인삼(Panax ginseng C. A. Meyer)의 주요 생리활성물질인 진세노사이드(ginsenoside) Rb1과 Rg1의 효능검증 및 작용점을 규명하고자 HaCaT 피부각질세포에서 유전체 분석(gene expression profiles)을 실시하였다. 진세노사이드 Rb1과 Rg1 각각의 처리 농도 및 시간에 따른 HaCaT 세포에 대한 세포독성은 나타나지 않았으며, $10{\mu}g/mL$의 진세노사이드 Rb1과 Rg1 각각을 6 및 24 시간 처리하여 유전체 분석 결과, 진세노사이드 Rb1과 Rg1의 24 시간 처리군에서 항노화 및 피부탄력 관련 유전자인 fibroblast growth factor (FGF2)의 활성이 증가된 것으로 나타났다. 또한 진세노사이드 Rb1의 24 시간 처리군에서는 항산화 작용점에 있는 일련의 유전자군, FANCD2, FGF2, LEPR, FAS 등의 활성을 확인하였다. 향후 확인된 항노화 및 피부탄력 관련 주요인자들의 작용 및 상관관계를 구체적으로 확인하고, 특히 진세노사이드 Rb1의 신호전달을 완성하고자 한다.
The chemical and 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) radical scavenging activity changes of ginsenoside $Rb_1$-glycine and ginsenoside $Rg_1$-glycine mixtures by Maillard reaction were investigated to identify the role of Maillard reaction in the increased antioxidant activity of ginseng by heat-processing. The DPPH radical scavenging activity of $Rg_1$-glycine mixture was more strongly increased by heat-processing than that of $Rb_1$-glycine mixture. From the analyses of ginsenosides, $Rb_1$ was gradually changed into 20(S)-$Rg_3$, 20(R)-$Rg_3$, $Rk_1$ and $Rg_5$ by heat-processing. $Rg_1$ was gradually changed into 20(S)-$Rh_1$, 20(R)-$Rh_1$, $Rk_3$ and $Rh_4$ by heat-processing. However, the generation of these less-polar ginsenosides was not related to the increased DPPH radical scavenging activity of $Rb_1$-glycine and $Rg_1$-glycine mixtures because their DPPH radical scavenging activities were already significantly increased when dried at $50^{\circ}C$, which temperature induce no structural changes of ginsenosides. In the comparison of browning compound levels of $Rg_1$-glycine and $Rb_1$-glycine mixtures, the extents of Maillard reaction were positively correlated with their increased free radical scavenging activities. Based on the chemical and DPPH radical scavenging activity changes of $Rg_1$-glycine and $Rb_1$-glycine mixtures by heat-processing, we clearly identified that the increased free radical scavenging activity of ginsenoside is mediated by the Maillard reaction between sugar moiety of ginsenoside and amino acid.
인삼사포닌인 진세노사이드의 분석조건을 고성능액체크로마토그래피(HPLC)를 이용하여 최적화하였다. Gradient 조건을 변경하여 최적 분석조건을 확립하였고, 같은 조건하에서 인삼원재료와 홍삼 제품 중의 진세노사이드를 분석하였다. 원재료 중에서는 홍삼이 Rg1, Rb1, Rc, Rb2, Rd를 각각 0.29%, 0.82%, 0.33%, 0.32%, 0.11%를 함유하여 가장 높은 진세노사이드 함량을 보였으며, 여러 가지 홍삼제품 중에서는 홍삼엑기스가 가장 높은 함량을 보였다. 인삼 원료와 제품의 종류마다 진세노사이드 함량에 차이를 보였지만 대부분의 원료와 제품에서 Re, Rb1이 그 중 에서도 가장 높은 함량을 보였다.
Effect of ginsenoside mixture, ginsenoside $Rb_1$,$Rb_2$,$Rg_1$ and the fat soluble fraction of the roots of Panax ginseng C.A. Meyer on the activity of glucokinase (GK) in vitro has been observed and found that GK activity was increased about 15c1c at the concentration of ginsenoside mixture and/or the fat soluble fraction being $10^{-7}$,$10^{-5}$%. It was also observed that glucose uptake by rat liver was increased in the presence of either ginsenoside mixture or the fat soluble fraction by perfusion technique. Ginsenoside mixture stimulated various enzymes related to glucose metabolism, however, both ginsenoside mixture and the fat soluble fraction did not stimulate GK activity as expected. Primary culture of liver cells showed that the ginsenoside mixture and the fat soluble fraction increased GK activity significantly and they stimulated the GK activity synergistically in the co-presence of insulin.
