• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제26권3호
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• pp.155-162
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• 1988

Toxoplasmn gondii이 강독주인 RH주와 조직내 cyst 형성주인 Fukaya주의 세포막 단배 성분을 SDS 존재하에 서 전기영동하여 분석하였다. 먼저 RH tachyzoite와 Fukaya의 cyst를 각각 마우스의 복강액과 뇌조직으로부터 분리하였는데, 불연속 Percoll density-gradient서 원심분리하여 tachygoite는 50 U와 605 Percoll용액 경계면에서, cyst는 40%와 50%의 경계면 및 50%와 60 % 경계면에서 얻었으며, cyst는 저장액으로 처리하여 bradyzoite를 얻었다. Lactoperoxidase를 촉매로 세포막에 방사성 요오드를 표지시킨 후 자가방사표지그림을 얻었을 때, bradyzoite 는 15 KDa와 14 KDa의 분자량을 가진 단백질이 주요 단백질로 나타났으며, tachyzoite에서는 30 KDa 단백질이 주요 단백질로 나타났다. 또, 당단백질의 존재를 파악하기 위해서 lectin blotting을 시행하였는데, concanavalin A는 bradyzoite에서 200K∼50KDa의 여러 단백질을, .그리고 tachyzoite에서는 52KDa 단백질을 주로 하는 33K∼20 KDa단백질을 검출하였으며, phytohemagglutinin은 두·유형에서 아무런 단백질도 검출하지 못하였다. 한편, 이들을 효소면역이적법으로 항 Fukfya항체와 항 RH항체로 반응시켰을 때, 많은 교차 반응을 보였으나, bradyzoite에서는 15 KDa 단백질이, 그리고 tachyzoite에서는 52 KDa, 30 KDa 및 25 KDa 단백 짙이 각각 유형 특이 항원 단백으로 나타났다. 위의 결과들로, bradyzoite에서는 15 KDa 단백질이 당단백질은 아니지만 특이 항원성을 갖는 주요 백으로 나타났으며, tachyzoite에서는 지금까지 주요 세포막 단백으로. 알려진 P3O외에 당단백질이며 성을 갖는 세포막 단백으로 SaKDa 단백 (gps2)을 확인할 수 있었다.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제50권3호
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• pp.199-205
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• 2012

Toxoplasmic encephalitis is caused by reactivation of bradyzoites to rapidly dividing tachyzoites of the apicomplexan parasite Toxoplasma gondii in immunocompromised hosts. Diagnosis of this life-threatening disease is problematic, because it is difficult to discriminate between these 2 stages. Toxoplasma PCR assays using gDNA as a template have been unable to discriminate between an increase or decrease in SAG1 and BAG1 expression between the active tachyzoite stage and the latent bradyzoite stage. In the present study, real-time RT-PCR assay was used to detect the expression of bradyzoite (BAG1)- and tachyzoite-specific genes (SAG1) during bradyzoite/tachyzoite stage conversion in mice infected with T. gondii Tehran strain after dexamethasone sodium phosphate (DXM) administration. The conversion reaction was observed in the lungs and brain tissues of experimental mice, indicated by SAG1 expression at day 6 after DXM administration, and continued until day 14. Bradyzoites were also detected in both organs throughout the study; however, it decreased at day 14 significantly. It is suggested that during the reactivation period, bradyzoites not only escape from the cysts and reinvade neighboring cells as tachyzoites, but also converted to new bradyzoites. In summary, the real-time RT-PCR assay provided a reliable, fast, and quantitative way of detecting T. gondii reactivation in an animal model. Thus, this method may be useful for diagnosing stage conversion in clinical specimens of immunocompromised patients (HIV or transplant patients) for early identification of tachyzoite-bradyzoite stage conversion.

