• Journal of Pharmaceutical Investigation
• /
• 제36권4호
• /
• pp.283-286
• /
• 2006

The present study aimed to investigate the interaction of nucleoside analogs with human organic anion transporter 1 and 3(hOAT1 and hOAT3) that play a primary role in the tubular uptake of endogenous and exogenous organic anions in the kidney. The interactions of ddC, ara-C, ara-A and ara-U with hOAT1 and hOAT3 were examined using MDCK cells stably overexpressing hOAT1 or hOAT3. Among the tested drugs, ddC showed the highest affinity to hOAT1 with $IC_{50}$ values of 5.2 mM, while ara-A, ara-C and ara-U weakly inhibited the cellular uptake of $[^3H]-PAH$ in MDCK-hOAT1 cells at 1 mM. In contrast, all the tested drugs did not have any inhibition effect on the cellular uptake of $[^3H]-estrone$ sulfate in MDCK-hOAT3 cells over the drug concentration of 0.01-2 mM, implying that they might not interact with hOAT3. Taken all together, the present study suggests that hOAT1 could weakly interact with nucleoside analogues such as ddC, ara-C, ara-A and ara-U but the interaction with hOAT3 during the urinary excretion of these nucleoside analogues may be negligible in the kidney.

• KSBB Journal
• /
• 제19권6호
• /
• pp.441-445
• /
• 2004

본 연구에서는 사람 ferritin H- 및 L-chain 유전자가 재조합된 효모 S. cerevisiae에 있어서 철의 생체 흡수 반응을 수행하였다. 재조합 효모는 $2\%$ galactose가 첨가된 YEP 배지에서 3일간 batch culture한 후, 20 mM MOPS buffer (pH 6.5) 에서 반응 균체 농도, 철 화합물 종류, 철 농도, 및 반응 시간 등을 고려하여 반응을 진행하였다. 이 실험 결과, ferritin H-chain 유전자를 발현하는 균주 YGH2에 있어서 균체 농도 100 mg/ml에서 균체 농도 200 mg/ml보다 높은 철 농도를 보였다. 그리고, 철 흡수 반응에 있어서 Fe(II)의 산화 상태가Fe(III)보다 훨씬 유리하였다. 철 농도의 증가에 따라 철 흡수량도 증가하였으며, 14.3 mM Fe(II)과 반응시 YGH2의 세포내 철 농도는 $16.7{\pm}0.7\;{\mu}mol/g$ cell wet wt.로 분석되었다. 철 흡수는 반응 시작 후 약 120분 경에 거의 최대치에 이르렀다.

• Nuclear Medicine and Molecular Imaging
• /
• 제41권5호
• /
• pp.364-372
• /
• 2007

목적 : 여러 종양영상용 방사성의약품이 암환자에서 치료후 반응을 보는 데 사용되고 있다. 이 연구에서는 paclitaxel 노출 시간에 따른 여러 종양영상용 방사성의약품의 유방암세포 섭취양상을 paclitaxel 노출 48시간까지 생존종양세포 수와 비교하여 알아보았다. 대상 및 방법 : F-18-fluorodeoxyglucose, C-11-methionine, Tl-201, Tc-99m-MIBI, Tc-99m-tetrofosmin의 5가지 종양영상용 방사성의약품의 MCF-7 유방암세포에서의 세포섭취를 알아보았다. DMSO 노출 대조군, 다양한 paclitaxel 노출시간을 가지는 5가지의 실험군(노출시간 2시간, 6시간, 12시간, 24시간, 48시간)의 총 6가지 조건에서 종양영상용 방사성의약품을 60분간 섭취시킨 뒤 섭취율을 구하였다. Paclitaxel은 10 nM과 100 nM의 2가지 농도를 사용하였다. 결과 : 10 nM의 paclitaxel은 노출 48시간까지 MCF-7 세포의 살아 있는 세포의 비율을 약 75% 정도로 감소시켰지만, 종양세포의 5가지 종양영상용 방사성의약품 섭취는 대조군과 비교시 유의하게 감소하지 않았다. 100 nM의 paclitaxel은 노출 48시간까지 MCF-7 세포의 살아 있는 세포의 비율을 약 55% 정도로 감소시켰지만, 종양세포의 5가지 종양영상용 방사성의약품 섭취는 대조군과 비교시 유의하게 증가하였다. 결론 : MCF-7 유방암세포주에서 종양영상용 방사성의약품인 F-18-FDG, C-11-methionine, Tl-201, Tc-99m-MIBI, Tc-99m-tetrofosmin의 섭취율은 paclitaxel 투여 후 48시간까지 생존 종양세포 수의 감소를 반영하지 못한다.

