Objectives Alismatis Rhizoma has been known to suppress inflammation and allergic reaction. However, the cellular target of Alismatis Rhizoma and its mechanism of action remain unclear. This study was designed to examine the effect of Alismatis Rhizoma extract (ALC) on the RBL-2H3 mast cells in vitro and on the OVA/alum sensitized mice ex vivo. Methods In the study, RBL-2H3 mast cells were cultured in minimal essential medium (MEM) for 24 hours, and treated separately with cyclosporin A and varying doses of ALC, and then stimulated with Phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) (50 ng/ml) and Ionomycin ($0.5{\mu}M$). The levels of IL-13, IL-4 were measured by ELISA analysis. The mRNA levels of IL-4, IL-5, IL-6, IL-13, GM-CSF, $TNF-{\alpha}$ were analyzed with Real-time PCR. Also, manifestations of MAPKs transcription factors and $NF-{\kappa}B$ p65 translocation were analyzed by western blotting in vitro. Subsequently, for ex vivo experiment, we induced allergic inflammation on Balb/c mice by OVA/alum and administered ALC orally. And we measured serum OVA-specific IgE level and IL-4, IL-13 in the splenocyte culture supernatant by ELISA analysis. Results ALC was shown to suppress mRNA expression of IL-4, IL-5, IL-6, IL-13, GM-CSF, $TNF-{\alpha}$, and to inhibit the IL-13, IL-4 production. Also ALC reduced an activation of mast cells specific signal MAPKs transcription factors and $NF-{\kappa}B$ p65 from the western blot analysis in in vitro experiment. In ex vivo, ALC oral adminstration decreased the level of OVA-specific IgE in serum, and IL-4, IL-13 in the splenocyte culture supernatant. Conclusions ALC is shown to reduce inflammation and allergic response by suppressing Th2 cytokines through the regulation of transcription factors MAPKs and $NF-{\kappa}B$ p65 in mast cells. Administration of ALC suppressed OVA-specific IgE in ovalbumin allergy model through the inhibition of Th2 cytokine. In conclusion, ALC can be considered as an effective treatment for allergic diseases such as atopic dermatitis.
Toxoplasma gondii이 약독주인 Beverley주, Fukaya주 띤 MR49주를 각각 감염시킨 BALB/c 마우스에서 발현되는 세포매개 성 및 체액성 면역반응을 비교 관찰할 목적으로 매주 1회씩 10주에 걸쳐 각각 3마리씩 취하여, 소정의 과정을 거쳐 준비한 비장세포에 concanavalin A(Con. A), lipopolysaccharide(LPS) 및 Toxoplasma Iysate를 처리한 후 아세포화 반응의 정도를[3H]-thymidine의 전입량으로 측정, 평가하는 한편, 혈청내 IgG 및 IgM 항체가를 효소결합면역흡착법 (ELISA)으로 측정, 분석하였다. Con. A 및 Toxoplasma Iysate로 처리시 비장세포의 아세포화 반응은 3개주 감염군 모두 대조군에 비해 감염후 1주부터 유의하게 감소되었으나, LPS로 처리시 3개 주 감염군 모두 대조군에 비해 유의한 차이가 없었다 또한 각 주별 감염 마우스 상호간에도 유의 한 차이가 없었다. 혈청내 IgG 항체가는 3개주 감염군 모두 감염후 2주부터 7주까지 계속적으로 증가한 후 그 항체가가 지속되었으며, IgM 항체가는 1주에서 4주 사이에 현저히 높았다. 그러나 카 주별 감염 마우스의 혈청내 IgG 및 IgM 항체가 상호간에는 유의한 차이가 없었다. 이상의 성적으로 보아 T. gondii의 Beverley주, Fukaya주 및 ME49주를 각각 감염시킨 마우스에 있어 감염 초기에는 세포매개성 면역반응이 억제되며, 체액성 면역반응에 있어 IgM 항체는 감염 초기에 증가하였고 IgG 항체는 초기부터 높은 수준으로 장기간 지속됨을 알 수 있었다.
