• 한국미생물·생명공학회지
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• 제20권4호
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• pp.409-416
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• 1992

Bacillus cereus에 의한 pullulanase 생산의 최적 배양온도 및 배양시간은 각각 $15^{\circ}C$, 72시간이고, 기본배지에 casein, nutrient broth, egg albumin의 첨가는 효소의 생산을 크게 증가시켰다. 황산암모늄분획, CM-cellulose와 DEAE-cellulose column chromatography에 의하여 효소를 정제하였고 정제효소의 specific activity는 29.09U/mg protein, 수율은 17.1이었다. 정제효소는 polyacrylamide disc gel electrophoresis에 의하여 single band를 나타내었고, SDS-polyacrylamide disc gel electrophoresis에 의하여 추정된 분자량은 61,000, 등전점은 pH7.0, 최적온도는 $40^{\circ}C$, 최적 pH는 6.5, $35^{\circ}C$ 이하에서 안정하였고, pH 안정 범위는 6.5-11.0, $Ag^{+}$, $Hg^{2+}$, $Zn^{2+}$에 의하여 크게 저해되었고, $Ca^{2+}$은 효소의 내열성을 증가시켰다. 정제효소는 공시기질중 pullulan을 잘 분해시켰으며 pullulan에 대한 분해산물은 maltoriose이었다.

• 한국식품과학회지
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• 제12권4호
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• pp.263-271
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• 1980

피마자박 단백질을 사료 또는 식품화 하기 위하여 탈지 피마자박으로부터 독성분이 완전하게 제거된 단백질을 만들었다. 이 피마자 단백질의 용해도는 ${\varepsilon}$-아미노기의 숙시닐화 및 아세틸화로 $pH\;7{\sim}8$에서 현저하게 증가하였다. 아미노산 분석결과, 황-함유 아미노산과 L-리신이 제한 아미노산이었고, 아실화 과정은 아미노산 함량에 약간의 손실을 주었다. 파파인을 이용한 1 단계법 plastein 반응으로 피마자 단백질 또는 아실화 피마자 단백질과 DL-메티오닌 에틸 에스테르로부터 L-메티오닌 강화 피마자 단백질을 합성하였고, 이 방법으로 L-메티오닌 도입율은 50%였다. 피마자 단백질 및 수식된 피마자 단백질의 펩신에 의한 소화율은 모두 92% 정도였으나, 트립신에 의한 소화율은 숙시닐화 및 아세틸화 단백질이 현저하게 떨어져서 각각 42% 및 26%였다. 피마자 단백질의 단백질 효율은 L-메티오닌 강화로 카제인의 단백질 효율의 90%까지 향상되었으나, 피마자 단백질을 숙시닐화 및 아세틸화 하면 단백질 효율은 감소되어, 각각 카제인의 55% 및 69%였다.

• 한국동물학회지
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• 제27권4호
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• pp.199-212
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• 1984

대장균의 세포질내에 존재하는 단백질 분해효소(protease Ci)를 추출하여 그 성질을 조사하였다. 이 효소는 insulin, glucagon 및 bovine growth hormone을 분해시키나, bovine serum albumin, casein 및 globin 등은 분해시키지 않는다. 이 효소의 native 한 상태에서의 분자량은 120,000이며, 54,000 dalton의 동일한 2개의 subunit로 구성되어 있다. Protease Ci의 최적 pH는 7.5이며 등전점은 5.5이다. 이 효소는 o-phenanthroline에 의해 저해되며, $Mn^++나 Co^++$와 같은 metal 이온들에 의하여 활성화되므로 metalloprotease임을 알 수 있다. 이 효소는 p-hydroxymercuribenzoate에 의해서 크게 저해되나 sulfhydryl protease의 specific한 저해제인 Ep475와 leupeptin에 의해서는 영향을 받지 않는다. 대장균 세포내에서는 또 다른 insulin 분해효소 (protease Pi)가 존재하는데, 이 효소는 periplasm에 존재하므로 protease Ci와는 다르다.

