The hot-water extract of fruiting bodies in Fomitella fraxinea had potent anti-complementary activities. After fractionation of water-soluble polysaccharides by DEAE-Sephadex A-25 column chromatography, major anti-complementary activity was concentrated into the FF-AP1 among three polysaccharides (FF-NP, FF-AP1, FF-AP2). FF-AP1 was fractionated into $FF-AP1{\alpha}$ and $FF-AP1{\beta}$ obtained from the adsorbed fraction and unadsorbed fraction by affinity chromatography using a ConA-sepharose 4B column, respectively. $FF-AP1{\beta}$, which exihibited the highest anti-complementary activities had an IR absorption peak of $890cm^{-1}$, and a M.W. of about 15,000 (gel filtration). Anti-complementary activity of FF-AP1 decreased greatly by pronase treatment and periodate oxidation. $FF-AP1{\beta}$ responsible for potent anti-complemenary activities of Fomitella fraxinea was an acidic protein-containing heteroglycan consisted of 48% glucose, 13% mannose, and 12% galactose as major component sugars, 9.6% protein, 6% uronic acids.
We have used high pH anion-exchange chromatography to analyze low level (below $20{\mu}M$) $\alpha$-D-glucose-1-phosphate (G-1-P) that can be used as a cytostatic compound, an antibiotic, and immunosuppressive drug. Our chromatographic method afforded excellent peak resolution and seletivity for glucose-6-phosphate and various maltooligosaccharides as well as G-1-P. The pulsed amperometric detector yielded linear response on G-1-P ranging from 2 - $20{\mu}M$, giving slope of $4.8{\times}10^4$(peak area/${\mu}M$). The detection limit was $2{\mu}M$. This method was applied to the purification of thermophilic $\alpha$-glucan phosphorylase from Thermus caldophilus. The technique will be extremely useful in future studies concerning carbohydrate metabolism in living organisms.
The effects of medicinal mushroom (Sparassis crispa) powder supplementation on the rheological property of dough and the quality of bread were investigated. Naturally dried S. crispa powders (NDSCP) and freeze-dried ones (FDSCP) were prepared. Farinograph profiles of dough showed that mushroom powder addition at levels higher than 1% led to reduced dough stability suggested by decreased development time and increased weakness. The incorporation of S. crispa powders was significantly (p<0.05) lower compared to other mushrooms which might be attributed to its high content of beta-glucan. FDSCP was chosen over NDSCP because of its fragrant flavor which could be ascribed to the preservation of volatile polyphenol components. The quality of FDSCP bread was evaluated with respect to specific volume, texture, color, and organoleptic qualities. The specific volume of bread with S. crispa powder decreased compared to the control, while textural properties, such as hardness, chewiness, and gumminess, were enhanced. Sensory evaluation showed that 0.3% FDSCP incorporation presented the highest bread quality. With its daily consumption, S. crispa supplemented bread can provide consumers with multiple health benefits.
To improve the expression efficiency of recombinant endo-$\beta$-1,4-glucanase in P. pastoris, the endo-$\beta$-1,4-glucanase (egI) gene from Aspergillus niger was synthesized using optimized codons. Fourteen pairs of oligonucleotides with 15 bp overlap were designed and the full-length syn-egI gene was generated by two-step PCR-based DNA synthesis. In the synthesized endo-$\beta$-1,4-glucanase gene syn-egI, 193 nucleotides were changed, and the G+C content was decreased from 54% to 44.2%. The syn-egI gene was inserted into pPIC9K and transformed into P. pastoris GS115 by electroporation. The enzyme activity of recombinant P. pastoris stain 2-7# reached 20.3 U/ml with 1% barley $\beta$-glucan and 3.3 U/ml with 1% carboxymethylcellulose (CMC) as substrates in shake flasks versus 1,270.3 U/ml and 220.7 U/ml for the same substrates in 50-1 fermentors. The molecular mass of the recombinant protein was approximately 40 kDa as determined by SDS-PAGE analysis, the optimal temperature for recombinant enzyme activity was $70^{\circ}C$, and the optimal pH was 5.0 when CMC was used as the substrate.