Helicobacter pylori(H. pylori)는 위 감염증의 주된 원인균으로, 위염 및 위궤양을 일이키는 균으로 알려져 있다. 대부분의 성인 남녀의 위에서 발견이 되면, 특히 한국 성인의 위에서 60~90% 정도 발견된다. H. pylori을 제균하기 위해 많은 치료 방법들이 시도되었고 어느 정도의 제균 활성은 있었으나, 완벽한 제균은 기존의 치료 약물로는 어렵다. 따라서 기존의 약물보다 더 효과가 좋은 물질의 개발이 시급한 상황이다. 본 연구에서는 항균 능력이 뛰어난 물질 중, 쉽게 접할 수 있고 경구투여로 치료가 용이하여 약재나 식품으로 응용할 수 있는 물질들중 유기산들이 살균능력이 뛰어난 것을 알았다. 그 중 초산이 가장 뛰어나 살균효과를 보였다. 초산의 H. pylori에 대한 억제 능력을 확인하기 위해 농도별, 시간별로 in vitro 접촉실험법으로 실험을 시행하였다. 그 결과 0.3% 이상의 초산 용액에서는 H. pylori가 1분 이내에 100% 사멸되었다. In vitro 실험 결과를 토대로 BALB/c mouse를 이용한 in vivo 실험을 하였다. H. pylori를 경구투여로 위해 접종하였다. 다음 감염된 것을 확인하고 초산용액을 각 군에 해당하는 농도에 준하여 0.1mL를 1일 1회 혹은 3회 경구투여하였다. 초산에 의한 H. pylori의 사멸 정도를 재배양 실험법, urease test 및 ELISA법으로 확인한 결과 초산용액 0.2% 식이에서 모두 사멸되었다. RT-PCR법으로 검정한 결과는 초산용액 0.2%에서 밴드가 나타났지만 이는 사멸된 균의 것으로 보이며, 0.3%에서 존재하지 않는 것으로 나타났다. RT-PCR법에서 0.2% 초산용액 식이에서는 H. pylori가 확인되는 것은 H. pylori의 사균이 위벽에 붙어 있다가 RT-PCR법으로 확인되는 것으로 보였다. 따라서 이 연구 결과가 세상 사람들의 절반이상이 감염되어 있는 H. pylori를 퇴치하는 데 매우 유용한 자료가 될 것이다. 또한 초산을 이용한 기능성 식품 개발에도 중요한 자료로써 활용될 것으로 생각된다.
본 연구에서는 체내 염증지표 변화를 모니터링 함으로써 새로운 천연추출물인 polycan 및 calcium gluconate 복합제제의 치주질환 개선 효과를 평가하고자 하였으며, 다음과 같은 결론을 얻었다. 1. 치은열구액 내 $IL-1{\beta}$는 대조군과 시험군 모두 시간에 따른 유의한 차이는 없었으나(p>0.05), 4주째 시험군이 대조군보다 낮았다(p<0.05). 2. 치은열구액 내 MMP-8과 $TNF-{\alpha}$는 4주째 시험군에서 초기에 비해 감소하였으며, 시험군이 대조군보다 낮았다. 3. 혈액 내 MMP-8은 4주째 시험군에서 유의하게 감소하였고(p<0.05), 대조군에 비해 통계적으로 유의하게 낮았다(p<0.05). 그러나 혈액 내 CRP는 유의한 변화가 관찰되지 않았다(p>0.05). 이상의 결과들을 종합해 보았을 때, polycan을 함유한 calcium gluconate 복합제 복용이 전신적인 염증성 생체지표에 영향을 미쳐 치은열구액 내의 염증매개물질들을 감소시킴으로써 치은건강에 긍정적인 효과를 나타내는 것으로 사료된다.
본 연구는 안전성 확보차원에서 식품분야에 활용성이 증가하고 있는 감마선 조사처리가 유제품의 항원성 저감에도 효과가 있음을 보이기 위해 수행되었다. 모세관전기영동 결과 ${\alpha}_{S1}$-케이신과 ${\beta}_{A1}$-케이신이 ${\alpha}_{S0}$-케이신과 ${\beta}_{A2}$-케이신보다 상대적으로 많이 분해되었음을 확인하였다. cELISA를 이용한 in vitro 시험 결과와 기니픽을 이용한 수동피부아나필랙시스(Passive cutaneous anaphylaxis) 반응을 통해 10 kGy의 감마선 조사에서 뚜렷한 항원성 저감을 확인하였다. 이상의 결과는 감마선 조사가 우유 단백질의 항원, 특히 ${\alpha}_{S1}$-케이신과 ${\beta}_{A1}$-케이신의 구조를 변화시켜 항원성을 감소시키는 것으로 판단되며, 따라서 감마선 조사는 알레르기 유발 식품의 항원성 감소에 유용한 기술로 생각된다.