• 산업식품공학
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• 제14권3호
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• pp.263-270
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• 2010

Xylanase를 생산하는 호알칼리성 균주를 토양으로부터 분리하여 동정하였다. 토양으로부터 분리한 호알칼리성 균주 3000여종 중 xylanase 활성이 가장 높은 균주인 strain DK-2386 균주를 선별하였다. Gram 염색과 SEM을 통한 형태학적 특성을 관찰하였으며, Methods for General and Molecular Bacteriology와 Bergey's manual of systematic bacteriology, 그리고 Biochemical tests for identification of medical bacteria에 준하여 생화학적 특성을 확인한 결과 배양액의 색은 붉은 빛을 나타내었으며, Gram양성 간균, 내생포자형성, catalase 양성, oxidase 양성, 혐기성 양성, glucose로부터 gas 형성 양성, casein 가수분해 양성, starch 가수분해 양성, CMC 가수분해 양성, xylan 가수분해 양성, nitrate 환원능 양성이며 10% NaCl 농도에서도 생육하는 것을 확인하였다. 균체의 지방산 조성 분석 결과 $C_{15:0\;ISO}$ 27.35%와 $C_{15:0\;ANTEISO}$ 31.54%, $C_{16:0}$ 9.70%로 이루어져 Bacillus속으로 동정되었으며, 16S rDNA 염기서열 분석결과 B. agaradhaerens와 100%의 유사성을 갖는 것을 확인하였다. (사)한국종균협회로부터 분양받은 Bacillus agaradhaerens 40952, B. alcalophilus와 strain DK-2386 균주사이의 생화학적 특성을 비교한 결과 B. agaradhaerens와 속과 종이 같으나 미세하게 특성이 다른 균주로 판단되어 B. agarad haerens DK-2386이라 명명하였다.

• 한국토양비료학회지
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• 제37권1호
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• pp.46-53
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• 2004

벼(Oryza sativa L.)에 서식하고 있는 메탄올 자화세균(methylotrophic bacteria)의 군집구조를 분석하기 위하여, 국내 3지역(청원, 익산, 밀양)의 경작지 논에서 재배되고 있는 4품종(일미, 동진, 남평, 오대) 벼의 잎, 줄기, 이삭, 뿌리 및 근권토양을 수집하였다. Methanol이 유일한 탄소원으로 첨가된 선택배지를 이용하여, 분홍색 색소체를 갖는 35균주와 무색소체의 5균주를 선별하였으며, 선별균주들의 형태학적, 생리 생화학적 특성을 조사하여 4개의 군집으로 구분하였다. 군집 I 및 IV 는 각각 nitrate와 nitrite reduction 특성에 의해 구별되었으며, pink pigment colony를 형성하는 또 다른 두 개의 군집들은 cellulase 생성유무에 의하여 구분되었다. 표준균주인 Methylobacterium extorquens AM1은 분리균주들과는 다른 군집으로 구분되었으며, M. fujisawaense KACC10744는 III 군집에 속하는 것으로 분석되었다. 분리된 모든 균주들은 urease, oxidase, catalase, pectinase 활성시험에서 양성반응을 나타냈으며, indole, MR-VP, $H_2S$, starch, casein 시험에서는 음성반응을 나타내었다. 또한, 모든 분리 균주들의 열 내성은 없었으며, $45^{\circ}C$ 이상에서는 성장하지 못하였다. 군집 I에서 두개의 분리균주가 각각 gelatin 가수분해와 methane 이용능을 나타내었으며, 대부분의 균주들은 탄소원으로 monosaccharides, disaccharide, polyols를 이용하여 성장하였다. 분리 및 선별되어진 균주들 중 6 균주만이 $86.2-809.9nmol\;C_2H_4\;h^{-1}\;mg^{-1}$ protein 범위의 질소고정능을 나타내었다.

• 한국식품과학회지
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• 제46권6호
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• pp.716-722
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• 2014

국내산 살 오징어 간췌장 조효소를 추출한 다음, 단백질 성질에 기초한 분획방법(용해도, 전기적 성질 및 분자량크기)으로 분획한 endoprotease 및 aminopeptidase 활성 획분들에 대한 분해 활성 비교한 다음, 이들 획분의 반응시간에 따른 쓴맛 casein 가수분해물의 쓴맛 개선 효과를 효소활성, 관능검사 및 HPLC 크로마토그램을 통하여 살펴보았다. 분획방법별 각 획분의 쓴맛 평가에 의한 쓴맛 개선 효과는 겔 여과법에 의하여 분획된 획분(GF-I, 30-50 kDa)이 가장 효과적이었다. GF-I 획분을 2% Gly-phe에 준하는 쓴맛 casein 가수분해물에 대하여 1/500의 비율로 첨가한 다음, 16시간 이상 반응시킨 가수분해물은 HPLC 크로마토그램 상에서 친수성이 강한 피크면적(피크 1, 2 및 4)은 증가한 반면, 소수성이 상대적으로 강한 피크면적(피크 3, 5 및 6)가 감소하였으며, 쓴맛 평가 결과에서도 쓴맛 개선 효과가 뚜렷하였다. 앞으로의 연구에서는 오징어 간췌장 유래 aminopeptidase의 효율적인 산업적 이용을 위한 단백질 분자량 크기에 따른 연속분획 공정을 통한 대량회수 방법 및 쓴맛 개선 가수분해물로부터 유리된 아미노산분석, 효소안정성, 기질특이성 등에 대하여 진행하고자 한다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제20권1호
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• pp.132-137
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• 2010

