• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제28권4호
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• pp.527-533
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• 2018

This study compared the radioprotective effects of high-molecular-weight poly-gamma-glutamate (${\gamma}-PGA$, average molecular mass 3,000 kDa) and a reduced form of glutathione (GSH, a known radioprotector) on calf thymus DNA damage. The radiation-induced DNA damage was measured on the basis of the decreased fluorescence intensity after binding the DNA with ethidium bromide. All the experiments used $^{60}Co$ gamma radiation at 1,252 Gy, representing 50% DNA damage. When increasing the concentration of ${\gamma}-PGA$ from 0.33 to $1.65{\mu}M$, the DNA protection from radiation-induced damage also increased, with a maximum of 87% protection. Meanwhile, the maximal DNA protection when increasing the concentration of GSH was only 70%. Therefore, ${\gamma}-PGA$ exhibited significant radioprotective effects against gamma irradiation.

• 약학회지
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• 제30권6호
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• pp.317-322
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• 1986

To clarify resistance mechanisms of lincosamide antibiotics, it was examined whether lincosamide antibiotics was able to induce high resistance to macrolide and lincosamide antibiotics against EMR-1 strain of Bacillus species. And it was also examined whether the inducible resistance was plasmid-mediated or chromosome-mediated. This strain was identified as Bacillus licheniformis by its morphological and physiological characteristics. The subinhibitory concentrations of lincomycin and clindamycin induced high resistance in the strain to lincosamide antibiotics, but not to macrolide antibiotics. The inducible resistance was not eliminated by treating the strain with ethidium bromide, and plasmid was not identified by the alkaline lysis method of plasmid preparation. These results indicate, therefore, that the inducible resistance to macrolide and lincosamide antibiotics in the strain may be chromosome-mediated, not plasmid-mediated.

• 대한수의학회지
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• 제34권4호
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• pp.781-785
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• 1994

Uridine diphosphate(UDP)-galactose-4-epimerase-less mutants of Salmonella pullorum were isolated after mutagenic treatment with ethidium bromide. When isolated gal E mutants of S. pullorum A2 and D1 were grown in the presence of galactose(0.1 W/V), they exhibited marked bacteriolysis in heart infusion broth. The mutant strains were further investigated the characteristics of enzymatic activities in the Leoloir galactose pathway. Isolated A2 and D1 strains were completely deficient in UDP-galactose-4-epimerase activity. And the activity of other enzymes involved in galactose metabolism were reduced significantly.

• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• 제22권2호
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• pp.109-122
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• 1995

A technique is described for producing high resolution G- and R-banded chromosomes in human peripheral lymphocyte cultures. Cultured lymphocyte cells were exposed to ethidium bromide ($10{\mu}g/ml$) and colcemid ($0.02{\mu}g/ml$) each for 2.5h and 0.5h prior to harvest for high resolution G-banded chromosomes. High resolution R-band patterns were obtained by BrdU substitution which was revealed by the fluorochrome-photolysis-Giemsa staining technique. These methods are easy to perform and highly reliable. The data on relative length of chromosomes at the four mitotic stages are presented in units of percentage of haploid autosome length. The characteristic patterns of GTG-bands (G-bands after trypsin and Giemsa) and RBG bands (R-bands after BrdU and Giemsa) were analyzed.

• Journal of Animal Science and Technology
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• 제45권6호
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• pp.911-916
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• 2003

돼지 Duroc 품종의 mitochondria DNA D-loop전체 유전자를 증폭하기 위하여 많은 동물에서 고도로 상동성이 높은 tRNA-Pro와 tRNA-Phe 염기서열 일부를 이용하여 oligonucleotide primer를 제작하였다. 그 결과 Duroc 품종의 D-loop 전체 유전자는 1,145 base pairs 였으며, 그 중간위치에 10bp의 Sus Scrofa-specific sequence (TACACGTGCG)가 10개 존재하고 있었다. 돌연변이 검출을 위하여 가장 변이가 심한 지역을 primer 제작하여 345 bp의 DNA 단편을 증폭하였으며, Single Stranded Conformation Polymorphism(SSCP) 분석은 8% polyacrylamide gel에서 200 V, 16시간 전기영동하여 ethidium bromide (EtBr)로 10분간 염색하여 UV image analyzer로 관찰하였다. 그 결과 두 개의 서로 다른 밴드유형을 관찰하였으며, 21개 부위에서 염기서열 변이가 관찰되었다. 이러한 결과는 유전적 다양성 변이를 검출하는데 SSCP 분석이 유용한 도구라고 사료된다.

