피브로인은 누에고치가 생산되는 불용성 단백질이다. 고온의 염화칼슘용액에서 가용화시킨 후 탈염하여 물에 녹게 만들 수 있다. 그러나 수용액은 불안정하여 피브로인 분자는 랜덤코일에서 $\beta$병풍구조의 비율이 증가하는 구조로 전이되고 겔을 형성한다. 그러나 피브로인 겔은 약하고 탄성이 없어 소재로 응용하는데 어려움이 있다. 본 연구에서는 글리세롤과 에탄올을 사용하여 반고형의 피브로인 겔을 제조하고 이들의 유동 특성을 조사하였다. 80%의 글리세롤로 만들어진 피브로인 겔은 의가소성 및 thixotropic 특성을 나타내었으며 항복응력의 제곱근 값이 피브로인의 농도와 선형적으로 비례하였으며 항복응력이 없어지는 피브로인의 농도는 0.2%로 확인되었다. 40% 에탄올에서 만들어진 피브로인 겔은 매우 심한 thixotropic 특성을 보였으며 전단속도가 어떤 값 이상이 되면 급격한 전단연화 현상을 나타내었다. 이 피브로인 겔은 전단이력 후 의가소성을 회복하는 특성을 나타내었다.
중성염에 용해한 후 얻어진 견피브로인 수용액의 pH를 3.0으로 조정하였을 때 피브로인 분자쇄들간에 정전기적 반발력이 감소하여 피브로인 분자쇄 상호간에 결합력이 증가하므로 겔화시간이 단축되었고 적외선분광분석 결과 ${\beta}$-sheet 구조로의 전이가 빨리 일어나고 있음을 확인하였다. 2. Silk fibroin 용액내에 glycerol 함량비가 클수록 겔화의 시간은 크게 단축되었으나 상대적인 수분함량의 증가로 강도는 낮아졌다. 3. Silk fibroin 용액내에 피브로인의 농도가 높을수록 겔의 강도는 낮아졌다. 4. 효소분해된 Silk fibroin 용액을 pH3.0으로 조정 후 실온에서 보관하였을 때 분자량저하에 따른 분자쇄간 결합력 약화로 겔상을 이루지 못하고 흰색의 분말상 침전을 형성하였으나 pH 3.0 조정 후 원심분리하면 겔상을 얻을 수가 있었다. 5. 시차주사열분석결과, 견피브로인 수용액을 등전점 조절하였을 때에는 재결정화에 의한 발열피크가 나타나지 않았고 결정성이 좀더 높았으며 효소처리한 경우에는 분자량감소로 낮은 온도 부근에서 일부 열분해가 일어났으나 저분자화된 분자쇄들이 새로운 결합을 형성하여 열적안정성이 다소 높게 나타났다.
Using gel filtration chromatography (GFC), pure separation of high molecular silk fibroin was obtained and silk fibroin microsphere particles (SFMP) could be simply made by spray dryer method. Also, some of its physicochemical properties and morphology were investigated. The average molecular weight (Mw) of pure silk fibroin protein dissolved in calcium chloride is about 61, 500 g/mol as measured by gel permeation chromatography(GPC). (omitted)
Sh. R. Madyarov;Yeo, Joo-Hong;Lee, Kwang-Gill;Lee, Yong-Woo
International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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제2권1호
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pp.7-13
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2001
Enzymatic hydrolysis of different forms of silk fibroin (soluble, gel and insoluble forms) by industrial and commercial enzyme preparations to obtain aqueous and powdered silk fibroin in relatively mild conditions was investigated. A mono-enzymatic hydrolysate systems were tested for hydrolysis of water-soluble form of fibroin as most productive form of protein substrate. Insoluble forms of substrate usually were hydrolyzed less effective. In some cases from soluble fibroin substrate gel was formed during hydrolysis process. This hindered intermixing and decreased rates of hydrolysis. Insoluble sediments were formed in enzymatic hydrolysates in other cases. These sediments and also sediment after chemical hydrolysis were purified and tested on amino acids content for comparison. Sediments formation in these conditions are considered as pure tyrosine isolation method. Obtained hydrolysates were characterized by gel-chromatography analysis and other standard biochemical methods. Possibility of application of enzymatic hydrolysis for preparation of silk fibroin hydrolysates is discussed.
Park, Seung-Won;Kweon, Hae-Yong;Goo, Tae-Won;Kim, Seong-Ryul;Jo, You-Young;Choi, Gwang-Ho
International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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제25권1호
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pp.75-79
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2012
Low-melting-temperature agarose gel solution, as a novel porogen was combined with a silk fibroin solution to generate interconnected porous networks. The porosity of the resultant silk fibroin-agarose scaffolds was greater than that of the scaffolds generated with agarose and deionized water. The porosities of silk fibroin scaffolds containing agarose gel at 0.5%, 1.0%, 1.5%, 2.0% [w/v] were 110.9%, 111.7%, 120.9%, and 123.0%, respectively. Lastly, the internal space generated in scaffolds after dissolution of the agarose gel provides a good environment for cell growth and movement within the scaffold.