The skc gene encoding streptokinase (SK) with a molecular mass of approximately 47.4 kDa was cloned from Streptococcus equisimilis ATCC 9542 and heterologously overexpressed in Streptomyces lividans TK24 and E. coli using various strong promoters. When the promoter for sprT [Streptomyces griseus trypsin (SGT)] was used in the host S. lividans TK24, a 47.4-kDa protein was detected along with a smaller hydrolyzed protein (44 kDa), suggesting that posttranslational hydrolysis had occurred as has been reported in other expression systems. The casein/plasminogen plate assay revealed that the plasmid construct containing the SGT signal peptide was superior to that containing the SK signal peptide in terms of SK production. Maximal production of SK was calculated to be about 0.25 unit/ml of culture broth, a value that was five times higher than that obtained with other expression systems using ermE and tipA promoters in the same host. When the skc gene was expressed in E. coli BL21(${\Delta}DE3$)pLys under the control of the T7 promoter, a relatively large amount of SK was expressed in soluble form without hydrolysis. SK activity in E. coli/pET28a-$T7_pSK_m$ was more than 2 units/ml of culture broth, even though about half of the expressed protein formed an inactive inclusion body.

• 생명과학회지
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• 제13권4호
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• pp.535-540
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• 2003

최근 발효식품의 건강학적 활용면에 관한 연구는 활발히 진행되고 있다. 또한 발효식품 중에 가장 중요한 간장 발효미생물의 건강제품의 활용에 대해서 많은 연구가 진행되었다. 재래식 간장에 관한 연구결과로 항암작용, 노화지연, 호르몬 분비 촉진 등이 보고되고 있으나, 구강질환 원인균에 대한 방제효과가 있는가에 관한 연구는 거의 이루어지지 않고 있는 실정이다. 본 연구는 치아우식 등 구강질환 원인균인 Streptococcus sanguis, S. salivarius, S. mutans들의 성장을 억제하는 방제균을 선발하고 이들을 동정하기 위해 시행되었다. 우선 25종의 간장발효 균주를 분리하였고, 그 중 구강질환 방제력이 높은 2 균주(NG 06, NG 16)를 선별하였다. Bergey's manual of systematic bacteriology의 세균분류동정표에 의해 각종 동정에 필요한 배양학적, 형태학적, 생화학적 특성을 시험한 결과와 $Biolog^{(R)}$사의 세균동정시스템(MicroLogTM 3)을 이용하여 검정 실험한 결과 NG 06은 Bacillus racemilacticus로 NG 16은 Bacillus amyloliquefaciens으로 최종 확인, 동정되었다(Table 3). 앞으로 이 균들이 생산해내는 항균물질의 길항 기작에 관한 연구와 그 효능을 검증하고자 하며 그 항균물질 효과생산 최적조건에 대한 연구를 수행할 계획이다. 나아가 세치제 및 구강위생용품으로 활용면에 관한 연구를 확대하고자 한다.

• Fisheries and Aquatic Sciences
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• 제5권4호
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• pp.311-313
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• 2002

Proteolytic activity of live Uronema manum was analyzed by fluorescence polarization (FP) technique. Protease activity was measured by a decrease in FP value using fluorescein isothiocynate (FITC)-casein as a protein substrate. The results demonstrated an inverse linear relationship between fluorescence polarization (FP) values and live ciliate concentration over the range $1\times10^4\;to\;2\times10^5$ cells/well. However, the FP values of $10-10^3$ live parasites were not different significantly from that of control. Time-dependent decrease in FP value was shown in the wells containing live U. marinum. In the present study, FP assay had the benefit to provide measurements of substrate hydrolysis by live parasites in real-time, and did not require separations, precipitations, or transfers of reaction mixture.

• 한국생물공학회:학술대회논문집
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• 한국생물공학회 2000년도 추계학술발표대회 및 bio-venture fair
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• pp.167-170
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• 2000

B. Stearothermophilus 단백질 분해 효소는 2가 금속 이온인 $Ca^{2+}$에 의하여 내열성이 향상되며 $75^{\circ}C$에서 최대 역가를 나타내었다. 2mM $Ca^{2+}$를 첨가하여 B. Stearothermophilus를 이용한 호열 ${\cdot}$ 호기성 소화공정 운전할 경우 각각 최대량 대비 51%와 27%의 DOC 및 세포외단백질의 분해가 이루어지는 것을 확인하였다.