• Journal of Pharmaceutical Investigation
• /
• 제41권4호
• /
• pp.205-210
• /
• 2011

Genistein (GT), a major isoflavone found in soybeans, has a potent antioxidant effect that protects the skin from UV-induced damages and malignant melanoma. In order to enhance the cellular uptake of GT, liposome/Tat complexes were prepared by an electrostatic interaction of anionic liposome (DMPC/DCP, 9:1 in molar ratio) with Tat peptide (0.02 to 0.08 mole), one of the well-known cell penetrating peptide (CPP). As the amount of Tat increased, the size increased but the zeta potential decreased. In vitro release study with dialysis membrane elicited GT release from liposomal preparations in a controlled manner. The addition of Tat increased GT release, especially for the initial period. In the cellular uptake study by incubating B16 melanoma cells with various liposomal preparations containing GT, B16 melanoma cells demonstrated a time-dependent increase of drug accumulation. Compared to the aqueous GT suspension, intracellular uptake was substantially enhanced by anionic liposomal formulation and further increased by the complex formulation. Therefore, liposome/ Tat complex might be a good candidate for facilitating intracellular drug delivery.

• 대한의생명과학회지
• /
• 제10권3호
• /
• pp.187-194
• /
• 2004

A short peptide corresponding to the nuclear localization signal (NLS) of human immunodeficiency virus (HIV)-l Tat protein, Arg-Lys-Lys-Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Arg, was employed to improve the efficiency of cellular uptake of nucleic acids. The peptide was first mixed with a reporter plasmid and then with cationic liposomes to form a tripartite complex of DNA/peptide/liposomes (DPL). Transfection efficiency of the DPL complex was compared with that of the conventional DNA/liposomes (DL) complex. When the DPL complex was formed with various cationic liposomes, DOTAP/DOPE (DP) liposome exhibited superior transfection efficiency to other liposomes tested in vitro. With the inclusion of the peptide, the DPL complex showed much enhanced transfection in various cancer cell lines. Particularly, transfection of the DPL complex in serum increased cellular uptake of a transgene up to 2 fold when compared with that in a serum free condition. Further, when the DPL complex was infused through the ureteric route of a rat, transfection efficiency was shown to be better in reporter gene expression than that obtained with the DL complex. This study shows that the DPL complex that is easy to formulate can be employed for much enhanced cellular uptake of a trans gene.

• Asian Pacific Journal of Cancer Prevention
• /
• 제17권7호
• /
• pp.3061-3063
• /
• 2016

Exploiting the immune system to abolish cancer growth via vaccination is a promising strategy but that is limited by many clinical issues. For DNA vaccines, viral vectors as a delivery system mediate a strong immune response due to their protein structure, which could afflect the cellular uptake of the genetic vector or even induce cytotoxic immune responses against transfected cells. Recently, synthetic DNA delivery systems have been developed and recommended as much easier and simple approaches for DNA delivery compared with viral vectors. These are based on the attraction of the positively charged cationic transfection reagents to negatively charged DNA molecules, which augments the cellular DNA uptake. In fact, there are three major cellular barriers which hinder successful DNA delivery systems: low uptake across the plasma membrane; inadequate release of DNA molecules with limited stability; and lack of nuclear targeting. Recently, a polysaccharide polymer produced by microalgae has been synthesized in a form of polymeric fiber material poly-N-acetyl glucosamine (p-GlcNAc). Due its unique properties, the F2 gel matrix was suggested as an effective delivery system for immune and gene vaccinations.

