예로부터 황기는 민간에서 강장제로서 인삼 다음의 보약으로 쓰이고 있다. 본 연구에서는 황기의 성분 중 플라보노이드 화합물로 알려진 calycosin과 formononetin을 유효성분으로 함유하는 황기추출물의 항노화 효과에 대해 알아보았다. Calycosin과 formononetin의 함량은 효소처리 추출방법에 따라 차이가 있었으며, 두 가지 성분들의 함량에 따라 항산화효과 및 tyrosinase 활성 저해효과가 다르게 나타났다. 이러한 연구 배경으로 calycosin과 formononetin을 유효성분으로 함유하는 황기추출물의 피부주름개선 효과를 알아보기 위해 콜라겐 발현효과 및 MMP-1 발현 억제효과를 각각 측정하였다. 그 결과 황기추출물의 콜라겐합성은 증가하였으나, MMP-1 발현 저해효과는 크지 않았다. 또한 0.1% 황기추출물 함유 크림은 대조군에 비하여 피부주름 개선효과를 나타냈다. 이러한 결과를 볼 때 황기추출물은 주름개선용 기능성화장품 신소재로의 응용이 기대된다.
Background: Astragalus membranaceus belonging to the Leguminosae family is often utilized as a traditional medicine. The aim of this study was to elucidate the basic breeding information required to develop short stem A. membranaceus cultivars. Methods and Results: Roots of A. membranaceus advanced yield trial (AYT) lines were harvested in late October 2017. Root yield of six AYT lines were increased in a range of 8.9 - 74.8% compared with 'Aseong' as control (check variety). The height of seven AYT lines were shorter than that of 'Aseong'. In addition, stem diameter of nine AYT lines was thicker than that of 'Aseong'. Consequently, 1502-56, 1503-90, and 1510-80 were selected as elite lines for the development of short stem cultivars. HPLC analysis was perfromed to identify lines with high level active components such as calycosin-7-O-${\beta}$-D-glucoside and calycosin. The levels of both active components were higher in 1502-56, and 1503-90, but not in 1510-80 compared to 'Aseong'. In addition, 2,2-Diphenyl-1-picryl hydrazyl (DPPH) radical scavenging activity was higher in the 1502-56 compared to 'Aseong'. Considering these results, two AYT lines, 1502-56 and 1503-90 were selected as short stem lines with high calycosin-7-O-${\beta}$-D-glucoside and calycosin content. Conclusions: Taken together, Two short stem lines were identified in this study. In our future study, regional yield trial (RYT) will be conducted using these selected lines to develop new cultivars.
The present study was carried out in order to assess the protective effects of calycosin-7-O-$\beta$-D-glucopyranoside, isolated from Astragali radix (AR), on hyaluronidase (HAase) and the recombinant human interleukin-$1\beta$ (IL-$1\beta$)-induced matrix degradation in human articular cartilage and chondrocytes. We isolated the active component from the n-butanol soluble fraction of AR (ARBu) as the HAase inhibitor and structurally identified as calycosin-7-O-$\beta$-D-glucopyranoside by LC-MS, IR, ${1}^H$ NMR, and ${13}^C$ NMR analyses. The $IC_{50}$ of this component on HAase was found to be 3.7 mg/ml by in vitro agarose plate assay. The protective effect of ARBu on the matrix gene expression of immortalized chondrocyte cell line C28/I2 treated with HAase was investigated using a reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR), and its effect on HAase and IL-$1\beta$-induced matrix degradation in human articular cartilage was determined by a staining method and calculating the amount of degraded glycosaminoglycan (GAG) from the cultured media. Pretreatment with calycosin-7-O-$\beta$-D-glucopyranoside effectively protected human chondrocytes and articular cartilage from matrix degradation. Therefore, calycosin-7-O-$\beta$-D-glucopyranoside from AR appears to be a potential natural ant-inflammatory or antii-osteoarthritis agent and can be effectively used to protect from proteoglycan (PG) degradation.