• 한국식품영양과학회지
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• 제42권1호
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• pp.8-16
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• 2013

본 연구는 체내 세포배양을 통한 적양배추 추출물의 항유방암 효과를 검정하기 위해 세포활성, 세포사멸, ROS 축적 및 세포사멸 관련 유전자 발현을 분석하였다. 적양배추 추출물을 0.5, 0.75, 1.0, 1.25, 1.5, 1.75 및 2.0 mg/mL의 농도로 24시간 처리하여 세포 생존율(MTT assay)을 분석한 결과 농도 의존적으로 감소되었다(p<0.05). 또한 세포사멸/괴사분석(Hoechst33342/ethidium bromide 염색법), flow cytometry assay, ROS 측정(DCF-DA 염색법) 등의 세포 화학적 방법을 통해 분석한 결과 처리 농도가 증가할수록 세포사멸이 유의적으로 증가하였고, ROS 생성 또한 증가하였다. 특히 2.0 mg/mL의 농도에서는 다른 농도에 비해 유의적으로 높은 사멸율을 나타내었으며, ROS 또한 다량으로 생성되는 것을 관찰할 수 있었다(p<0.05). RT-PCR을 통해 세포사멸관련 유전자인 Bcl-2, Bax, caspase-3의 mRNA 발현 정도를 관찰한 결과 농도 의존적으로 Bcl-2는 유의적으로 감소하였고, Bax와 caspase-3는 유의적으로 증가하였으며, Bcl-2/Bax의 비율은 유의적으로 감소하였다(p<0.05). 이상의 결과로 보아 적양배추 추출물이 인체 유방암세포 MDAMB-231의 세포사멸을 증가시키는 효과가 있음을 알 수 있었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제17권2호
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• pp.142-147
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• 1989

나비목 유충에 독성이 강한 균으로 알려진 Bacillus thuringiensis serovar. kurstaki HD73 을 ethidium bromide(0.02$\mu\textrm{g}$/$m\ell$)처리와 자연적 curing에 의한 내독소 유전자의 위치를 확인하여 변이주간 내독소 생성능을 간이 선별할 수 있는 배지를 선발한 다음 국내 토양에서 분리한 KBS722 균주에 적응하여 그 내독소 단백질 유전자의 위치를 확인한 결과를 요약하면 다음과 같다. HD73-NRRL과 Dul-mage박사로 분양 받은 균주는 약 7.4, 7.1, 8.1, 11. 3, 75kb 및 크기가 75kb와 비슷하고 copy수가 적은 또 하나의 plasmid로 전부 6개의 plasmid를 보유하고 있었으며 IPL 균주는 약 4.0과 70kb plasmid를 더 보유하는 것으로 나타났다. 상기 HD 73 균주들의 내독소 단백질 크기는 모두 133KD 정도였고 HD73의 내독소 유전자는 변이주간 내독소의 현미경 검경과, immunoblotting plasmid DNA 의 전기영동결과 75kb상에 있는 것으로 나타났다. 이들 변이주들을 potato dextrose agar, starch agar, spizizen casamino acid glucose 와 nutrient agar 평판배지에 접종하여 균형태를 관찰하였을 때 내독소 비형성균(Cry-)은 starch agar 배지에서만 반투명하고 균 군락의 색깔이 엷은 회색을 띄었다. 한편 국내 분리균 KBS722를 novobiocin(3$\mu\textrm{g}$/$m\ell$)으로 plasmid를 curing시켜 상기 4가지 배지에 도달했을때 nutrient agar배지에서만 Cry 변이주가 반투명하고 엷은 회색을 나타내었다. KBS722의 내독소유전자는 약 225kb의 plasmid상에 있는 것으로 나타났으며 in vitro에서 쉽게 Cry$^+$주와 Cry$^-$주의 판별이 가능하였다.

• 대한바이러스학회지
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• 제27권1호
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• pp.19-27
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• 1997

