Han, Joon-Hee;Shim, Hongsik;Shin, Jong-Hwan;Kim, Kyoung Su
The Plant Pathology Journal
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제31권2호
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pp.165-175
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2015
Anthracnose is a fungal disease caused by Colletotrichum species that is detrimental to numerous plant species. Anthracnose control with fungicides has both human health and environmental safety implications. Despite increasing public concerns, fungicide use will continue in the absence of viable alternatives. There have been relatively less efforts to search antagonistic bacteria from mudflats harboring microbial diversity. A total of 420 bacterial strains were isolated from mudflats near the western sea of South Korea. Five bacterial strains, LB01, LB14, HM03, HM17, and LB15, were characterized as having antifungal properties in the presence of C. acutatum and C. gloeosporioides. The three Bacillus atrophaeus strains, LB14, HM03, and HM17, produced large quantities of chitinase and protease enzymes, whereas the B. amyloliquefaciens strain LB01 produced protease and cellulase enzymes. Two important antagonistic traits, siderophore production and solubilization of insoluble phosphate, were observed in the three B. atrophaeus strains. Analyses of disease suppression revealed that LB14 was most effective for suppressing the incidence of anthracnose symptoms on pepper fruits. LB14 produced antagonistic compounds and suppressed conidial germination of C. acutatum and C. gloeosporioides. The results from the present study will provide a basis for developing a reliable alternative to fungicides for anthracnose control.
We have screened 766 strains of fungi from the BIOTEC Culture Collection (BCC) for xylanases working in extreme pH and/or high temperature conditions, the so-called extreme xylanases. From a total number of 32 strains producing extreme xylanases, the strain BCC7928, identified by using the internal transcribed spacer (ITS) sequence of rRNA to be a Marasmius sp., was chosen for further characterization because of its high xylanolytic activity at temperature as high as $90^{\circ}C$. The crude enzyme possessed high thermostability and pH stability. Purification of this xylanase was carried out using an anion exchanger followed by hydrophobic interaction chromatography, yielding the enzyme with >90% homogeneity. The molecular mass of the enzyme was approximately 40 kDa. The purified enzyme retained broad working pH range of 4-8 and optimal temperature of $90^{\circ}C$. When using xylan from birchwood as substrate, it exhibits $K_m$ and $V_{max}$ values of $2.6{\pm}0.6\;mg/ml$ and $428{\pm}26\;U/mg$, respectively. The enzyme rapidly hydrolysed xylans from birchwood, beechwood, and exhibited lower activity on xylan from wheatbran, or celluloses from carboxymethylcellulose and Avicel. The purified enzyme was highly stable at temperature ranges from 50 to $70^{\circ}C$. It retained 84% of its maximal activity after incubation in standard buffer containing 1% xylan substrate at $70^{\circ}C$ for 3 h. This thermostable xylanase should therefore be useful for several industrial applications, such as agricultural, food and biofuel.
Responses of the rumen fungus, Neocallimastix frontalis RE1, to long chain fatty acid (LCFA) were evaluated by measuring gas production, filter paper (FP) cellulose digestion and polysaccharidase enzyme activities. LCFA (stearic acid, $C_{18:0}$; oleic acid, $C_{18:1}$; linoleic acid, $C_{18:2}$ and linolenic acid, $C_{18:3}$) were emulsitied by ultrasonication under anaerobic condition, and added to the medium. When N frontalis RE1 was grown in culture with stearic, oleic and linoleic acid, the cumulative gas production, gas pool size, FP cellulose digestion and enzymes activities significantly (p<0.05) increased at some incubation times(especially, exponential phases of fungal growth, 48~120 h of incubation) relative to that for control cultures. However, the addition of linolenic acid strongly inhibited all of the investigated parameters up to 120 h incubation, but not after 168 and 216 h of incubation. These results indicated that stearic, oleic and linoleic acids tended to have great stimulatory effects on fungal cellulolysis, whereas linolenic acid caused a significant (p<0.05) inhibitory effects on the cellulolysis by the rumen fungus. These results are the first report of the effect of LCFAs on the ruminal fungi. Further research is needed to identify the mode of action of LCFAs on fungal strains and to verify whether or not ruminal fungi have ability to hydrate unsaturated LCFAs to saturated FAs. There was high correlation between cumulative in vitro gas production and fungal growth (94.78%), FP cellulose degradation (96.34%), CMCase activity(90.86%) or xylanase activity (87.67%). Thus measuring of cumulative gas production could be a useful tool for evaluating fungal growth and/or enzyme production by ruminal fungi.
