효소에 의한 가수분해로 식품단백질로부터 생리활성 peptide의 생성을 밝히기 위한 연구의 일환으로 효소에 의한 단백질 가수분해물의 ACE 저해작용을 검토한 결과는 다음과 같다. 1. 가수분해에 따른 ACE 저해능은 가수분해 8시간까지는 급격히 증가하다가 그 후로는 완만하게 증가하였으며, 특히 복합효소, bromelain 및 pepsin등에 의해 우수하게 나타났다. 그러나 trypsin 및 $\alpha$-chymotrypsin에 의한 egg albumin 및 casein 가수분해시에는 가수분해 8시간 이후에는 오히려 감소하는 경향을 나타내었다. 2. 단백질 가수분해물의 ACE 저해능은 첨가량의 증가와 함께 우수한 것으로 나타났으며, 가열에 대하여 비교적 안정한 것으로 나타났다. 3. 단백질 가수분해물의 아미노산 조성은 거의 유사한 것으로 나타났으며, 특히 glutamic acid의 함량이 월등히 많은 것으로 나타났다. 그러나 egg albumin 가수분해물의 경우는 glutamic acid의 함량이 적은 반면 alanine 및 cysteine의 함량이 다소 많은 것으로 나타났다 4. Gel 여과에 의한 단백질 가수분해물의 획분별 ACE 저해작용은 서로 비슷한 획 분에서 나타났으며 이 때의 분자량은 1,400부근으로 나타났다. 5. Gel 여과에 의한 ACE 저해작용 획분의 아미노산 조성은 서로 다른 것으로 나타났다.
본 논문에서는 카제인 가수분해물의 in vivo 상에서 혈압강하 효과를 알아보고, 혈압강하 기능을 갖는 기능성 펩타이드로서의 활용 가능성을 검토하기 위하여 안전성 검사를 실시하였다. 카제인 가수분해물의 소화관 단백질 분해효소 (펩신, 트립신, 카이모트립신) 내성 시험 결과 카제인 가수분해물은 소화관 효소 처리에 의하여 ACE 저해효과에 차이가 없었으며, 자연발증고혈압쥐를 이용한 혈압강하 실험에서 500 mg/kg을 경구 투여한 결과 12.9% (-28.88 mmHg, P<0.05) 저하하였고, 이들 가수분해물을 30% 난황으로 유화할 경우 15.9% (-30.76 mmHg, P<0.01)의 혈압이 감소하여 난황으로 유화에 의해 다소 혈압강화 효과가 증가하였다. 장기 투여에 의한 혈압강하 효과에서 35일 부터 수축기혈압 감소효과가 나타났으며 12.46% (P<0.05) 감소하였다. 가수분해물의 장기투여에 의한 자연발증고혈압쥐의 체중변화는 대조구와 비교하여 차이가 없었다. 혈압강하 효과를 가지는 카제인 가수분해물의 안전성을 조사한 결과 간장장애 지표로서 사용되는 GOT, GPT 활성에 차이가 없었다. 간장 비대 등의 장기 비대 현상도 없었고 조직병리학적 검사에서도 차이가 없었다. ACE 저해활성을 가지는 카제인 가수분해물은 혈압강하제와 비교하였을 때 비교적 낮은 활성을 나타내지만 항상 섭취하는 식품 중에 존재한다는 점에서 그 유용성이 기대되며, 고혈압 예방을 위한 기능성 식품이나 의약품으로서 개발하기 위해서 앞으로 ACE 저해 펩타이드에 대한 체계적인 안전성 검사가 이루어져야 할 것으로 생각된다.
