 배지 조성을 시도하였다. 무혈청 배지로는 모낭 기관배양에 널리 이용되는 Williams'E medium을 기본으로 하는 Philpott medium과 자체 개발한 고농도 아미노산과 비타민(B군) 조성의 DHGM(Dongguk hair growth medium)을 이용하였다. 그리고 IMDM은 DHGM의 비교 대조군으로 이용하였다. 연구 결과 Philpott medium과 IMDM으로 배양한 모낭은 구조상으로는 길이 성장이 각각 9일과 12일 정도에 멈추며, 낮은 알카라인 포스파테이즈 발현, CK19 발현이 거의 없는 것으로 보아 세포사멸에 의한 퇴화(regression)가 빠르게 일어나는 것으로 판단되었다. 반면, DHGM으로 배양한 모낭은 상대적으로 긴 기간 동안 성장기의 구조를 보이며 25일까지 지속적인 길이 증가 및 3배 높은 알카라인 포스파테이즈 발현, 전반적인 CK19 발현을 나타내었다. 따라서 고농도의 아미노산 및 비타민 배지 조성이 생체 외에서 모낭을 장기간 배양하는데 중요한 역할을 하는 것으로 판단된다. 이러한 배양 방법은 장기간 검사를 필요로 하는 모낭에 대한 기초 생물학적 연구뿐만 아니라 새로운 탈모치료제의 효능 평가 분야에 이용될 수 있을 것이다.
1. The cell viability was determined by MTT method. Their cytotoxic activities against three cancer cell lines such as A549, MDA-MB-231 and SNU-C4 cell line were tested. Among them, The methanol extract of Saururus chinensis Baill. showed the strongest cytotoxic effect against SNU-C4 cells. These results suggest that the methanol extract of Saururus Chinensis Baill. possessed a potential antitumorous agent. 2. In vitro the antitoxic activity of ethanol extract of Saururus Chinensis Bail on NIH 3T3 fibroblasts was evaluate by the MTT (3-(4,5-dimethyl- thiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-2H-tetra캐lium bromide) and SRB (sulforhodamine B protein) assays. The number of NIH 3T3 fibroblasts were increased and tend to regenerate. These results suggest that Saururus Chinensis Bail extract retains a potential antitoxic activity. 3. Complexation of Cd (II) ion with ligands such as quercetin has been determined by UV-vis spectrophotometric method in tris buffer solution at various pH. It was found that only 1 : 1 Cd-complex is formed by the interaction between catechol moiety in ring B and cadmium [Cd(II)] in aqueous solution. The spectral parameters for Cd-complex were determined by Beer's law at various pH. It has shown that 1 : 1 Cd-complex has a maximum absorbance and red shift by the alkaline pH.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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