• 생명과학회지
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• 제20권10호
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• pp.1556-1562
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• 2010

충남 공주시와 연기군의 목장 4곳에서 Neospora에 자연 감염된 임신우로부터 유산된 태아를 병리조직학적, 전자현미경적으로 관찰하였다. 유산된 태아는 전신 부종과 함께 부검시 복강과 흉강은 혈액성 장액성 액체로 충만되어 있었다. 광학현미경적으로 심장과 간에서는 충 출혈 및 심근세포와 간세포의 괴사를 동반한 대식 세포, 임파구, 단핵구 세포로 구성된 많은 수의 염증세포 침윤이 관찰되었고, 간에서는 간세포의 세포질과 간질 조직에서 tachyzoite 집락이 관찰되었다. 뇌에서는 신경세포내와 주위에서 크기가 다양한 많은 수의 조직낭포가 관찰되었고, 조직낭포는 구형으로 두꺼운 막으로 싸여 있었으며 내부에는 많은 bradyzoite를 포함하고 있었다. 또한, 뇌조직에서는 충 출혈 및 국소성 괴사와 함께 광범위한 신경교증이 관찰되었고 국소성 괴사 부위 주위와 혈관주위에 소교세포로 구성된 많은 수의 염증세포 침윤이 관찰되었다. 전자현미경적으로 조직낭포의 막 두께는 대략 1 ${\mu}m$로 모양은 불규칙하였고, 내부에는 길이 2-5 ${\mu}m$, 폭 1-2 ${\mu}m$인 100여 개의 bradyzoite가 관찰되었다. Bradyzoite의 핵은 posterior tip으로부터 1-1.5 ${\mu}m$ 전방에 존재하였고, amylopectin 과립, 전자밀도가 높고 작은 구형인 과립과 전자밀도가 상대적으로 낮으나 큰 구형의 과립, 전자밀도가 균질한 rhoptry 및 zoite pellicle에 대해 수직방향으로 달리는 microneme이 핵과 posterior tip 사이의 세포질 내에서 관찰되었다. 이상의 본 연구는 ELISA검사를 통해 Neospora 항체에 양성반응을 나타내는 임신우로부터 유산된 태아에서 발견된 조직낭포를 전자현미경적으로 관찰하여 N. caninum임을 확인하였다.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제32권1호
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• pp.19-26
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• 1994

Toxoplasma 약독주(ME49 주)의 배양계 확립을 위하여 뇌내 cyst를 마우스 복강에 주입하고 1, 3, 5 그리고 7일후 다시 얻어 배양기 부착성 세포를 배양하는 방법으로 ME49주를 배양하였으며, ME49주의 성장에 미치는 CAMP 및 DHFR억제제의 영향을 관찰하였다. ME49주로 감염된 대식 세포의 형태학적 관찰은 Giemsa 염색방법을 이용하였고 성장정도는 $[^3H]-uracil$ 표지량을 대조군에 대한 비로 나타내었다. 감염 3일 및 5일이 경과된 후에 채취한 복수의 대식세포에서 ME49 주의 bradyzoite가 주로 판찰되었으며, 배양기에서 3일 이상 경과된 후에는 pseudocyst를 형성하기 시작하였고, 5일 10일이 경과되면서 pseudocyst의 크기가 증가하였다. CAMP를 농도별로 처리하였을 때 3일째와 5일째의 복수를 5일간 및 10일간 배양했을 때 농도의존적으로 성장을 촉진하였다. DHFR 억제제중 pyrimethamine의 경우 농도의존적인 성장억제효과를 나타냈고 methotrexate의 경우엔 ME49 주 bradyzoite의 성장에 영향을 미치지 않는 것으로 나타났다. 이상의 결과로 마우스 대식세포내에서 bradyzoite의 배양이 가능하고 그 배양조건은 3일째와 5일째 복수를 5일 이상 10일 정도 배양하는 것이 적당하며 CAMP 및 pyrimethamine이 bradyBoite의 성장을 각각 촉진 및 억제하는 것으로 나타났다.