In vitro 소화시 계란 성분이 anti-Y ruckeri IgY 항세 활성을 안정화시키는데 어떡해 관여하는지를 SDS-PAGE와 ELISA로 조사한 결과는 다음과 같다. Anti-Y ruckeris IgY 항체와 난황 및 난백으로 혼합 후 펩신으로소화시킨 후 경우 1시간 후 난황 및 난백이 혼합된 시료에서 모두 anti-Y ruckeri IgY 항체의 heavy chain과 light chain이 분해는 되었지만 어느 정도 밴드를 관찰할 수있었으며, anti-Y, ruckeri IgY 항체 활성 측정한 결과 난황시료는 35%, 난백시료는 61%의 항체 활성을 유지시켰다. Anti-Y ruckeri IgY 항체와 오보알부민, 오보뮤우신, 라이소자임 및 오보뮤코이드를 혼합 한 후 펩신으로 소화시킨 경우 1시간 우에는 anti-Y, ruckeri IgY항체의 heavy chain의 밴드르 fdjsm 정도 볼 수 있는 형태로 나타났으며, anti-Y, ruckeri IgY 항체의 light chain는 오보뮤우신 및 오보뮤코이드가 홉합되어 펩신으로 소화시킨 경우 1시간 후에는 밴드를 거의 볼수 없었으나 오보알부민 오보트란스훼린 및 라이소자임에 혼합된 시료에서 밴드를 관찰할수 있었다. 특히 라이소자임과 오보트란스훼린의 경우 펩신 호화 2시간 우에도 anti-Y, ruckeri IgY 항체의 light 밴드가 관찰되었다. 펩신소화 1시간 후에 난백성분이오보알부민, 오보뮤우신, 라이소자임, 오보트란스웨린 및 오부뮤코이드 중에서 단지 오보트란스훼린만이 38%의 anti-Y, ruckeri IgY 항체 활서을 보인후 2시간 후에도 15% 정동의 활성을 나타내었다. anti-Y, ruckeri IgY항체와 난백 및 전란을 혼합한 다음 무지개송어 위 추출액으로 소화시 2시간 후에 난백은 14%, 전란은 69%로 anti-Y, ruckeri IgY 항체 활성을 유지시킨 것으로 나타났다.X> $e_{I}$ WPi_BE_QE]]]]]로 상징하며 WLWQ에 적용되는 몇 가지 제약을 관찰하고 이를 일반적인 언어원리로 설명한다. 첫째, XP는 주어로만 해석되는데 그 이유는 XP가 목적어 혹은 부가어 등 다른 기능을 할 경우 생략 부위가 생략의 복원 가능선 원리 (the deletion-up-to recoverability principle)를 위배하기 때문이다. 둘째, WLWQ가 내용 의문문으로만 해석되는데 그 이유는 양의 공리(the maxim of quantity: Grice 1975) 때문이다. 평서문으로 해석될 경우 WP에 들어갈 부분이 XP의 자질의 부분집합에 불과하므로 명제가 아무런 정보제공을 하지 못한다. 반면 의문문 자체는 정보제공을 추구하지 않으므로 앞에서 언급한 양의 공리로부터 자유롭다. 셋째, WLWQ의 XP는 주제어 표지 ‘는/-은’을 취하나 주어표지 ‘가/-이’는 취하지 못한다(XP-는/-은 vs. XP-가/-이). 이는 IP내부 에 비공범주의 존재 여부에 따라 C의 음운형태(PF)가 시성이 정해진다는 가설로 설명하고자 했다. WLWQ에 대한 우리의 논의가 옳다면, 본 논문은 다음과 같은 이론적 함의를 기닌다. 첫째, WLWQ의 존재는 생략에 대한 두 이론 즉 LF 복사 이론과 PF 삭제 이론 중 전자의 입장을 지지한다. 둘째, WP를 XP로부터 복원할 때 부분 자질만 복사된다. 이는 어휘가 통사층위로 들어온 이후에도 어휘 자질들이 완전히 동결되는 것이 아니라 계속 지시될 수 있다는 가설을 지지한다.
락토페린은 철 결합 당단백질로서 항 미생물활성과 면역강화와 같은 생리활성 기능을 가지고 있다. 본 연구는 배양 세포 고 발현 SWPA2 promoter를 이용하여 인체락토페린(hLf)을 생산하는 형질전환 가시오갈피 배양세포주 개발에 관한 것이다. 형질전환에 이용된 벡터는 산화스트레스 유도성 SWPA2 promoter의 조절 하에서 hLf이 소포체로 targeting되도록 제작된 SWPA2pro::ER-hLf/pCAMBIA이다. hLf을 생산하는 각 형질전환 배양세포들은 PCR과 Southern분석을 통해 hLf 유전자가 가시오갈피 게놈내로 성공적으로 도입되었음을 확인하였으며, western blot과 ELISA를 통해 형질전환 가시오갈피 배양 세포주에서 hLf 단백질이 활성이 있음을 확인하였다. 형질전환 가시오갈피 배양세포에서 hLf 단백질의 함량은 세포배양이 진행될수록 증가하여 정지기 때 가장 높았으며 전체 수용성 단백질의 약 3%를 차지하였다. 따라서 본 연구에서 개발된 인체락토페린을 고생산하는 약용식물 가시오갈피 배양 세포주는 산업적으로 이용될 수 있을 것으로 기대된다.