A $\alpha$-l, 4-D-glucan maltohydrolase $(\beta$-amylase), secreted by the mesophilic aerobic bacterium Bacillus polymyxa No.26, was purified and characterized. The enzyme production was increased after a logarithmic phase of bacterial growth and paralleled with the onset of bacterial sporulation. By applying anion exchange chromatography and gel filtration the enzyme was purified 16.7-fold and had a specific activity of 285.7 units/mg. Two enzyme activities were eluted on a column of DEAE-Sephadex chromatography, and they were designated as E-I for a major enzyme peak and E-II for a minor peak. Of them, E-I enzyme peak was further purified by using gel chromatography. The molecular mass of this enzyme was determined to be 64, 000 daltons and consisted of a single subunit, showing an isoelectric point of 8.9. The enzyme was able to attack specifically the $\alpha$-l, 4-glycosidic linkages in soluble starch and caused its complete hydrolysis to maltose and $\beta$-limited dextrin. This amylolytic enzyme displayed a temperature optimum at $45^\circ{C}$ and a pH optimum at 7.0. The amino acid composition of the purified enzyme was quite similar to the other bacterial $\beta$-amylases reported. Surprisingly, the purified enzyme from this aerobe only exhibited hydrolytic activity on soluble starch, not on starch granules. The degradation of from starch by $\beta$-amylase was greatly stimulated by pullulanase addition. These results differentiated from other $\beta$-amylases reported. Based on a previous result that showed the enzyme system involves in effective degradation of raw starch granules, this result strongly suggested that the purified enzyme (E-I) can be a synergistic part of starch granule-digestion and E-II plays a crucial role in digestion of starch granules.
Ha Chang-Hoon;Yun Cheol-Won;Paik Hyun-Dong;Kim Seung-Wook;Kang Chang-Won;Hwang Han-Joon;Chang Hyo-Ihl
Journal of Microbiology and Biotechnology
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v.16
no.2
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pp.247-255
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2006
Yeast cell wall matrix particles are composed entirely of mannoprotein and ${\beta}-glucan$. The mannoproteins of yeast cell wall can systemically enhance the immune system. We previously purified and analyzed alkali-soluble ${\beta}-glucans$ [${\beta}$-(1,3)- and ${\beta}$-(1,6)-glucans] [10]. In the present study, a wild-type strain was first mutagenized with ultraviolet light, and the cell wall mutants were then selected by treatment with 1.0 mg/ml laminarinase (endo-${\beta}$-(1,3)-D-glucanase). Mannoproteins of Saccharomyces cerevisiae were released by laminarinase, purified by concanavalin-A affinity and ion-exchange chromatography. The results indicated that the mutants yielded 3-fold more mannoprotein than the wild-type. The mannoprotein mass of mutant K48L3 was 2.25 mg/100 mg of yeast cell dry mass. Carbohydrate analysis revealed that they contained mannose, glucose, and N-acetylglucosamine. Saccharomyces cerevisiae cell wall components, mannoproteins, are known to interact with macrophages through receptors, thereby inducing release of tumor necrosis factor alpha ($TNF-{\alpha}$) and nitric oxide. Mannoprotein tractions in the present study had a higher macrophage activity of secretion of $TNF-{\alpha}$ and nitric oxide and direct phagocytosis than positive control ($1{\mu}g$ of lipopolysaccharide). In particular, F1 and F3 fractions in mannoproteins of K48L3 enhanced and upregulated the activity of nitric oxide secretion and macrophage phagocytosis by approximately two- and four-fold, respectively.