황기는 국내에서 생산되는 3대 약재의 하나이며 인삼 다음으로 사용량이 많은 약재로서 황기의 성분 연구는 비교적 많이 이루어져 있는 실정이다. 그러나 황기의 주성분에 대한 표준화가 현재 정확히 마련되지 않은 현 실정을 감안하여 황기의 연근별 및 산지별 isoflavonoids의 함량 분석에 대한 연구를 진행하였다. 산지별 5종 황기 (제천, 정선, 영주, 태백, 중국)의 1년 근 및 3년 근 80% EtOH수용액 추출물을 가지고 calycosin 과 formononetin 함량을 측정하였으며, 또한 cellulase, $\beta$-glucanase 및 xylanase가 주성분인 Viscozyme L을 가하여 효소처리한 후, calycosin과 formononetin의 함량을 측정하고 아울러 이들의 배당체 함량도 예측하였다. 추출물의 전체 고형분의 양은 산지별로는 중국산 > 영주산 $\geq$ 정선산 $\geq$ 제천산 $\geq$ 태백산으로 상대적으로 중국산의 고형분의 양이 월등히 많았다. 또한 5종의 산지별 황기는 3년근보다는 1년 근의 고형분의 양이 많음을 알 수 있었다. Calycosin 함량은 효소처리 전에는 3년 근보다 1년 근에서 높았으며, 정선산 $\geq$ 중국산 > 제천산 > 태백산 > 영주산 순이었다. 효소처리 후에는 1년 근보다는 3년 근에서 높은 함량을 나타내었고, 제천산 > 정선산 $\geq$ 중국산 > 태백산 > 영주산으로, 이는 제천산의 경우 calycosin 배당체 성분이 많이 함유되어 있음을 짐작할 수 있었다. 정선산 및 중국산 1년 근의 경우는 효소처리 후에도 calycosin 함량 변화가 미미한 것으로 보아 calycosin 배당체 함량이 낮음을 알 수 있었다. Formononetin 함량은 효소처리 전 후 모두 전반적으로 calycosin에 비해 낮았으며, 정선산과 영주산은 효소처리 후에도 formononetin 함량 변화가 미미한 것으로 보아 formononetin 배당체 함량이 낮음을 알 수 있었다. 산지별로 isoflavonoids의 함량을 보면 제천산이 가장 높았으며, 고형분 함량을 고려한다면 중국산이 상대적으로 높음을 알 수 있었고, 연근별로 isoflavonoids의 함량을 보면 재배 연수가 오래됐다고 해서 이들의 함량이 월등히 높아 지지는 않았다. 지표성분의 결정에 따라 달라질 수 있으나, 본 연구의 지표성분인 isoflavonoids 함량은 산지별로 상당한 차이를 보임으로 황기를 건강기능식품이나 화장품 원료로 이용할 경우 산지 및 연근의 선택이 중요할 수 있음을 시사하였다.
