Factors affecting the production of bacterial cellulose and organic acids in Kombucha fermentation were investigated. Kombucha was obtained by the fermentation (for 12 days at 3$0^{\circ}C$) of the green/black tea extract, supplemented with 10% white sugar, using an Oriental tea fungus as starter. Hitgher initial pH increased acid production with decreased cellulose production. With a cellulose pellicle or tea fungus broth as a starter, a 1~3 mm thick cellulose layer developed as a top layer every four days, and was removed subsequently while continuing fermentation. Addition of 30 mL tea fungus broth (13%, v/v) in Kombucha fermentation resulted in maximum production of a cellulose pellicle, indicating weak acid production. Yield of cellulose production at an early stage of fermentation was also higher when Kombucha was inoculated with a cellulose pellicle. In fact, addition of 1% (v/v) alcoholic beverage in the Kombucha fermentation activated the cellulose production, coupled with four times higher acid production.
The bacterial celluloses are very different in its physical, chemical and morphological structures compared to wood cellulose. These fibers have many unique properties that are potentially and commercially beneficial. This study was aimed to elucidate the production of bacterial celluloses and to improve their physical properties by chemical pretreatment. Bacterial celluloses produced by static culture had gel-like pellicle structure. The pellicle thickness was increased with the increasing time, and its layer was about 1.8cm after one-month incubation. The pellicles extruded from the cells of Acetobacter had a non-crystalline structure during initial growing stages, gradually getting crystaliyzed with the incubation time elapse, and eventually fumed to the cellulose I crystals. Young's modulus of bacterial cellulose sheet was increased with increasing NaOH concentration, and resulted in the highest at 5% NaOH concentration. Similar results with NaClO3 pretreatment can be observed. Too concentrated alkali solutions induced the destruction of cellulose fibrils and changed the mechanical properties of the sheets. These alkaline pretreatment have removed non-cellulosic components(NCC) from the bacterial cellulose, and enhanced inter-abrillar bonding by direct close contact among cellulosic fibrils.
자연계에 다양하게 존재하는 세균중 셀룰로오스 생산성이 우수한 균주를 분리 및 동정함으로서 새로운 생물자원을 확복하고자 하였다 사과, 포도, 식초 등의 시료로부터 총 57주의 셀룰로오스 생산균주를 분리하였다. 그중 사과에서 분리된 A9 균주를 공시균으로 선정하여 형태학적 배양적 및 생리생화학적 특성을 검토한 결과 Acetobacter 속으로 동정되어 편의상 Acetobacter sp. A9로 명명하였다 본 균주는 ethanol을 acetic acid로 산화시킨 후 다시 $CO_2$ 와 $H_2O$. 로 재산화시키는 특성을 가지고 있었다 또한 glycerol로부터 dihydroxyacetone을 생성할 수 있었으나 glucose 및 fructose로부터 ${\gamma}$-pyrone은 생성할 수 없었다. 본균주를 HS액체배지에서 정치배양했을 때 두꺼운 셀룰로오스 pellicle을 합성하였으며 교반배양에서 mass 형태의 셀룰로우스를 합성할 수 있었다.
Bacterial cellulose는 초산균인 Gluconacetobacter xylinus에 의해 생산되며, 배양 배지의 표면에 나노섬유상의 막을 형성한다. 본 연구에서는 배지의 조성에서 탄소원을 달리하여 생산한 bacterial cellulose의 결정화도, 점도, 모폴로지와 역학적 물성을 살펴보았다. Gluconacetobacter sp. V6 균은 세 종류의 배양 배지에서 정치 상태로 배양되었다. 배양 배지로는 표준 Hestrin-Schramm 배지와 탄소원으로 glycerol 또는 molasses를 첨가한 개질 배지가 각각 사용되었다. 세포 성장과 셀룰로오스 수율은 molasses 배지와 glycerol 배지에서 증가하였다. Glycerol 배지를 사용한 배양은 결정화도와 고유점도, 파단응력과 같은 셀룰로오스의 물성을 향상시켰으나, molasses 배지를 사용한 배양은 셀룰로오스의 결정화도, 미결정의 크기, 고유점도를 감소시켰다. 요약하면, molasses 배지에서 셀룰로오스의 수율은 현저히 향상되었으나, 낮은 구조적 물성을 가졌다.
발효시켜서 만드는 감식초에서 시료를 채취하여 배양하고, pellicle을 형성하는 single colony를 cellulose 생합성균으로 분리하였다. 분리된 균주는 형태적 특성, 알콜의 재산화 등의 생리, 생화학적 특성 등에 의하여 Acetobacter속으로 분류되었으며, Acetobacter CBI-2라고 명명하였다. Acetobacter CBI-2는 정치배양 시에 기존의 생합성 균주로 알려진 Acetobacter xylinum과 대등한 cellulose 생합성 능력을 나타내었다. Acetobacter CBI-2이 생성한 고분자물질의 분해산물을 TLC법으로 확인한 결과 기존 cellulose의 것과 일치하였다. Acetobacter CBI-2에서 genomic DNA를 분리 정제하여 cel A 영역을 probe로하여 hybridization 시킨 결과, 상동성을 나타내어 분리 균주에는 cellulose 생합성 관련 유전자가 존재함을 나타내었다.