Ci-ELISA를 이용하여 여러 가지 물리적 처리(초고압, 가압가열, 초음파 및 microwave 처리)에 의한 새우 allergen 및 allergenicity의 변화를 살펴본 결과는 다음과 같다. 초고압 처리에 의해 새우의 allergenicity는 압력이 400 MPa까지 증가함에 따라 새우 allergen과 mAb, 환자혈청과의 결합력이 감소하였으며, 특히 400 MPa로 압력 처리했을 때 mAb와 새우 allergen과의 결합력이 50% 이하로 감소하였다. 새우 allergy의 allergenicity 변화를 알아보기 위해 5, 10, 30, 60분간 초음파 처리한 결과는 5, 10, 30분간 초음파 처리 시 처리시간이 길어짐에 따라 새우 allergen과 mAb와의 결합력이 감소하였으며 특히 60분간 처리한 경우에 있어서는 결합력이 60% 이하로 감소하였다. 가압 가열 처리$(121^{\circ}C,\;1.4\;kg/cm^2)$와 microwave 처리(2,450 MHz)에 의한 새우 allergy의 allgergenicity 변화를 살펴본 결과 처리시간이 증가하여도 새우 allergen과 mAb와의 결합력이 크게 감소하지 않았다. 즉 20분간 microwave 처리 시 85% 이상의 높은 결합력을 보였으며 60분간 가압 가열처리에 의해서는 70% 이상의 결합력을 보였다.
Cervical cancer is one of the leading causes of female death from cancer worldwide with about 500,000 deaths per year. A strong association between certain human papilloma viruses (HPV types 16 and 18) and cervical cancer has been well known. An extract of natural products, named as Somatid, has been used to investigate whether this agent has the ability of inhibiting the oncogenes E6 and E7 of HPV type 16. This Somatid inhibited the proliferation of human cervical cancer cell lines (C-33A, SiHa, CaSki) and HaCaT keratinocytes in a dose response manner, In vitro binding assay and ELISA showed that Somatid inhibited the in vitro biding of E6 and E6AP which are essential for the binding and degradation of the tumor suppressor p53. In addition, Somatid inhibited the in vitro binding of E7 and Rb which is essential tumor suppressor for the control of cell cycle. The levels of mRNA for E6 and E7 were also decreased by Somatid. Our data suggested that Somatid inhibited the oncogenecity of E6 and E7 of HPV 16 type, thus can be used as a putative anti-HPV agent for the treatment of cervical carcinomas caused by HPV.
폐츱충(Paragonimus westermani) 감염시 탈낭유충은 숙주내 여러조직을 거친 후 폐에 기생하게 되는데 이때 조직반응과 더불어 혈액내 호산구와 IgE 항체가의 변등이 일어난다. 이 실험에서는 백서에 폐흡충을 감염시키고 혈청내 총 IgE와 특이 IgG 항체값을 시간 경과별로 측정하여 감염후 혈청내 항체가의 변증을 관찰하였다. 폐흡충 퍼낭유충 20개를 백서에 경구 감염시키고 시기별(0,1,2,3,4,0,8주)로 IgE의 변동을 avidin-biotin을 이용하여 효소표식 면역검사법 (enzyme-linked immunosorbent assay: ELISA)으로 측정하였으며 IgG는 통상적인 ELISA 방법을 이용하여 측정하였다. 실험군의 혈청내 총 IgE치는 감염 3주와 3주 후에 흡광도가 각각 0.18±0.042, 0.18±0.081이었으나, 4주에 0.28±0.151로 급격히 중가하었으며 8주까지 지속적인 상승(0,43±0,055)을 보였다. 반면 대조군의 경우 전 실험기간을 통해 0.07∼0.12로 낮은 항체가가 유지되었다. 또한 실험군의 혈청내 IgG 항체는 감염 3주 후에 흡광토 0.20±0,032로 증가하기 시작하여 8주에 0.31±0.067을 보였으나 대조군에 비해 크게 증가되지 않았다. 이상의 결과로 보아 비호적숙주인 백서에서 폐흡충의 감염이 IgE 및 IgG 항체를 증가시킴을 알 수 있었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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