• 한국수의병리학회지
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• 제6권2호
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• pp.73-77
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• 2002

고양이를 제외한 포유동물 및 조류는 oocyst 또는 cyst의 섭취로 감염되고 무성생식을 한다. 급성기에는 tachyzoite ($2~3{\times}5~7$\;\mu\textrm{m}$)가 여러 장기에서, 숙주 변역이 활성화된 이후인 만성기에는 100~1,000 개의 bradyzoite를 내장하며 주변에 염증반응이 없는 cyst (직경 $20~50;\mu\textrm{m}$)가 근육 및 뇌에서 관찰된다. Tachyzoite는 태반을 통해 태아 감염을 일으킨다. 고양이는 oocyst 또는 cyst의 섭취로 감염되고, 기타 동물에서 보이는 감염양식 외에 소장에서 coccidiosis양의 증식이 이루어짐으로 oocyst (Isospora 형, $10{\times}12;\mu\textrm{m}$)를 배출한다.

• 대한수의학회지
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• 제28권2호
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• pp.379-385
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• 1988

포유류(哺乳類)의 주요(主要) 기생원충(寄生原蟲)인 Toxoplasma gondii와 Sarcocystis species의 증식형(增殖型)에 대(對)한 표면미세구조(表面微細構造)를 비교(比較)하기 위하여 주사전자현미경(走査電子顯微鏡)으로 관찰(觀察)하였다. 동(同) 시료(試料)는 인공감염(人工感染)된 마우스로부터 분리(分離)된 T gondii와 자연감염(自然感染)된 도축우(屠畜牛)로부터 분리(分離)된 Sarcocystis species의 증식형(增殖型)이었다. 관찰결과(觀察結果) 마우스 복강(腹腔)으로부터 채취(採取)된 T gondii의 증식형(增殖型)인 tachyzoites는 초승달모양(crescent-like feature)을 나타냈고, 계측결과(計測結果) 길이 $5.57{\mu}m$, 폭 $2.33{\mu}m$이었으며 도축우(屠畜牛)의 심근(心筋)에서 채취(採取)된 Sarcocystis species의 증식형(增殖型)인 bradyzoites는 바나나모양으로 길이 $14.18{\mu}m$, 폭 $2.85{\mu}m$이었다. 특(待)히 Sarcocystis species 증식형(增殖型)의 표면관찰(表面觀察)에 있어서 높은 확대배율(擴大倍率)(60,000X)의 관찰계측(觀察計測) 결과(結果), 길이 $0.35{\mu}m$, 폭 $0.18{\mu}m$의 미세공(微細孔)(micropore)이 확인(確認)되었다.

• 한국동물위생학회지
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• 제15권2호
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• pp.109-120
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• 1992

330 Samples of the slaughtered cattle heart muscle were collected from the abattoirs of five regions in Kangwon - do to reveal the frequency of sarcocystis infections during January through December in 1991. The samples were inspected for bradyzoites by the trypsin digestion technique and the possitive samples were fed to dogs and cats for the detection of sporocysts shed in the feces. The results obtained were summarized as follows : 1. The infection rate of bovine Sarcocystis investigated from 330 samples was 43.6%. 2. It revealed that the infection rate of Sarrocystis increased gradully with the advance in the age, 14.5% in below two years, 26.1% in the three years, 30% in four years, 54.7% in five years, 74.4% in six years, 90% in seven years and 100% in older than eight years. 3. The cyst walls detected out from the heart muscles were less than l${\mu}{\textrm}{m}$ in thickness and the size of bradyzoites were $11.8{\times}2.8{\mu}m$ in average. 4. The size of sporocysts shed in the feces of dogs were $15.8{\times}9.8{\mu}m$ in average and the prepatent periods ranged from 12 to 16days. 5. Sarcorystis found in the bovine heart muscles were identified as Sascocystis cruzi ( Hasselman, 1923) , wenyon, 1926.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제52권2호
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• pp.137-142
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• 2014