Cellulose production by Acetobacter pasteurianus was investigated in static culture using four bioreactors with silicone rubber membrane submerged in the medium. The shape of the membrane was flat sheet, flat sack, tube and cylindrical balloon. Production rate of cellulose as well as its yield on consumed glucose by the bacteria grown on the flat type membranes was approximately ten-fold greater than those on the non-flat ones in spite of the same membrane thickness. The membrane reactor using flat sacks of silicone rubber membrane as support of bacterial pellicle can supply greater ratio of surface to volume than a conventional liquid surface culture and is promising for industrial production of bacterial cellulose in large scale.
One strain of cellulose-producing Acetobacter was isolated from the traditionally fermen- ted grape vinegar in Korea. The isolated strain, designated as KI strain was identified as the Acetobacter xylinum with respect to physiological and biochemical characteristics. KI produced acetic acid from ethanol, and then decomposed acetate to CO$_{2}$ and H$_{2}$O. When the isolated strain was cultivated statically in broth culture, a thick cellulose pellicle was formed. KI was tolerance of 8% ethanol and 30% glucose, and the isolate was positive in ketogenesis from glycerol, $\gamma$-pyrone from glucose and fructose, and 2-ketogluconic acid from glucose. KI strain possessed straight-chain C$_{18:1}$, C$_{16:0}$, and C$_{14:0}$ fatty acid, and contained ubiquinone Q$_{9}$ and Q$_{10}$ as isoprenoid quinone. DNA base composition of KI strain was 57.6% G+C.
산업적으로 유용한 미생물 유래 셀룰로오스를 생산 이용하기 위해 전국 각지 양조식초의 덧으로부터 세룰로오스의 생산성이 높고 조질의 균일성을 나타내는 균주를 분리하였다 분리균 GS11은 gram 음성이고 간균(0.6$\times$2.2~3.2 $\mu\textrm{m}$)의형태를 하고 있으며 편모를 가지고 있어 운동성을 보였다. 또한 세포내 지방산 조성은 다량의 불포화 지방산 {{{{ {C}_{18:1} }}}}과 포화지반산 {{{{ {C}_{16:0 } }}}}, {{{{ {C}_{14:0 } }}}} 이 대부분을 차지하였고 DNA 염기조성 (G+C) 함량은 58.4% 이였으며 ubiqunone 은 {{{{ { Q}_{10 } }}}}을 갖는 것으로 나타났다 이러한 형태학적 생리.생화학적 특성의 결과에 따라 본 균주는 Acetobacter xylinum GS11으로 동정되었다 A. xylinum, GS11 의배양기간 동안 셀룰로오스 생산성을 검토하고자 250mL 삼각플라스크에 균주를 접종하여 $30^{\circ}C$에서 12일간 정치배양하였다 그결과 기질인 glucose의 소비는 접종 후 급소하게 감소하여 셀룰로오스 생산에 이용되었으며 셀룰오스의 생산은 배양 9일 경에 2.8g/l로 최대의 생산량을 나타냈다.
한국 전통발효식초로부터 분리된 Acetobacter sp. V6에 의한 bacterial cellulose (BC) 생산을 위한 최적 배지조성을 정치배양을 이용하여 조사한 후, 생성된 BC의 구조적 특성을 검토하였다. 탄소원으로 glucose 3%, 질소원으로 soytone 3%가 선정되었다. 또한 인산염은 $K_2HPO_4$ 0.8%였으며, 추가로 첨가한 $NaH_2PO_4$와 $KH_2PO_4$는 BC 생산 증가를 나타내지 못하였다. 보조탄소원으로 ethanol 0.4%에서 가장 높은 BC 생산성을 나타내었다. 최적 배지조성하에서 배양 8일만에 최대 44.7 g/$m^2$의 BC가 생산되었으며, 배양 8일경, BC pellicle의 두께는 약 1 cm였다. BC의 구조는 Fourier-transform infrared spectroscopy 및 X-ray diffractometer를 이용하여 조사하였다. 최적배지에서 생성된 BC는 전형적인 cellulose type I임을 알 수 있었으며, 식물성 셀룰로오스와 성분의 차이가 없었다. 또한 독특한 미세망상구조로 이루어져 있었고, 높은 결정성을 나타내어 식물유래 셀룰로오스와 다른 독특한 물성을 나타내는 것으로 추정되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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