The pure-separation of calcium chloride-treated fibroin hydrolysates could be carried out using gel filtration chromatography. Also, the effect of its enzymatic hydrolysis was investigated in order to find out the enhancement of their functionality. The average molecular weight(Mw), solubility and free amino acid compositions of three hydrolysates samples (calcium chloride, calcium chloride-flavourzyme and calcium chloride-thermoase)were measured to compare their characteristics. The molecular weight of calcium chloride hydrolysate was about Mw 46,800 and it can be reduced to Mw 12,500 and 1,070 upon the enzymatic hydrolysis by flavourzyme and thermoase, repectively. A solubility of calcium chloride-treated samples shows about 60% while calcium chloride/enzyme-treated samples are perfectly soluble (100% solubility). The total amino acid composition of calcium chloride enzymatic hydrolysates are much higher than that of calcium chloride hydrolysate.
본 연구는 누에 실 샘으로부터 얻은 Bambyx mori 피브로인의 효소 가수분해 시 그 분자량 및 구조적 특성을 파악하고자 하였다. Gel filtration chromatography(GFC)에 의해 B. mori 피브로인을 순수 분리한 결과 회수율이 약 70% 이상으로 기존의 방법(막과 튜브 분리법)에 비해 약 40% 이상 높았다. 이는 GFC법이 고 순수 고 수율의 B. mori 피브로인을 얻을 수 있는 방법임이 확인되었다. Gel permeation chromatography에 의한 분자량 측정 결과 누에 체내 피브로인, 염화칼슘 용해 물 및 효소 가수분해물이 각각 평균분자량 108,000 Da 내외, 65,000 Da 내외 및 1,000 Da 내외임을 알 수 있었다 또한 효소 가수분해에 의한 구조적 변화를 $^{13}C-NMR$로 알아본 결과, B. mori 피브로인의 메인 골격에 해당되는 glycine, alanine 및 serine 등의 골격 피크가 관찰되어졌으며, 특히 효소가수분해 시 glycine를 의미하는 40-44 ppm 부근의 피크가 높게 나타난 것으로 보아 -G-A-G-A-반복 구조가 분해되었고, 이로 인해 분자량이 현저히 저하되었을 것으로 생각되어진다.
International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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제6권2호
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pp.151-155
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2003
Using gel filtration chromatography, high molecular silk fibroin with high purity was obtained and silk flbroin microsphere particles (SFMP) could be simply made by spray dryer method. Also, some of the physicochemical properties of SFMP and morphology were investigated. The average molecular weight of pure silk fibroin protein dissolved in calcium chloride is about 61,500g/㏖ as measured by gel permeation chromatography. SFMP was spherical in shape, and particles, sized average of 2 ${\pm}$ 10 ${\mu}$, were observed by SEM and particle analyzer, respectively. Obtaining microspheres particles by spray dryer method accelerated the transition from the random coil to the $\beta$-sheet structure during spray dryer treatment. It was identified by the basic fourier transform infrared spectroscopy of SFMP. The swelling ratio of SFMP is majorly dependent on the pH of the solution, not on the occurred gelation. The characteristic structure, which might be applicable to immobilization of drugs is superior to other matrix materials for the use of biomaterials with skin affinity.
In order to investigate the properties of aqueous fibroin solution, the molecular weight distribution of silk fibroin was determined by gel filtration chromatography. The molecular weights spreaded from 200 kDa to less than 20 kDa. The distribution of molecular weight was significantly affected when the pH of solubilization solution is less than 1. Distributions of fibroin solution stored at various condition were also investigated.
The purification, dissolution and powdering of stained waste silk obtained from weaving and dyeing process were studied for the surface modification of textile fabric and plastic materials. The whiteness of stained waste silk could be improved through degumming and bleaching with sodium hydrosulfite. The water-soluble fibroin solution can be obtained by dissoving the degummed waste silk in a boiling solution of 50% calcium chloride for 60 minutes. The salts and heavy metals contained in fibroin solution were removed by electric dialysis, wool fiber filtration and gel filtration chromatography. The fibroin powder was prepared by using a fine grinder after the alkali treatment for weakening the silk fiber. The fine fibroin powder of particle size around 30 ㎛ was obtained with a ultra fine-mill, while it was finer below 10 ㎛ with a ball-mill. The dissolved or powdered silk was applied to the surface of fabric with addition of the binder (a urethane resin). The moisture content of polyester and nylon fabrics treated with the silk solution was improved due to hygroscopic property of silk. The fine fibroin powder mixed with the binder ws coated on the surface of synthetic film by use of the air pressed sprayer. It was revealed that the hygroscopicity as well as the softness of fibroin powder coated film was much improved. Therefore, it is thought that the fine silk fibroin powder is applicable as an coating agent for the surface modification of plastic and synthetic leather.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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