Serologic tests are widely accepted for diagnosing Toxoplasma gondii but purification and standardization of antigen needs to be improved. Recently, surface tachyzoite and bradyzoite antigens have become more attractive for this purpose. In this study, diagnostic usefulness of 3 recombinant antigens (SAG1, SAG2, and SAG3) were evaluated, and their efficacy was compared with the available commercial ELISA. The recombinant plasmids were transformed to JM109 strain of Escherichia coli, and the recombinants were expressed and purified. Recombinant SAG1, SAG2, and SAG3 antigens were evaluated using different groups of sera in an ELISA system, and the results were compared to those of a commercial IgG and IgM ELISA kit. The sensitivity and specificity of recombinant surface antigens for detection of anti-Toxoplasma IgG in comparison with commercially available ELISA were as follows: SAG1 (93.6% and 92.9%), SAG2 (100.0% and 89.4%), and SAG3 (95.4% and 91.2%), respectively. A high degree of agreement (96.9%) was observed between recombinant SAG2 and commercial ELISA in terms of detecting IgG anti-Toxoplasma antibodies. P22 had the best performance in detecting anti-Toxoplasma IgM in comparison with the other 2 recombinant antigens. Recombinant SAG1, SAG2, and SAG3 could all be used for diagnosis of IgG-specific antibodies against T. gondii.

• 대한수의학회지
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• 제29권3호
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• pp.325-331
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• 1989

Five hundred and forty-eight samples of pig heart muscle were collected from the abattoirs of many regions in Korea to reveal the frequency of Sarcocystis infections and to identify the species from June 1988 to April 1989. Heart muscle of the pigs was inspected for sarcocysts by the direct detection technique and for bradyzoites by the trypsin digestion technique. For examination of development of the parasites in the final host, 5 cross bred mature dogs, 5 puppies and 5 kittens were fed 100g, 50g and 50g of the infected meat respectively, four times in 2 days. Of 402 fattened and 146 older culled breeding pigs, 3 fattened pigs and 39 culled pigs were positive for Sarcocystis. Sarcocystis cysts from heart muscle measured an average of $425{\times}169{\mu}m$ and bradyzoites an average of $15.6{\times}3.5{\mu}m$. Of 15 animals, only 2 puppies were infected with Sarcocystis. The prepatent period was 11 to 12 days and patent period was not examined since the puppies were infected with some another infections and one died on day 11 and another died on day 12 after ingestion of the meat. The sporulated oocysts were detected 11 days after ingestion of the meat and sporocysts 12 days from the puppy feces. The sporulated oocysts measured an average of $16.5{\times}11.5{\mu}m$ and sporocysts an average of $12.6{\times}7.9{\mu}m$. On scraping examination of the intestinal mucosa, fully sporulated oocysts were detected in the tip of the intestinal villi. Considering above all descriptions, Sarcocystis in pig heart muscle in Korea was identified with Sarcocystis suicanis.

• 대한수의학회지
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• 제49권4호
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• pp.291-295
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• 2009

A dead stray cat was necropsied for zoonotic feline disease monitoring. Grossly, there were no specific lesions. Major microscopic lesions included lymphocytic meningoencephalitis, malacia, and tissue cysts in the cerebral and cerebellar cortex. The size and shape of tissue cysts were identical to those of Apicomplexa including Toxoplasma (T.) gondii. Bradyzoites in the tissue cyst were strongly positive for T. gondii by immunohistochemistry. Electron microscopy revealed that bradyzoites within the tissue cyst were similar to the morphological features of T. gondii. Fresh tissue samples were examined by a polymerase chain reaction assay and resulted in a specific band of T. gondii only in the brain. Based on the results, this case was diagnosed as toxoplasmosis. This is the first case of toxoplasmic meningoencephalitis in a cat in Korea.