According to the results of my study on the chromatographic analysis of fresh ginseng (Panax ginseng C. A. Meyer) roots, most of the contents of protopanxadiol ginsenosides $Rb_1$, Rc, $Rb_2$, and Rd are derived from the corresponding malonyl ginsenosides in fresh ginseng by a heat process. Also, I confirmed that acetyl ginsenosides are naturally occurring constituents in fresh ginseng, not decarboxylates from malonyl ginsenosides. Seven neutral ginsenosides $Rg_1$, Re, Rf, Rc, $Rb_1$, $Rb_2$, and Rd were transformed to specific conversions in red ginseng preparation conditions. The conversion paths progress by three rules concluded from my study. These conversion rules are I: the ether bond is stable at positions 3 and 6 in the dammarane skeleton, II: the ether bond between sugars is stable in glycosides, and III: the ether bond to glycosides is unstable at position 20 in the dammarane skeleton.
Doxorubicin (DOX) is a highly effective chemotherapeutic agent; however, the dose-dependent cardiotoxicity associated with DOX significantly limits its clinical application. In the present study, we investigated whether Rb1 could prevent DOX-induced apoptosis in H9C2 cells via aryl hydrocarbon receptor (AhR). H9C2 cells were treated with various concentrations ($-{\mu}M$) of Rb1. AhR, CYP1A protein and mRNA expression were quantified with Western blot and real-time PCR analyses. We also evaluated the expression levels of caspase-3 to assess the anti-apoptotic effects of Rb1. Our results showed that Rb1 attenuated DOX-induced cardiomyocytes injury and apoptosis and reduced caspase-3 and caspase-8, but not caspase-9 activity in DOX-treated H9C2 cells. Meanwhile, pre-treatment with Rb1 decreased the expression of caspase-3 and PARP in the protein levels, with no effects on cytochrome c, Bax, and Bcl-2 in DOX-stimulated cells. Rb1 markedly decreased the CYP1A1 and CYP1A2 expression induced by DOX. Furthermore, transfection with AhR siRNA or pre-treatment with AhR antagonist CH-223191 significantly inhibited the ability of Rb1 to decrease the induction of CYP1A, as well as caspase-3 protein levels following stimulation with DOX. In conclusion, these findings indicate that AhR plays an important role in the protection of Ginsenoside Rb1 against DOX-triggered apoptosis of H9C2 cells.
고려인삼(Panax ginseng C.A. Meyer)을 70% EtOH 수용액으로 저온 추출한 뒤, 감압 농축한 추출물을SiO2, ODS column chromatograph 및 중압분취(MPLC) 장비를 반복 실시하여 4종의 인삼 사포닌 화합물을 분리 및 정제하였다. NMR 및 고분해능 질량분석 장비를 이용하여 malonyl ginsenoside Rd (1), Rc (2), Rb2 (3), 및 Rb1 (4)로 구조 동정하였다. 분리한 4종의 화합물에 대하여 UPLC-MS/MS 질량분석기를 이용하여 수삼의 5년 및 6년근 뿌리의 동체를 정량분석 하였으며, malonyl ginsenoside의 총 함량의 합은 각각 6.62 및 2.34 mg/g으로 5년근이 약 2.8배 높은 것을 확인하였다. 인삼으로부터 분리된 화합물 중 malonyl ginsenoside Rd의 경우, 알코올에 의해 저해된 HepG2세포에 대해서 간세포를 보호하는 효과가 있음을 확인하였다.