The hepatoprotective and nephroprotective effects of Allium victorialis (AV) methanol extracts were investigated on high fat diet (HFD) supplied mice. Treatment of AV extracts (62.5, 125, 250 mg/kg) once a day for 12 weeks markedly decreased the liver steatohepatitis and kidney damages. AV extracts were inhibited the serum aspartate aminotransferase (AST), alanine aminotransferase (ALT), blood urea nitrogen (BUN) and creatinine elevations and reduced the histopathological changes of livers induced by HFD supply. In addition, AV extracts strengthened the antioxidative defense system with an increased activity of superoxide dismutase (SOD), glutathione (GSH), catalase and reduced malondialdehyde (MDA) levels. The 125 mg/kg of AV extract showed similar favorable effects as compared with silymarin 100 mg/kg. It is suggested that AV methanol extract administration is beneficial to the improvement of the alleviation of liver and kidney damages in HFD supplement.
This experiment was carried out to elucidate the sugar composition of polysaccharides and the structural features of water-soluble polysaccharides(WSP) isolated from Korean oak mistletoe, Loranthus yadoriki Sieb. The 48-hours ball-milled meals of extractive-free dried mistletoe sawdusts were extracted with distilled water for $24hrs{\times}2$ at room temperature. The extracts poured into 95% ethyl alcohol to precipitate. The separated precipitate of WSP, in form of yellowish white powder by lyophilization, was fractionated into four subfractions of WSP-1, WSP-2, WSP-3 and WSP-4 by anion exchange chromatography on DEAE-cellulose column. The sugar composition of WSPs was analyzed by GLC in form of their glycitol acetates, and the structure of polysaccharides in Fractions WSP-1 and WSP-2 was determined by FT-IR and GC-MS after methylation through and acetylation. The sugars of WSPs from Korean oak mistletoe, Loranthus yadoriki, are majorly arabinose and galactose in stem, galactose in leaves very high in content and showed difference in composition and monomeric units between stems and leaves. D-galactose, D-glucose and L-arabinose are the simple sugars consisting of polysaccharides in WSP-1. ($1{\rightarrow}3$)-Linked galactan is the bakcbone with side chain of ($1{\rightarrow}5$)- -L-arabinofuranosyl residues and ($1{\rightarrow}6$)- -D-galactopyranosyl residues, and ($1{\rightarrow}4$)-linked glucan also presents. ($1{\rightarrow}4$)-Linked rhamnogalacturonan and ($1{\rightarrow}4$)- and ($1{\rightarrow}3$)-linked galactan present in WSP-2.
In recent years, many researches are actively undertaken for environmental-friendly animal production according to the increased understanding about food safety because of the outbreak of various diseases such as mad cow disease, Foot and mouth disease and Poultry Influenza virus. However, high quality(higher safety)- animal production may not be successful without increasing of disease resistance of animal and the improvement of feeding environment. To increase the disease resistance is able to be accomplished by stimulating the immune function. The present study was undertaken to investigate the effects of enzyme mixture reinforced with ${\beta}$-glucanase activity which degrade polysaccharide to release ${\beta}$-glucan known as stimulator of immune function on the change of milk production and somatic cell count. After 12weeks of experimental feeding, milk production tended to be increased and somatic cell count was decreased from average $227{\times}10^4$ to $37.1{\times}10^4$. Milk protein and solid-fat content were tended to increase but milk fat showed decreasing tendency by the feeding of enzyme mixture. All together, it has been suggest6d that the improvement of high quality milk production may be possible through the dietary addition of immune modulating enzyme mixture in lactating dairy cows.
As an effort to select powerful anti-cariogenic materials from natural resources, various plant extracts were examined for their anti-S. mutans and anti-glucosyltransferase (GTase) activities. The ethanol extracts of licorice bark, which was produced after water extraction of licorice, showed the most powerful anti-S. mutans as well as anti-GTase activities. When licorice bark was consecutively fractionated with n-hexane, chloroform, ethylacetate, and butanol, the chloroform fraction exhibited the strongest anti-S. mutans activites. This fraction was further fractionated into 4 fractions through a silica gel column, and according to HPLC analysis, anti-S. mutant activities seemed to come mostly from relatively hydrophobic materials.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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