Kim, Joo-Hee;Park, Ju-Yeon;Hong, So-Young;Kim, Mi-Kyung
Nutrition Research and Practice
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제3권3호
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pp.200-207
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2009
This study examined the effects of com gluten (CG) and its hydrolysate consumptions on weight reduction in rats fed a high-fat diet. Eight-month-old male Sprague-Dawley rats (n=40) were fed a high-fat diet (40% calorie as fat) for 4 weeks. They were then randomly divided into four groups and fed the isocaloric diets with different protein sources for 8 weeks. The protein sources were casein (control group), intact CG (CG group), CG hydrolysate A (CGHA group, 30% of protein as peptides and 70% as free amino acids) and CG hydrolysate P (CGHP group, 93% of protein as peptides and 7% as free amino acids). Body weight gain, adipose tissue weights, nitrogen balance, absorptions of energy, protein and fat, lipid profiles in plasma, liver and feces and hepatic activities of camitine palmitoyl transferase (CPT), fatty acid synthase (FAS), malic enzyme (ME) and glucose-6-phosphate dehydrogenase (G6PDH) were assessed. The CGHA diet had the highest amount of BCAAs, especially leucine, and most of them existed as free amino acid forms. The CGHA group showed significant weight reduction and negative nitrogen balance. Protein absorption and apparent protein digestibility in the CGHA group were significantly lower than those in other groups. Adipose tissue weights were the lowest in the CGHA group. Activity of CPT tended to be higher in the CGHA group than in other groups and those of FAS, ME and G6PDH were significantly lower in the CGHA group than in other groups. In conclusion, the CGHA diet which had relatively high amounts of free amino acids and BCAAs, especially leucine, had a weight reduction effect by lowering adipose tissue weight and the activities of FAS, ME and G6PDH in experimental animals, but it seemed to be a negative result induced by lowering protein absorption, increasing urinary nitrogen excretion and protein catabolism.
Pronase 등 8개의 단백분해효소를 사용하여 말쥐치를 가수분해시 생성되는 펩타이드의 양을 측정한 결과, bromelain과 neutrase에 의한 가수분해물의 펩타이드 생성량은 4시간 가수분해시 6.13 mg/ml와 6.01 mg/ml로 높은 생성량을 보였으며, 유리아미노산의 생성량은 4시간 가수분해시 alcalase에 의한 가수분해물이 4.20 mg/ml로 높은 유리 아미노산의 생성량을 보였다. 가수분해도를 측정한 결과, 4시간 가수분해시 esp/sav와 alcalase의 가수분해물은 88.9%와 86.2%의 비교적 높은 가수분해도를 보였다. 또한 핵산관련 물질은 5'-GMP가 다른 핵산 관련물질에 비해 높은 생성량을 보였다. 가수분해물의 펩타이드의 평균길이는 $8.5{\sim}14.5$로 bromelain에 의한 가수분해물이 가장 짧은 펩타이드 길이를 가진 반면, neutrase에 의한 가수분해물은 14.5로 가장 긴 펩타이드로 구성되었다.
Volatile components of whole sardine sauce which was prepared with $7\%$ of complex enzyme-2000($2.18{\cdot}10^4\;U/g solid$), mixed with $6\%$ of invert sugar and heated at $90^{\circ}C$ for 2 hours were compared with those of without invert sugar. Thirty seven kinds were identified from the whole volatile components of hydrolysate heated without invert sugar and fourty three kinds were identified from the hydrolysate heated with $6\%$ of invert sugar. Amines were not detected from the whole volatile components of the chopped whole sardine hydrolysate. Considerable amount of 2,3-dihydrobenzofuran and 2-acetylpyrrole, a little amount of 2,5-hydrofuran, 2-ethylbutanol, 2-pyrone, 2-acetylfuran, 2,6-dimethylpyrazine, 2-acetylpyrazine, 5-methyl-2-furfural, furfuryl acetate, butylpyrrole and 2-methyl-3-hydroxypyrone were detected in the hydrolysate thermally treated with $6\%$ of invert sugar while these were not found in the hydrolysate heated without invert sugar. But the amount of 2-methyt-1-propa-not, hexane, butyl acetate and butyl alcohol were decreased, and acetic acid and butanoic acid were detected as volatile fatty acids.
The antioxidant capacity of porcine splenic hydrolysate (PSH) was studied in vitro and in vivo. Peptide hydrolysates were prepared, using the proteolytic enzyme $Alcalase^{(R)}$. The molecular weights of PSH were 37,666, 10,673, 6,029, and 2,918 g/mol. Rats were fed a 5% (w/v) PSH diet, instead of a casein diet, for 4 wk. The food intake, body weight gain, and liver weight of rats in the PSH group were similar to those in the control (CONT) group. There were no differences in the serum total cholesterol, triglyceride, total protein, or albumin levels between PSH and CONT groups. However, the level of in vivo hepatic lipid peroxidation in PSH group was significantly lower than that in CONT. In vivo hepatic catalase and glutathione peroxidase activities in the PSH group were significantly higher than those in the control group. The in vitro protein digestibility of PSH was lower than that of casein. The in vitro trolox equivalent antioxidant capacity of PSH was significantly higher than that of the peptide hydrolysate from casein. The in vitro radical scavenging activities of PSH were significantly higher than those of the peptide hydrolysate from casein. The present findings suggest that porcine splenic peptides improve the antioxidant status in rats by enhancing hepatic catalase and GSH-Px activities, and indicate a potential mechanism of radical scavenging activity during gastrointestinal passage.