돈분뇨 분해 장치의 발효 속도를 가속화시키는 토착미생물의 확보를 위하여 우리나라 각 지역에서 수집한 균주 중 우수한 균주를 선별하고 168 rDNA 증폭에 의한 동정을 실시하여 돈분뇨 분해에 관여하는 균주의 특성을 확인하기 위해 본 연구에서는 총 23장소(서울, 충청, 강원, 전북, 전념, 경남 지역)에서 28종류의 부숙 퇴비를 수집하여 생균수를 조사한 결과 대체적으로 $1{\times}10^5{\sim}10^8$의 분포 밀도를 보였다. 분리한 균주의 효소 생산 역가결과는 $30^{\circ}C$에서 보다 $55^{\circ}C$에서 배양된 고온호기성박테리아가 상대적으로 높은 섬유소분해효소와 전분분해효소 생산력을 보였고, genomic DNA의 추출에 의한 168 primer로 증폭하여 염기서열을 결정한 결과 돈분뇨 발효에 관여하는 고온호기성박테리아는 15종으로 동정되었다. 그 중 미생물제재를 제조하기 위하여 효소 역가 면에서도 우수성을 보이고 내생 포자를 형성하는 균주는 Bacillus subtihs로 확인되었다.
A cellulolytic bacterial strain, S2-3, was isolated from sea water collected in Jeju island, Republic of Korea. The strain was aerobic and gram negative, and formed yellow colored colonies on marine agar medium. S2-3 cells were long rod-shaped, 0.5 × 0.25 ㎛ (width x length) in size, and did not have flagella. The optimal growth conditions for S2-3 were 30-35℃ and pH 6.5-7.0. Analysis of the 16S rRNA gene sequence of S2-3 revealed that it had the highest identity with those of Seonamhaeicola algicola Gy8 (97.08%), Hyunsoonleella udonensis JG48 (95.01%), and Aestuariibaculum scopimerae I-15 (94.86%). In phylogenetic analysis, S2-3 formed the same clade as S. algicola Gy8, implying that S2-3 belongs to the genus Seonamhaeicola. The major fatty acids (>10%) comprised C15:1 iso G (22.29%), C15:0 iso (17.71%), C17:0 iso 3OH (16.06%), and C15:0 iso 3OH (10.7%), resulting in quite different ratio of the component from those of S. algicola Gy8. Moreover, its biochemical characteristics, including acid production and enzyme activities, were different from those of S. algicola Gy8. Therefore, putting all these results together, we concluded S2-3 is distinct species from S. algicola Gy8, and thus named it Seonamhaeicola sp. S2-3. In liquid culture, S2-3 produced extracellular cellulases that can hydrolyze cellulose or cellooligosaccharides into cellobiose, which is a good enzyme resource that deserves further research.
각종(各種) 시료(試料)로부터 1,573주(株)의 균주(菌株)를 분리(分離)하고 그 중에서 endo-polygalacturonase (Endo-PG) 활성이 강한 Aspergillus niger B-15를 선발하였다. 이어서 선정균주(選定菌株)에 자외선을 연차적(連次的)으로 조사(照射)하여 변이주(變異株) U-46을 얻었으며 친주(親株)와 변이주(變異株)의 균학적성질(菌學的性質)을 조사(調査)하고 변이주(變異株)의 효소생산조건(酵素生産條件)과 반응조건(反應條件)을 검토(檢討)하여 아래와 같은 결과를 얻었다. 1. 변이주(變異株) U-46은 친주(親株)보다 분생자두(分生子頭)의 크기가 작아지고 분생자병(分生子柄)의 길이가 짧아졌다. 2. 밀기울배지에서의 배양(培養)에 있어서 Endo-PG생산(生産)을 위한 최적조건(最適條件)은 친주(親株) B-15의 경우 밀기울에 대한 첨수량(添水量) 40%, 배양온도(培養溫度) $30{\sim}35^{\circ}C$였으나 변이주(變異株) U-46의 경우는 밀기울에 대한 첨수량(添水量) 60~70%, 배양온도(培養溫度) $35^{\circ}C$였다. 배양일수는 어느 것이나 2~3일간이 적당하였다. 3. 친주(親株)와 변이주(變異株)를 각각의 최적조건(最適條件)에서 배양(培養)할 경우 친주(親株) B-15의 Endo-PG에 비하여 변이주 U-46의 효소활성은 약 20배 높았다. 4. 밀기울배지(밀기울에 대한 첨수량(添水量) 60%)에 $35^{\circ}C$, 3일간 배양할 경우 변이주 U-46 은 친주(親株)에 비하여 Endo-PG 활성이 약 47배(倍)로, Exo-PG 활성은 약 18배로 증가되었으며 cellulase, ${\alpha}$-amylase 및 glucoamylase 활성도 증가되었다. 5. 밀기울에 $(NH_4)_2SO_4$을 1.2~1.5% 첨가(添加)한 배지에서 변이주(變異株) U-46의 Endo-PG 활성(活性)은 약 20% 증가되었다. 6. 변이주(變異株) U-46의 조효소액(粗酵素液)의 Endo-PG 반응(反應) 최적조건은 pH 4.0~4.5, $50^{\circ}C$이었다.