Hwang, Ji Yeon;Shim, Ji Seon;Song, Min-Young;Yim, Sung-Vin;Lee, Seung Eun;Park, Kang-Sik
Journal of Ginseng Research
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제40권3호
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pp.278-284
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2016
Background: The ginsenoside Rb1 (Rb1) is the most abundant compound in the root of Panax ginseng. Recent studies have shown that Rb1 has a neuroprotective effect. However, the mechanisms underlying this effect are still unknown. Methods: We used stable isotope labeling with amino acids in cell culture, combined with quantitative mass spectrometry, to explore a potential protective mechanism of Rb1 in ${\beta}$-amyloid-treated neuronal cells. Results: A total of 1,231 proteins were commonly identified from three replicate experiments. Among these, 40 proteins were significantly changed in response to Rb1 pretreatment in ${\beta}$-amyloid-treated neuronal cells. Analysis of the functional enrichments and protein interactions of altered proteins revealed that actin cytoskeleton proteins might be linked to the regulatory mechanisms of Rb1. The CAP1, CAPZB, TOMM40, and DSTN proteins showed potential as molecular target proteins for the functional contribution of Rb1 in Alzheimer's disease (AD). Conclusion: Our proteomic data may provide new insights into the protective mechanisms of Rb1 in AD.
Background: Ginsenoside Rb1 (Rb1), a dominant component from the extract of Panax ginseng root, exhibits neuroprotective functions in many neurological diseases. This study was intended to investigate whether Rb1 can attenuate cisplatin-induced memory impairments and explore the potential mechanisms. Methods: Cisplatin was injected intraperitoneally with a dose of 5 mg/kg/wk, and Rb1 was administered in drinking water at the dose of 2 mg/kg/d to rats for 5 consecutive wk. The novel objects recognition task and Morris water maze were used to detect the memory of rats. Nissl staining was used to examine the neuron numbers in the hippocampus. The activities of superoxide dismutase, glutathione peroxidase, cholineacetyltransferase, acetylcholinesterase, and the levels of malondialdehyde, reactive oxygen species, acetylcholine, tumor necrosis factor-${\alpha}$, interleukin-$1{\beta}$, and interleukin-10 were measured by ELISA to assay the oxidative stress, cholinergic function, and neuroinflammation in the hippocampus. Results: Rb1 administration effectively ameliorates the memory impairments caused by cisplatin in both novel objects recognition task and Morris water maze task. Rb1 also attenuates the neuronal loss induced by cisplatin in the different regions (CA1, CA3, and dentate gyrus) of the hippocampus. Meanwhile, Rb1 is able to rescue the cholinergic neuron function, inhibit the oxidative stress and neuroinflammation in cisplatin-induced rat brain. Conclusion: Rb1 rescues the cisplatin-induced memory impairment via restoring the neuronal loss by reducing oxidative stress and neuroinflammation and recovering the cholinergic neuron functions.
Background: Brain-derived neurotrophic factor (BDNF)-tropomyosin-related kinase B (TrkB) plays a critical role in the pathogenesis of depression by modulating synaptic structural remodeling and functional transmission. Previously, we have demonstrated that the ginsenoside Rb1 (Rb1) presents a novel antidepressant-like effect via BDNF-TrkB signaling in the hippocampus of chronic unpredictable mild stress (CUMS)-exposed mice. However, the underlying mechanism through which Rb1 counteracts stress-induced aberrant hippocampal synaptic plasticity via BDNF-TrkB signaling remains elusive. Methods: We focused on hippocampal microRNAs (miRNAs) that could directly bind to BDNF and are regulated by Rb1 to explore the possible synaptic plasticity-dependent mechanism of Rb1, which affords protection against CUMS-induced depression-like effects. Results: Herein, we observed that brain-specific miRNA-134 (miR-134) could directly bind to BDNF 30 UTR and was markedly downregulated by Rb1 in the hippocampus of CUMS-exposed mice. Furthermore, the hippocampus-targeted miR-134 overexpression substantially blocked the antidepressant-like effects of Rb1 during behavioral tests, attenuating the effects on neuronal nuclei-immunoreactive neurons, the density of dendritic spines, synaptic ultrastructure, long-term potentiation, and expression of synapse-associated proteins and BDNF-TrkB signaling proteins in the hippocampus of CUMS-exposed mice. Conclusion: These data provide strong evidence that Rb1 rescued CUMS-induced depression-like effects by modulating hippocampal synaptic plasticity via the miR-134-mediated BDNF signaling pathway.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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