• 미생물학회지
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• 제30권6호
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• pp.501-506
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• 1992

An alkalophilic Vibrio sp. RH530 showing high proteolytic activity was isolated form soil samples by enrichment culture. The activity staining using gelatin SDS- polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE ) revealed that the strain produced an alkaline major protease (Apr B) with a size of 27 kDa, and at least six minor proteases. The apparent sizes of four of the minor proteases were approximately 45, 28, 22 and 19 kDa. Apr B and five of the minor proteases were inhibited by serine protease inhibitors including PMSF and DFP, suggesting that they are serine proteases. One of the minor proteases was inhibited by metalloprotease inhibitors, not by serine protease inhibitors, indicating it to be a metalloprotease. Furthermore, the activities of Apr B and Prt 3 were not inhibited by SDS in the reaction mixture. The production of Apr B and some of the minor proteases was specifically affected by culture temperature (30 to 37.deg.C) and pH (7 to 10). The production of Apr B. Prt 2, Prt 5 and Prt 6 was mainly affected by culture temperature, while Prt 4 by culture pH. Prt 1 and Prt 3 were not affected by neither of these factors.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제29권3호
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• pp.134-141
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• 2001

경기도 일대의 가금류 공장부근 토양로부터 단백질 분해활성이 높은 균주를 분리한 후 이것들 가운데 Keratinolytic protease 생산성이 우수한 균주는 KP-364를 선별하여 효소생산을 위한 최적 배양조건을 검토하였다. 선별된 KP-364 는 형태학적 생화학적 특성을 종합한 결과 Pseudomonas sp 로 동정되었으며 편의상 Pseudomonas sp. KP-364로 명명하였다. 효소생산을 위한 최적 배지조성은 Keratin 0.1% glucose 2.0% soybeam meal 0.5% NaNO3 0.5% KCI 0.2%이었고 초기 pH 6.5 배양온도 $37^{\circ}C$, 48시간진탕 배양할때 효소생산이 가장 우수하였으며 이때의 효소의 역가는 1,270 U/ml/hr이었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제34권2호
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• pp.150-157
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• 2006

스웨덴 스톡홀름의 항구부근 토양시료로부터 분리한 Bacillus sp. SMMJ-2는 단백질 분해활성이 높은 균주로써 특히 keratinolytic protease 생산성이 우수한 균주이다. 효소생산을 위한 최적 배지조성은 0.7% $K_2HPO_4$, 0.2% $KH_2PO_4$, 1.0% fructose, 1.2% soybean meal(roasted), 그리고 0.01% $Na_2CO_3$ 이었으며 배양초기 pH는 7.0, 배양온도는 30$^{\circ}C$에서 200 rpm조건일 때 효소생산이 가장 우수하였으며 이때의 활성은 105 units/ml/min로 조사되었다.

• 미생물학회지
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• 제26권4호
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• pp.355-361
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• 1988

성장속도가 빠르고포지형성이 우수한 방사균 일주를 토양에서 분리한 뒤 분리균의 특성을 조사한 결과 세포외 단백질 분해 효소가 중성과 알카리성의 두 종류가 생성되었으며 $\beta$-lactamase도 생성함을 알았다. 이 균주를 acriflarin 또는 NTG로서 처리하여 얻은 변이주는 포자의 형성, $\beta$-lactamase의 생성 및 protease의 생합성 능력이 소실 또는 크게 저하되었다. 일단계의 변이주 취득에서 동시에 형질의 변화가 다양하게 나타난 원인을 규명한 결과 호알카리성 protease의 생합성이 크게 저하되었음을 알았다. 따라서 방선균에서 포자형성과 호알카리성 protease의 활성이 일정한 연관성이 있을 것으로 판단되었다.

• 미생물학회지
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• 제28권3호
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• pp.264-267
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• 1990

The objectives of the current studies were to establish the optimal conditions for the production of extracellular protease inhibitor in a strain of Streptomyces fradiae. As results, it was found that cell specific growth rate was very critical for the production of protease inhibitor and the optimum specific growth rate was found to be 0.05 h$^{-1}$ . Dissolved oxygen tension and pH were also important to regulate the inhibitor production. The inhibitory mode of the purified inhibitor to .alpha.-chymotrypsin was found to be competitive (K$_{i}$=5.5*10$^{-7}$ M). One mole of inhibitor could bind two moles of .alpha.-chymotrypsin and the complex has very low dissociation constant.t.

• 한국식품영양과학회지
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• 제31권5호
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• pp.754-759
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• 2002

공업적으로 광범위하게 이용되고 있는 protease 중 중성 영역에서 최적의 활성을 갖는 중성 protease에 대한 연구의 일환으로, 토양으로부터 protease의 생성능이 우수한 10여 균주를 순수 분리하였으며, 이들 중에서 protease의 활성 이 가장 우수한 PANH765를 최종 선별하였다. 이 균주의 형태학적, 배양학적, 생리학적 및 생화학적 특성을 조사하여 Bergey의 세균 분류서의 색인에 따라 체계적으로 분류한 결과, Bacilius subtilis 또는 그 유연균으로 동정되어 분리균을 Bacilius .Subtilis PA-NH765로 동정하였다. B. subtilis PANH-765 균주에 의한 protease의 최적 배지 조성은 2.0% glucose, 1.0% yeast extract, 0.2% ammonium nitrate, 0.02% ferrous sulfate 및 0.02% di-potassium hydrogen phosphate이었으며, 최적 생산 조건은 배양온도 ,3$0^{\circ}C$, pH 7.0, 진탕 속도 150 rpm이었다. 이 조건에서 초기 균체량을5%(w/v)접종하여 배양하였을 때 시간에 따른 효소의 최대 활성은 배양 ,36시간일 때 6.34 U이었다.