가축분 및 음식물 퇴비 132점에서 517균주를 분리하고 CMC와 xylan 및 PGA 배지에서 강한 활성을 가지는 10여개의 균주를 선별하여 배추종자 발아를 이용한 작물 inhibition test와 오이 육묘실험으로 growth test를 거쳐 생육이 가장 양호한 LYH201 균주를 야생균주로 선발하였다. Bergey's manual 방법으로 특성을 조사한 결과 LYH201균주는 Gram 양성균으로 내생포자 형성, oxidase, CMCCase, xylanase, catalase, V-P test, methyl red test, arabinose 등의 탄소원 이용성은 양성이었으며, indole을 생성하고, urease, lecithinase, dihydrolase test는 음성이었고, 전자현미경으로 관찰한 결과 길이가 $2.5{\sim}3.0{\mu}m$, 너비가 $0.5{\sim}0.7{\mu}m$의 간균인 Bacillus subtilis로 확인되었다. Bacillus subtilis LYH201 균주를 MMY를 이용하여 배양한 결과 온도 $50^{\circ}C$, pH 6.0에서 생육이 가장 좋았다.
A serious leaf disease caused by Colletotrichum dematium was found during the cultivation of Sarcandra glabra in Jingxi, Rong'an, and Donglan Counties in Guangxi Province, which inflicted huge losses to plant productivity. Biological control gradually became an effective control method for plant pathogens. Many studies showed that the application of actinomycetes in biological control has been effective. Therefore, it may be of great significance to study the application of actinomycetes on controlling the diseases caused by S. glabra. Strains of antifungal actinomycetes capable of inhibiting C. dematium were identified, isolated and screened from healthy plants tissues and the rhizospheres in soils containing S. glabra. In this study, 15 actinomycetes strains were isolated and among these, strains JT-2F, DT-3F, and JJ-3F, appeared to show antagonistic effects against anthracnose of S. glabra. The strains JT-2F and DT-3F were isolated from soil, while JJ-3F was isolated from plant stems. The antagonism rate of strain JT-2F was 86.75%, which was the highest value among the three strains. Additionally, the JT-2F strain also had the strongest antagonistic activity when the antagonistic activities were tested against seven plant pathogens. Strain JT-2F is able to produce proteases and cellulase to degrade the protein and cellulose components of cell walls of C. dematium, respectively. This results in mycelia damage which leads to inhibition of the growth of C. dematium. Strain JT-2F was identified as Streptomyces tsukiyonensis based on morphological traits and 16S rDNA sequence analysis.
음식물 쓰레기 퇴비화 장치에 사용하기 위한 미생물제제 개발을 목적으로 토양, 퇴비 등으로부터 고온균을 분리하여 그 생육 특성을 조사하였다. 분리한 81주 중에서 음식물 쓰레기를 분해시키는 전분 분해효소, 단백 분해효소, 지방 분해효소 및 섬유소 분해효소의 활성이 높은 20주를 분리하여 형태 및 생리적 특성을 조사한 결과 모두 그람 양성의 간균으로 카탈라제를 가지고 있었으며 17주는 포자 형성균으로 밝혀졌다. 이 균주들은 대부분 pH 5에서 pH 10까지 생육할 수 있었으며 8% NaCl이 함유된 배지에서도 성장하였다. 또한 각 효소의 생산 균주 그룹별로 생육에 미치는 영향을 조사한 결과 통기에 의해 생육이 크게 증가하였으며, $50^{\circ}C$ 이상 온도가 올라갈수록 생육이 저하되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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