Specific growth rate was controlled for the repression of acetic acid formation in the fed-batch fermentation of recombinant Escherichia coli. With controlled specific growth rate, we studied the effect of the specific growth rate on cell growth, glucose consumption, acetic acid formation, and the expression of recombinant protein (${\beta}$-lactamase). High specific growth rate caused the accumulation of glucose and acetic acid, and lowered the production of recombinant protein. However, the addition of methionine recovered the gene expression by alleviating the negative effect of acetic acid at high specific growth rate.
An Exponetial feeding strategy has been frequently used in fed-batch fermentation of recombinant E. coli. In this feeding scheme, growth yield and initial cell concentration, which can be erroneously determined, are needed to calculate the feed rate for controlling specific growth rate at the set point. The effect of the incorrect growth yield and initial cell concentration on the control of the specific growth rate was theoretically analyzed. Insignificance of the correctness of those parameters for the control of the specific growth rate was shown theoretically and experimentally.
An, Jeong-O;Jang, Hyeong-Uk;Lee, Hong-Won;An, Ik-Seong;Ham, Seung-Ju;Jeong, Jun-Gi
한국생물공학회:학술대회논문집
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2001.11a
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pp.367-369
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2001
Recombinant lipase gene (pYEGA ${\alpha}$ -lip) originated from Bacillus stearothermophillus Ll was overexpressed in Saccharomyces cerevisiae. The lipase gene expression level was compared by controlling a constant specifjc growth rates( ${\mu}$ = 0.03, 0.05, 0.07 and $0.1h^{-1}$. Cell g개wth was successfully controlled at the desired rates by feeding rate of glucose and the formation of by-product or accumulation of the glucose was not observed. Above the growth rate of $0.1h^{-1}$. the desired growth rate could not be achieved caused accumulation of by-products(ethanol). The lipase production increased as the specific growth rate decreased. The specific production rate at the lowest specific growth rater(${\mu}$ =0.03) was above 2- folds than the others.
Journal of the Korean Crystal Growth and Crystal Technology
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v.25
no.1
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pp.6-12
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2015
Under rate-controlled sintering, furnace power is controlled to maintain a specific specimen contraction rate. This thermal processing method guarantees continuous process with a minimum thermal energy applied over time and makes it possible to control the density of the sintered body precisely. In this study, the rate-controlled sintering is applied to the sintering of $B_4C$ in order to investigate how rate-controlled sintering variables can affect the sintering behavior and/or grain growth behavior of $B_4C$ and how the results can be interpreted using sintering theories to draw an optimal sintering condition of the rate-controlled sintering. Further, the applicability of the rate-controlled sintering into the study for sintering of unknown materials is also considered.
The effect of acetic acid formation deficiency on recombinant E. coli fermentation was investigated using a mutant strain deficient in acetic acid formation. A mutant strain which does not grow under anaerobic conditions was isolated. The acetic acid production in this strain was negligible in aerobic batch fermentation. The cloned-gene expression in the mutant strain was higher than the wild-type strain. Fed-batch fermentations with controlled specific growth rates were carried out in order to compare the cloned-gene expression between the wild-type and the mutant strains. The expression decreased along with the specific growth rate in both strains. The cloned-gene expression in the mutant strain was 60% higher than in the wild-type strain at the same specific growth rate.
Controlling the light energy and major nutrients is important for high cell density culture of cyanobacterial cells. The growth phase of Anabaena variabilis can be divided into an exponential growth phase and a deceleration phase. In this study, the cell growth in the deceleration phase showed a linear growth pattern. Both the period of the exponential growth phase and the average cell growth rate in the deceleration phase increased by controlling the light intensity. To control the light intensity, the specific irradiation rate was maintained above $10\;{\mu}mol/s/g$ dry cell by increasing the incident light intensity stepwise. The final cell density increased by controlling the nutrient supply. For the control of the nutrient supply, nitrate, phosphate, and sulfate were intermittently added based on the growth yield, along with the combined control of light intensity and nutrient concentration. Under these control conditions, both final cell concentration and cell productivity increased, to 8.2 g/l and 1.9 g/l/day, respectively.