명태육의 식품가공적성과 이용성을 높이기 위해 pronase에 의한 명태단백의 가수분해조건과 fruit-와 stem-bromelain에 의한 plastein의 합성 반응조건을 검토하였다. Pronase 가수분해 최적조건인 반응pH 7.0, 반응온도 $40^{\circ}C$, 기질 g당 효소첨가량 1,000units 및 반응시간 4시간에서 89% 분해도를 보이는 명태단백의 가수분해물을 제조하였다. Plastein은 pH가 각각 5.0(stem-bromelain)과 7.0(fruit-bromelain)으로 조정된 기질 30% 용액에 bromelain 1%를 가하여 $40^{\circ}C$, 24시간 진탕반응하여 합성하였다. 이 최적조건에서 합성된 plastein은 각각 22.6과 20.8 아미노산 잔기를 가진 펩타이드로 구성되어 있었으며 관능검사에 의해 반응초보다 크게 쓴맛이 제거되는 결과를 나타내었다.
문어육의 Aroase AP10 가수분해물을 제조하고 이들 가수분해물을 한외여과막을 통과시켜 회수한 분자량 10,000 Da이하의 저분자물질을 Bio-gel P-2 gel chromatography를 행하여 ACE 저해효과를 가지는 3개 획분을 분취하였다. 또한 이들 획분을 SuperQ-Toyopearl 650S column을 이용한 이온교환크로마토그래피에 의해 4개의 활성획분을 분리하였다. 이중 ACE 저해효과가 가장 높은 C-1 획분의 아미노산 조성은 arginine, lysine, histidine 및 leucine의 함량이 가장 많아 전체의 약 60%를 차지하였으며 $IC_{50}$은 $3.10{\mu}g$으로 나타났다.
본 실험은 한우 육단백질의 가수분해물로부터 항고혈압 활성을 측정하기 위하여 실시한 것으로서 한우 등심과 우둔으로부터 추출한 myosin B를 pepsin으로 가수분해하여 가수분해물들의 전기영동 결과, 가열처리와 가수분해 시간의 증가에 따라 단백질의 소실이 증가하였다. 항 고혈압 활성을 측정한 결과 10 ug/ml의 희석된 가수분해물의 ACE 억제효과는 1시간 이상 가수분해 시키면 약 40%의 억제율을 가졌다. 가수분해물 원액으로 ACE 억제효과를 살펴본 결과에서는 등심이 우둔보다 높았으며 (p<0.05), 비가열 가수분해물이 가열한 가수분해물 보다 억제율이 높게 나타났다 (p<0.05). 또한, 가수분해 시간별 처리구에서는 1시간 이상 가수분해 시키면 약 70% 이상의 억제율을 갖는 것으로 나타나 한우의 myosin B를 1시간 이상 가수분해하면 ACE 억제율이 증진되는 것으로 사료된다.
최근 고혈압을 예방하기 위한ACE 저해 펩타이드에 대한 연구는 주로 여러 가지 식품 단백질의 효소 가수분해물로부터 얻어진 펩타이드를 중심으로 이루어지고 있다. 본 연구에서는 케이신을 여러 가지 상업용 단백질분해 효소를 사용하여 ACE저해 효과가 높은 가수분해물 제조시 가수분해 조건이 ACE저해효과에 미치는 영향을 알아보자 하였으며 적정 가수분해 조건을 설정하고자 하였다. ACE 저해효과를 가지는 케이신 가수분해 물을 제조하기 위한 효소 종류, 첨가량 및 가수분해시간은 효소는 Aspergillus oryzae 유래의 promod 192를 사용하고, 효소의 첨가량은 케이신에 대하여 1%, 반응시간은 47$^{\circ}C$에서 12시간으로 하는 것이 적당하였다. 이 때 케이신 가수분해물의 $IC_{50}$/값은 248.71ug/m1(통상법), 265.84ug/ml(전처리법)로서 ACE 저해효과가 높았다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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