본 연구에서는 담자균 균사체를 황기에 배양하여 이용성 및 기능성을 증진시킨 식품 및 소재를 개발하기 위한 연구의 일환으로 기초연구를 실시하였다. 수분함량, pH 및 환원당을 측정함으로서 균사체 배양 황기의 변화를 관찰한 결과 수분함량은 대조구에 비하여 전체적으로 증가하였으며, pH는 상황버섯 균사체 및 팽이버섯 균사체 배양 황기의 pH가 각각 6.51, 6.41로 증가하는 경향을 보였으나, 이 외의 균사체가 배양된 황기는 대조구와 유사한 수치인 pH 5.30~5.61로 미미하거나 특별한 변화폭을 보이지 않았다. 환원당 함량 측정결과 팽이버섯 균사체 배양 황기가 대조구에 비해 약 2배 증가한 391.74 mg/100 g으로 가장 높은 함량을 나타냈고, 다음으로 상황버섯 및 큰 느타리버섯 균사체 배양 황기가 각각 346.73 mg/100 g 및 289.97 mg/100 g으로 다소 증가한 함량을 나타냈다. 추출용매에 따른 균사체 배양 황기의 추출수율 결과 열수추출물이 80% 에탄올 추출물 보다 높았으며, 큰 느타리버섯 균사체 배양 황기의 열수추출물이 52%로 가장 높은 수율을 나타내었다. 유리당 함량 분석결과 80% 에탄올 추출물에서 fructose는 큰 느타리버섯 균사체 배양 황기의 함량이 2,154.61 mg/100 g으로 가장 높았고, sucrose는 표고버섯 균사체 배양 황기가 8,929.60 mg/100 g 으로 가장 높은 함량을 보였으며, glucose는 모든 실험구에서 감소되거나 검출되지 않았다. 열수추출물에서 fructose는 1,528.03 mg/100 g으로 큰 느타리버섯 균사체 배양 황기가 가장 높은 함량을 나타낸 반면 glucose 및 sucrose는 전반적으로 감소되거나 검출되지 않았다. 그러나 대조구 자체에서 검출되지 않았던 glucose가 상황버섯 균사체 배양 황기에서 1,547.51 mg/100 g의 높은 함량으로 검출되었다. 담자균 배양 황기의 성분 함량을 분석한 결과 80% 에탄올 추출물에서 상황버섯(calycosin 2,549.24 mg/g, formononetin 1,366.69 mg/g) > 팽이버섯(calycosin 983.57 mg/g, formononetin 744.14 mg/g) > 표고버섯(calycosin 788.29 mg/g, formononetin 621.22 mg/g) 순으로 함량이 크게 증가하였고, 열수추출물에서는 상황버섯(calycosin 827.66 mg/g, formononetin 221.28 mg/g) > 표고버섯(calycosin 349.45 mg/g, formononetin 142.35 mg/g) > 팽이버섯(calycosin 328.36 mg/g, formononetin 127.64 mg/g) 순으로 높은 함량은 나타내었다. 이러한 결과는 담자균의 효소활성으로 인해 황기의 배당체 성분이 aglycon형태로 전환됨으로서 calycosin 및 formononetin 함량이 증가한 것으로 사료된다. 본 연구에서 담자균 균사체 배양을 통해 황기의 기능성을 증대 시킬 수 있음을 알 수 있었고, 이러한 담자균이 배양된 황기를 이용하여 기능성 및 생리활성 효능 등이 증대된 식품소재 및 건강기능식품으로 개발 가능성이 있음을 제시하였다. 따라서 본 연구결과를 기초자료로 하여 황기의 기능성을 증대시키기에 적합한 담자균을 이용하여 배양일에 따른 황기의 이화학적 특성 및 성분분석과 더불어 세포실험 등을 통해 기대되는 생리활성 효능에 대한 검증이 필요할 것으로 생각된다.
This study has been conducted to establish the optimal extraction process and HPLC analysis method for the determination of marker compounds as a part of the materials standardization for the development of health functional food materials from Astragali radix. Five extraction conditions including the shaking extraction at room temperature and the reflux extraction at $85^{\circ}C$ with 30%, 50% and 95% ethanol were evaluated. Reflux extraction with 50% ethanol showed the highest extraction yield as $27.27{\pm}2.27%$, while the extraction under reflux with 95% ethanol showed significantly the lowest yield of $10.55{\pm}0.24%$. The quantitative determination methods of calycosin-7-O-${\beta}$-D-glucoside and calycosin as marker compounds of Astragali radix extracts were optimized by HPLC analysis using a Thermo Hypersil column ($4.6{\times}250mm$, $5{\mu}m$) with the gradient elution of water and acetonitrile as the mobile phase at the flow rate of $0.8mLmin^{-1}$ and a detection wavelength of 230nm. The HPLC/UV method was applied successfully to the quantification of two marker compounds in Astragali radix extracts after validation of the method with the linearity, accuracy and precision. The contents of calycosin-7-O-${\beta}$-D-glucoside and calycosin in 50% ethanol extracts by reflux extraction were significantly higher as $1,700.3{\pm}30.4$ and $443.6{\pm}8.4{\mu}g-1$, respectively, comparing with those in other extracts. The results indicate that the reflux extraction with 50% ethanol at $85^{\circ}C$ is optimal for the extraction of Astragali radix, and the established HPLC method are very useful for the evaluation of marker compounds in Astragali radix extracts to develop the health functional material from Astragali radix.