The growth kinetics of phototrophic microorganisms can be controlled by the light irradiance, the concentration of an inorganic nutrient, or both. A multi-component kinetic model is proposed and tested in novel batch experiments that allow the kinetic parameters for each factor to be estimated independently. For the cyanobacterium Synechocystis sp. PCC6803, the estimated parameters are maximum specific growth rate $({\mu}_{max})=2.8/d$, half-maximum-rate light irradiance $(K_L)=11W/m^2$, half-inhibition-rate light irradiance $(K_{L,I})=39W/m^2$, and half-maximum-rate concentration for inorganic carbon $(K_{S,Ci})=0.5mgC/L$, half-maximum-rate concentration for inorganic nitrogen $(K_{S,Ni})=1.4mgN/L$, and half-maximum-rate concentration for inorganic phosphorus $(K_{S,Pi})=0.06mgP/L$. Compared to other phototrophs having ${\mu}max$ estimates, PCC6803 is a fast-growing r-strategist relying on reaction rate. Its half-maximum-rate and half-inhibition rate values identify the ranges of light irradiance and nutrient concentrations that PCC6803 needs to achieve a high specific growth rate to be a sustainable bioenergy source. To gain the advantages of its high maximum specific growth rate, PCC6803 needs to have moderate light illumination ($7-62W/m^2$ for ${\mu}_{syn}{\geq}1/d$) and relatively high nutrient concentrations: $N_i{\geq}2.3 mgN/L$, $P_i{\geq}0.1mgP/L$, and $C_i{\geq}1.0mgC/L$.
Formation of inclusion bodies is usually observed when foreign proteins are overexpressed in E. coli. The formation of inclusion bodies might be prevented by lowering the rate of protein synthesis, and appropriate regulation of the protein expression rate may lead to the soluble expression. In this study, human growth hormone (rhGH) was expressed in a soluble form by slowing down the protein synthesis rate, which was controlled in the transcriptional and translational levels. The transcriptional level was controlled by the regulation of the amount of RNA polymerase specific to the promoter in front of the rhGH gene. For lowering the rate of translation, the T7 transcription terminator-deleted vector was used to synthesize the longer mRNA of the target gene because the longer mRNA is expected to reduce the availability of tree ribosomes. In both methods, the percentage of soluble expression increased when the expression rate slowed down, and more than 93% of rhGH expressed was a soluble form in the T7 transcription terminator-deleted expression system.
The aim of the present study was to investigate the effects of growth rate on the biosynthesis of tylosin in Streptomyces fradiae. In order to elucidate the relation between the growth rate and the tylosin formation rate, the activities of enzymes involved in oxaloacetate metabolism were determined using cells grown at different growth rates in chemostats. As the results, it was found that the specific rate of tylosin formation($q_{p}$) was closely related to the specific cell growth rate and the maximum value of $q_{p}$ was 1.1mg tylosin, $q_{p}$ cell, $0.013h^{-1}$ at the growth rate $0.013h^{-1}$. However further increase in the growth rate over $0.013h^{-1}$ resulted in apparent decrease of $1_{p}$. The synthesis and activities of citrate synthase, aspartate aminotransferase, and PEP carboxylase were very low at lower growth rate. On the other hand, the activity and synthesis of methylmalonyl-CoA carboxyltransferase was closely related to tylosin formation. Therefore it was concluded that tylosin formation was apparently controlled by the growth rate.
For optimal production of L-tryptophan using a regulatory mutant of Escherichia coli the relationship between product formation and acid production was investigated. Experimental results showed that the production level of L-tryptophan was lowered as the specific acid production rate increased. In order to reduce the amount of acid produced during the fermentation, a controlled fed-batch fermentation was employed. In this fed-batch process, the feed rate of the nutrient feed medium was controlled in relation to the oxygen level in the culture and thus the growth of the cells was regulated in such n way that the oxygen demand of the culture could not exceed the oxygen sup-ply. When E. coli cells were cultivated in a controlled fed-batch mode of tormentor operation, the specific acid production rate was significantly reduced and L-tryptophan production was increased as much as five times that obtained in a conventional fed-batch fermentation.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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