본 연구에서는 영장류에서 감염성 면역결핍 증상을 일으키는 type D simian retrovirus (SRV)를 검출하기 위해 SRV env 유전자의 특정 지역을 선정하여 증폭, 검색하는 중합효소 연쇄반응 (PCR)법을 개발하였다. 증폭반응의 대상부위인 SRV env 유전자의 3' 후반부는 서로 다른 3 종류의 SRV subtype 1, 2, 그리고 subtype 3에 걸쳐 높은 보존율을 보이고 있다. 반응 결과, 1차 PCR 만으로 3 종류의 SRV subtypes를 동시에 검출, 증폭하였으며 SRV와 더불어 영장류에서 감염성 면역결핍을 유도하는 주요 바이러스 simian immunodeficiency virus 또는 simian T-Iymphotropic virus type 1에 감염된 영장류의 peripheral blood mononuclear cells (PBMCs)을 비교, 완전한 증폭 특이성이 확인되었고 교차반응으로 인한 위양성반응은 발견되지 않았다. 한편, 위 증폭반응의 검출 민감도 측정을 위해 준정량적 적정 PCR을 수행하였으며 SRV 게놈과 증폭 대상 부위의 분자량을 기준으로 한 본 PCR법의 검출 한계는 단 한번의 증폭과 간단한 ethidium bromide 염색만으로 적어도 $5-7{\times}10^4$ 개의 PBMCs 중 한 개의 감염세포를 검출할 수 있는 것으로 확인되었다. 본 연구에서 확인된 신속성과 반응 특이성, 그리고 높은 민감도의 본 PCR 법은 현재 유일한 AIDS 연구모델인 영장류의 SIV 감염 연구 전후에 반드시 필요한 효과적인 SRV 감염검색에서 ELISA법의 위양성에 의한 약점을 보완하고 보다 높은 검출 민감도를 확보함으로써 연구모델 실험의 오류를 최소화하는 데 중요한 역할을 하게 될 것이다.

• 생명과학회지
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• 제15권4호
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• pp.626-632
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• 2005

폴리아민은 모든 진핵세포에서 발견되는 다가 양이온성의 저분자 물질이며 세포성장에 필수적인 것으로 알려져 있다. 본 논문에서는 폴리아민의 역할 중에서 산화적인 스트레스에 대한 세포보호 효과를 연구하였다. 쥐의 간세포주인 $Ac_2F$에 산화 스트레스를 유발하기 위하여 2,2'-azobis(2-amidinopropane)dehydrochloride (AAPH)를 처리하였을 때, 세포증식은 농도 의존적으로 감소하였다. 배지에 폴리아민을 첨가하였을 때 세포성장은 농도 의존적으로 증가하였으며 ROS 발생은 현저히 감소하였다. 폴리아민 가운데 특히 spermidine과 spermine이 뚜렷한 세포증식효과를 보였다. Spermine의 경우, $20{\mu}M$농도에서 AAPH에 의해 유도된 ROS발생을 $45\%$나 감소시켰다. 산화 스트레스에 관여하는 효소들 가운데 주된 효소인 superoxide dismutate (SOD)와 catalase (CAT)의 세포 내 단백질을 Western blotting으로 조사한 결과, AAPH는 이 두 가지 단백질의 생성을 억제한 것으로 나타났다. 그러나 spermine을 처리하였을 때 두 단백질의 생산은 모두 정상적으로 회복이 되었다. 또한 세포주기의 중요한 조절 단백질인 cyclin E 역시 AAPH에 의하여 생성이 억제되었다. 이는 AAPH에 의하여 생성된 ROS가 세포주기의 S phase의 진행을 억제한 것으로 생각된다. AAPH에 의한 cyclin E의 억제는 spermine에 의하여 정상적으로 회복되었다. 위와 같은 Spermine의 항산화 효과는 ethidium bromide와 acridine orange를 이용하여 형태학적으로도 증명되었다.

• Asian Pacific Journal of Cancer Prevention
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• 제17권9호
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• pp.4267-4273
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• 2016

Previous studies suggested that dithio-carbamates are potent apoptosis and anti-apoptosis inducing agents in various cancer cells. Here, the anti-proliferative and apoptosis inducing effects of a new derivative (2-NDC) from the dithio-carbamate family was examined in human leukemia K562 cells. We use thiazolyl blue tetrazolium bromide (MTT) to measure viability and cell growth inhibition. The 2-NDC showed effects on viability in a dose and time-dependent manner, inhibiting proliferation at concentrations of $10-30{\mu}M$ after 24-48 hours of treatment and increasing values after 72 hours at $40-120{\mu}M$. The cytotoxic effect of the compound was calculated with an $IC_{50}$ of $30{\mu}M$ after 24-hour. Apoptosis induction was confirmed by acridine orange-ethidium bromide (AO/EtBr) staining, DNA fragmentation assay, flow cytometric assessment and also caspase-3 activation assay. Furthermore, enzymes level such as superoxide dismutase (SOD) and catalase (CAT) involved in oxidative stress were evaluated. The results of this study demonstrated insignificant increase of intracellular ROS levels for 24 hours and reduction after 48-72 hours. In addition to reduction of intracellular thiol, caspase-3 like activity was also decreased in a time-dependent manner in cells treated with 2-NDC. Thus 2-NDC can be considered as a good candidate for further pharmaceutical evaluations.