Five isoflavones were isolated from the root of Caragana microphylla Lam. and the structures have been identified by means of chemical and physical methods. The isoflavones are 7-hydroxy-4'-methoxyisoflavone(formononetin), $form ononetin-7-O-{\beta}-glucoside(ononin)$, 7-hydroxy-3', 4'-methylenedioxyisoflavone(pseudobaptigenin), $7-O-{\beta}-glucuopyranosyloxy-3'- hydroxy-4'-methoxyisoflavone(calycosin-7-O-{\beta}-gluc-oside)$ and maackiain.
The major active components of Astragalus membranaceus (AM) are isoflavones, which exist in the form of various glycosides. Nuruk is a traditional fermentation starter in Korea, and is suitable for the biotransformation of isoflavone glycosides because it contains various microorganisms and enzymes. This study was performed to determine changes in the isoflavones and antioxidant properties of AM fermented (AF) with nuruk over 24 hours. AF was sampled after 0, 2, 4, 6, 12, 18, and 24 h of fermentation, and calycosin 7-glucoside, ononin, calycosin, and formononetin content, and the antioxidant properties of AF were analyzed. The total phenolic content increased with fermentation time, and the ABTS radical scavenging activity increased until 6 h of fermentation and then decreased. During fermentation, the isoflavone glycosides decreased significantly as fermentation time increased. The contents of calycosin and formononetin, which are aglycons of calycosin-7-glucoside and ononin, increased from 100.54 ㎍/g to 276.84 ㎍/g and from 56.29 ㎍/g to 123.04 ㎍/g, respectively, at 18 h of fermentation. Significant correlations were observed between fermentation time, isoflavone content, and antioxidant properties. The results of this study showed that fermentation with nuruk is suitable for the biotransformation of isoflavones in AM.
In order to isolate hyaluronidase (HAase) inhibitor from Astragali radix (AR), dried roots were extracted with ethanol, prior to sequential fractionations with n-hexane, chloroform, ethyl acetate, n-butanol, and aqueous fractions. The n-butanol soluble fraction was found to exhibit the most pronounced inhibitory effect (68%) on HAase, and the active components were separated using various chromatographic methods, including column chromatography and preparative HPLC. The active component was isolated from the n-butanol soluble fraction of AR and was structurally identified as calycosin-7-O-${\beta}$-D-glucopyranoside by LC-MS, IR, $^1H$ NMR, and $^{13}C$ NMR analysis. The $IC_{50}$ of calycosin-7-O-${\beta}$-D-glucopyranoside's HAase activity was found to be 3.7 mg/mL.
From the 70% EtOH extract of the roots of Astragalus membranaceus (Leguminosae), eleven flavonoid derivatives and a lignan, were isolated and identified as liquiritigenin (1), daidzein (2), formononetin (3), sophorophenolone (4), calycosin (5), methylnissolin (6), isomucronulatol (7), isomucronulatol 7-O-glucoside (8), methylnissolin 3-O-glucoside (9), calycosin 7-O-glucoside (10), (+)-syringaresinol O-${\beta}$-D-glucoside (11), and isomucronulatol 7,2'-di-O-glucoside (12), by spectroscopic methods. This is the second report of the isoflavonoid derivatives sophorophenolone (4) and isomucronulatol 7,2'-di-O-glucoside (12) from a natural source, as well as the first report of compounds liquiritigenin (1), daidzein (2) and (+)-syringaresinol O-${\beta}$-D-glucoside (11) from the species A. membranaceus.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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