• 생명과학회지
• /
• 제32권10호
• /
• pp.762-770
• /
• 2022

제 2형 당뇨병은 고혈당을 특징으로 하는 만성 대사성 질환으로 인슐린 민감성및 저항성을 개선하여 세포속으로 포도당 흡수를 촉진시킴으로서 완화될 수 있다. 본 연구는 triterpenoid 화합물인 betulinic acid가 3T3-L1 지방세포에서 인슐린 신호전달체계를 개선하여 포도당 흡수를 촉진시키는지를 조사하고 그 작용기전을 규명하였다. Betulinic acid는 3T3-L1 지방세포에서 농도의존적으로 포도당 흡수를 유의하게 증가시켰으며, 이는 PM-GLUT4의 발현 증가와 관련이 있음을 관찰하였다. Betulinic acid는 인슐린 신호전달 경로에서 PI3K의 활성화 및 IRS-1tyr, Akt의 인산화를 대조군에 비해 유의하게 증가시켰다. 또한 AMPK의 활성화를 나타내는 pAMPK와 AMPK 하위인자인 pACC의 수준을 유의하게 증가시켰다. Betulinic acid에 의한 PI3K 및 AMPK 경로의 활성화를 증명하기 위해, PI3K 억제제(Wortmannin)와 AMPK의 억제제(Compound C)를 사용하여 이들 처리에 의한 포도당 흡수능과 PM-GLUT4의 발현을 측정한 결과 이들의 발현이 유의하게 저해되었다. 본 연구에서 betulinic acid는 3T3-L1 지방세포에서 PI3K 및 AMPK 경로의 활성화를 통해 세포막으로 포도당 수송체인 GLUT4 전위를 촉진시키고 포도당 흡수를 증가시킬 수 있음을 나타내었다. 이러한 결과는 betulinic acid가 인슐린 민감성을 증진시키고 고혈당을 완화하는데 도움이 될 수 있음을 시사한다.

• Nutritional Sciences
• /
• 제4권1호
• /
• pp.26-33
• /
• 2001

Animal and clinical studies as well as epidemiological data have provided convincing evidence that n-3 polyunsaturated fatty acids can protect against atherosclerosis. However, the effects of the fatty acids on atherogenesis are contradictory. This discrepancy could derive from great susceptibility of the fatty acids to oxidation. We investigated the effect of eicosapentaenoic aced(EPA) on cellular atherogenesis via the scavenger receptor of THP-1 derived macrophages. THP-1 cells were fully differentiated into macrophages by incubating with phorbol 12-myristate 13-acetate for seven days. Atherogenic features of EPA were compared by subsitituting for linoleic acid (LA). Macrophages were also incubated without treatment of the fatty acids as controls. EPA (5-50 nmol/mL) was not cytotoxic and did not measurably induce cellular oxidation compared to bovine serum albumin (BSA) vehicle or identical doses of LA. EPA increased macrophage uptake and degradation of acetylated LDL(AcLDL) up to 14% and 88%, respectively. EPA increased markedly total cellular sterol synthesis and heparin-releasable lipoprotein lipase activity of macrophages, indicating that EPA may enhance accumulation of cellular cholesteryl ester and possibly facilitate formation of foam cells. These results demonstrate that EPA promotes the modified LDL-triggered atherosclerotic process by the modulation of the scavenger receptor and the activation of LPL in macrophages.

• BMB Reports
• /
• 제52권5호
• /
• pp.324-329
• /
• 2019

Recent progress in cellular reprogramming technology and lineage-specific cell differentiation has provided great opportunities for translational research. Because virus-based gene delivery is not a practical reprogramming protocol, protein-based reprogramming has been receiving attention as a safe way to generate reprogrammed cells. However, the poor efficiency of the cellular uptake of reprogramming proteins is still a major obstacle. Here, we reported key factors which improve the cellular uptake of these proteins. Purified red fluorescent proteins fused with 9xLysine (dsRED-9K) as a cell penetrating peptide were efficiently delivered into the diverse primary cells. Protein delivery was improved by the addition of amodiaquine. Furthermore, purified dsRED-9K was able to penetrate all cell lineages derived from mouse embryonic stem cells efficiently. Our data may provide important insights into the design of protein-based reprogramming or differentiation protocols.