• 미생물학회지
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• 제48권1호
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• pp.48-51
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• 2012

세포외 단백질분해효소를 생산하는 신종세균 Chryseobacterium sp. JK1은 토양으로부터 분리되었다. JK1 균주는 $30-35^{\circ}C$에서 skim milk를 첨가한 고체배지상에서 가장 큰 투명환을 보여주었다. 액체배지에서 JK1 균주의 세포생육은 24시간에 최대이었고, 세포외 단백질분해효소의 최대활성은 정지기인 22시간에 560 unit/ml에 도달하였다. Nutrient 배지에 maltose 혹은 glucose, mannitol을 첨가하면 생육이 향상되었지만, 단백질 분해효소 생산은 64-77%로 저조하였다. Skim milk 혹은 beef extract, yeast extract, malt extract, tryptone의 첨가는 향상된 생육과 줄어든 효소생산을 보인 반면, $(NH_4)_2HPO_4$ 또는 $(NH_4)_2SO_4$의 첨가는 저조한 생육과 121-146%의 향상된 효소생산을 보여 주었다.

• Journal of Microbiology
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• 제42권2호
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• pp.156-159
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• 2004

In general, the salinity of the ocean is close to 3.5％ and marine vibrios possess the respiratory chain-linked Na$\^$+/ pump. The influence of sodium chloride and the proton conductor carbonylcyanide m-chlo-rophenylhydrazone (CCCP) on the production of extracellular proteases in a marine Vibrio strain was examined. At the concentration of 0.5 M, sodium chloride minimally inhibited the activity of extra-cellular proteases by approximately 16％, whereas at the same concentration, the producton of extra-cellular proteases was severely inhibited. On the other hand, the production of extracellular proteases was completely inhibited by the addition of 2 ${\mu}$M CCCP at pH 8.5, where the respiratory chain-linked Na$\^$+/ pump functions.

• International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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• 제22권2호
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• pp.83-93
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• 2011

Biochemical and enzymatic characterization for extracellular protease isolated from Cordyceps militaris cultivated on rice bran medium was investigated. C militaris produced proteolytic enzymes from 10 days after inoculation, maximum enzyme production was found at 25 days. The optimum temperature and pH of proteases production was at $25^{\circ}C$ and pH 7.0, respectively. The protease activity was observed in the four peaks (Pro-I, Pro-II, Pro-III, and Pro-IV) separated through Sephadex G-100 column chromatography. The separated protease was optimally active at $25^{\circ}C$. Optimum pH of the protease was between 7 and 8. Enzyme was also stable over at $30-80^{\circ}C$. The enzyme was highly stable in a pH range of 4-9. Protease activity was found to be slightly decreased by the addition of $Mg^{2+}$, $Mn^{2+}$, $Zn^{2+}$, $Fe^{2+}$ and $Cu^{2+}$, whereas inhibited by the addition of $Ca^{2+}$ and $Co^{2+}$ Protease activity was inhibited by protease inhibitor PMSF. On the other hand, the partially purified protease was investigated on proteolytic protease activity by zymogram gel electrophoresis using three substances (casein, gelatin and fibrin). Four active bands (F-I, FII, F-III, and F-IV) of fibrin degradation were revealed on fibrin zymogram gels. Both of F-II and FIII showed caseinolytic, fibrinolytic and gelatinolytic activities in three gels. Thermostability, pH stability, and pH-thermostability of the enzyme determined the residual fibrinolytic activity also displayed on fibrin zymogram gel. The only one enzyme (F-II) displayed over a broad range of temperature at $30-90^{\circ}C$. The FII displayed fibrinolytic activity in the pH range 3-5, but was inactivated in the range of pH 6-11. The F-I and F-III showed enzyme activity in the pH range of 6-11. In the pH-thermostability, the F-II only kept fibrinolytic activity after heating at $100^{\circ}C$ for 10, 20 and 30 min at pH 3 and pH 7, respectively. On the other hand, the F-II was retained activity until heating for 10 min under pH 11 condition. By using fibrin zymogram gel electrophoresis, extracellular fibrinolytic enzyme F-II from C. militaris showed unusual thermostable under acid and neutral conditions.

• 미생물학회지
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• 제51권1호
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• pp.75-80
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• 2015

동해에서 분리된 Pseudoalteromonas donghaensis HJ51는 체외분비 단백질 분해효소를 생산하는 신종 미생물로 보고되었다. 체외 단백질 분해효소의 특성과 최적 생산 조건을 결정하기 위해 crude supernatant을 사용하여 단백질 분해효소의 최적 활성 온도와 pH를 조사한 결과 $40^{\circ}C$와 pH 7.5-10.5이었으며, pH 11에서도 88%의 높은 상대적인 효소 활성을 나타내었다. 효소의 금속 요구성을 조사한 결과, $Fe^{3+}$를 10 mM로 첨가하였을 때 최대 효소활성 증가를 보였다. 최대의 효소생산 조건을 탐색한 결과, 기본배지인 PY-ASW (peptone 0.5%, yeast extract 1.0%, artificial seawater)에 탄소원을 첨가하지 않는 것이 가장 높았으며, 질소원으로는 peptone 보다 beef extract, tryptone, casmino acids을 각각 첨가했을 때 활성이 21, 7, 4% 증가하였다. 이러한 결과를 종합해 볼 때 P. donghaensis HJ51이 생산하는 효소는 알칼리성 pH 환경 및 저온환경에서 활성이 필요한 분야에 응용이 가능할 것으로 사료된다.