• 대한핵의학회지
• /
• 제38권1호
• /
• pp.85-98
• /
• 2004

목적: 다약제내성(MDR) 극복제 verapamil은 MDR이 발현된 암세포에서 Tc-99m MIBI(MIBI)와 tetrofosmin(TF)의 섭취를 증가시키는 것으로 알려져 있으나, 세포의 종류에 따라서는 MIBI와 TF의 섭취를 감소시킬 수 있다는 보고가 있다. 본 연구는 암세포의 종류에 따라 verpamile이 MIBI와 TF의 섭취에 미치는 영향이 세포에 따른 차이가 있는지를 알아보고, 이러한 차이가 세포독성이나 PKC효소의 발현에 따른 차이인가를 알아보았다. 방법: 백혈병세포 K562세포와 유방암세포 MCF7, 난소암세포 SK-OV-3 세포 및 MDR이 유발된 K562(Adr)세포를 배양하였다. 시험관에서 $1{\times}10^6\;cells/ml$ 농도의 single-cell suspension 상태로 분주하고 verapamil을 1, 10, 50, 100, $200{\mu}M$의 농도로 처리한 후 MIBI와 TF를 배양한 후, $37^{\circ}C$에서 1, 15, 30, 45, 60분 동안 반응시킨 후 pellet과 supernatant의 방사능 치를 감마계수기로 측정하여 투여한 방사능 치에 대한 세포내 섭취백분율로 표시하였다. Verapamil의 세포독성은 MTT assay로 측정하였고, 세포내의 PKC isotypes의 변화는 western blotting analysis로 평가하였다. 결과: 4종류의 세포 모두에서 MIBI와 TF의 섭취는 1, 15, 30, 45, 60분 배양 시간에 따라 증가하였다. verapamil을 처리시 다약제 내성이 유발된 K562(Adr)세포에서 $100{\mu}M$의 농도까지는 MIBI와 TF 섭취가 증가하였고, 최대 $10{\mu}M$에서 10배 증가하였다. 그러나 K562세포를 verapamil $1{\mu}M$로 처리하였을 때는 기저치와 유사하였으나, verapamil의 농도가 증가함에 따라 MIBI와 TF의 세포섭취는 모두 감소하였다. K562세포의 60분 MIBI 섭취율은 79%($10{\mu}M$), 47%($50{\mu}M$), 29%($100{\mu}M$), 1.5%($200{\mu}M$)로 verapamil의 용량이 증가함에 따라 감소하였으며, TF 섭취율도 84% ($10{\mu}M$), 60%($50{\mu}M$), 42%($100{\mu}M$), 2.7%($200{\mu}M$)로 감소하였다. MCF7, SK-OV-3세포에서는 verapamil $10{\mu}M$까지는 MIBI와 TF의 섭취가 기저치와 유사하거나 소량 증가하였으나 $50{\mu}M$이상의 용량에서는 감소하여 $100{\mu}M$에서는 각각 40%와 5%만 섭취되었다. MTT assay상 K562(Adr)세포에서는 verapamil $100{\mu}M$ 이상에서는 유의하게 낮았으나 다른 세포는 $200{\mu}M$까지에도 차이가 없었다. PKC 아형의 분석상 PKC $\varepsilon$이 K562(Adr)세포에서 많이 발현되었으나, K562와 K562(Adr)세포에서는 verapamil처리에 따른 PKC 아형의 변화는 없었다. 결론: Verapamil은 암세포의 종류에 따라 MIBI와 TF의 섭취를 감소시켰고, 고용량에는 MDR세포의 섭취도 감소시켰으며 이러한 현상은 세포독성 이나 PKC효소 아형과는 관련이 없었다. 그러므로 MDR의 진단시 verapamil을 처치에 따른 MIBI와 TF의 섭취 정도를 기준으로 하는 경우에는, verapamil의 농도와 세포의 종류에 따라 현저한 차이가 있을 수 있다는 점을 생각하여야 한다.