This experiment was carried out to develop a new technique of identifying XX of XY-bearing bisected embryos prior to implantation by immunological method. H-Y antiserum prepared in inbred Wastar female rats by repeated immunization with spleen cells from males of the same strain. The reactivity of H-Y antibody was confirmed by culturing mouse embryos in the medium containing H-Y antiserum and complement obtained from the guinea pig. The optimal condition for the activity of H-Y antibody was also investigated by culturing embryos under the concentraton or affected H-Y antibody was also investigated by culturing embryos under the concentration or affected H-Y antibody and culture rate. However, production of live young or sex rates of male and female from embryos transferred with psudopregnant. The biological test with the morula stage embryos showed that H-Y antibody was formed in all female rats immunized with spleen cell, but it was formed only in 80% female rats immunized with the antigen. When the bisected mouse embryos were cultured in vitro for 5~6 hours in morula stage, of 457 bisected embryos 81.4% of then were developed to the blastocyst stage. When the concentration rate of complement to H-Y antiserum varied from 1.0~5.0${mu}ell$, the lysis-rate of embryo was 19.5 to 67.3%. The concentration rate of complement did not influence the lysis-rate of embryos(P<0.05). The morphology embryos of bisected, zona-free and intact embryos showed the embryos lysis rate of 58.6, 42.7 and 48.5% respectively(P<0.05). Pregnancy rate were 50.0, 45.5 and 57.1% in psudopregnant recipient transferred with bisected, zona-free and intact blastocyst embryos. However, production of live youngs, sexual rate of male or female was 24(50.0:50.0), 22(45.5:55.5) and 36(58.3:41.7)mice, but affected and non affected half embryos with H-Y antiserum treatment was 23.1 and 26.7%. Also production of live youngs and sexual rate was 14(92.9:7.1) and 17(17.6:82.4)mice in affected and non affected half embryos in H-Y antiserum treatment(P<0.05).
We have reported that water-extracted Korean mistletoe (KM-110) had various biological activities such as antitumor and immunomodulatory activity, and the pectin fraction (KML-C) of the extract was one of major factors related to its biological functions. In this paper, we produced murine monoclonal antibody (mAb) against KML-C. The cAbs obtained were largely classified into two groups according to specificity to KML-C and ML-I, a pectin from European mistletoe. One group mAbs (9H7-D10 and 3C2-lH4) strongly reacted with KML-C, but not ML-I. In contrast, another group cAbs (8Bll-2C5, BE12-3E9 and 5E10-Fl) reacted with both KML-C and ML-1. The subisotypes of these mobs were shown to be IgGl (9H7-lD10, 3C2-lH4 and 8Bll-2C5) or IgM (8E12-3E9 and 5E10-Fl). To develop an assay system for determination of the amount of KML-C, we established the sandwich ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) method using these mAbs and horse radish peroxidase (HRP)-labelled cAbs. In various combinations of the cAbs for coated antibody and detection antibody, the sandwich ELISA quantitatively detected KML-C, showing the detection limit ranging from 7-5,000 ng/ml. Especially reproducibility (C.V) of the sandwich ELISA, in which 8E12-3E9 was used for coating antibody and 8Bll-2C5-HRP for detection antibody, was 4.59-5.83 in intra assay, and 3.9-9.4 in inter assay.
Kim, Hee-Jin;Shin, Chan-Young;Sang Bong lee;Ko, Kwang-Ho
Biomolecules & Therapeutics
/
v.2
no.4
/
pp.303-309
/
1994
The analysis of membrane receptors for hormones and neurotransmitters has progressed considerably by pharmacological and biochemical means and more recently through the use of specific antibodies. Two kinds of antibodies could be produced, one is from synthetic peptides and the other from proteins such as purified receptor. Anti-peptide antibodies gave some advantages; epitope is evident and also receptor purification in quantity is not prerequisite. It can be also applied to the study of receptor structure-activity relationship. The purpose of the present study was 1) to produce and characterize a polyclonal antibody against a synthetic $\beta$2-adrenergic receptor peptide(Phe-Gly-Asn-Phe-Trp-Cys-Phe-Trp-Thr-Ser-Ile-Asp-Val-Leu) and 2) to determine the effects of this antibody on the $\beta$-adrenergic receptor ligand interaction. The peptide sequence contains an amino acid residue such as Asp-113 which was identified as one of important component for receptor-ligand interaction in site-directed mutagenesis studies. Production of antibody was performed by immunization of rabbits through popliteal lymph node with the peptide coupled with Keyhole Limpet Hemocyanin (KLH). The titer of antibody against this peptide was 1 : 1000. The anti-peptide antibody was able to detect a 67 kDa protein band in western blot corresponding to the molecular weight of the $\beta$-adrenergic receptor in partially purified receptor fraction derived from guinea pig lung. The antisera inhibited the specific binding of [$^3$H]dihydroalprenolol to $\beta$-adrenergic receptor in a concentration-dependent manner. The results from this study suggest that the peptide sequence selected in the present study is important for the receptor ligand interaction.
Galectin-3 is known as an animal ${\beta}$-galactoside-binding lectin charicterized with S-type carbohydrate recognition domain. It plays a role in growth, adherence and movement of cells. It is, also, related to the cell transformation and metastasis of tumor cells. In this study, we have expressed and purified recombinant human galectin-3 (rHgalectin-3) using E coli system and asialofetuin affinity chromatography for the future development of monoclonal antibody to Hgalectin-3, which is suggested as the tumor marker for the gastric and thyroid gland cancers. Expressed protein was confirmed as the Hgalectin-3 by immunoblot with cross-reactive murine monoclonal antibody. Lectin activity and specificity of purified protein were, also, confirmed by the competitive inhibition with galectin-3 specific carbohydrate, lactose. Like physiological galectin-3, lectin activity of the molecule was not changed in nonreduced condition. Dimer formation, furthermore, was observed at high concentration of the protein even in the reduced condition, which is well known in physiological galectin-3. These results showed purified rHgalectin-3 has the same activity and molecular nature compared to the physiological galectin-3.
The immunosuppressive activity of the Methanol extract of bark of Madhuca longifolia (Koenig) consisting of a mixture of saponins, flavonoids, tannins, steroids, phenol and glycosides was studied on the immune responses in mice. Methanol extract of Madhuca longifolia (MLL) was administered orally at doses of 50, 100 and 150 mg/kg/day to healthy mice divided into four groups consisting of six animals each. The assessment of immunomodulatory activity was carried out by testing the humoral (antibody titre) and cellular (foot pad swelling) immune responses to the antigenic challenge by sheep RBCs. Furthermore, the effect on hematological parameters as well as relative organ weight was determined. On oral administration MML showed a significant decrease delayed type hypersensitivity (DTH) response whereas the humoral response to sheep RBCs was unaffected. Thus MLL significantly suppressed the cellular immunity by decreasing the footpad thickness response to sheep RBCs in sensitized mice. With a dose of 100 and 150 mg/kg/day the DTH response was $7.66{\pm}2.75$ and $6.41{\pm}1.21$ respectively in comparison to corresponding value of $14.50{\pm}2.38$ for untreated control group. These differences in DTH response were statistically significant (P < 0.05). The study demonstrates that MLL shows preferential suppression of the components of cell-mediated immunity and shows no effect on the humoral immunity.
The carbon tetrachloride($CCl_4$) has been demonstrated to have a hepatotoxic effect in human or many other species. To investigate the enzyme induction of mixed function oxygenases in liver of male Sprague-Dawley rats a single 0.1, 0.5 mι/kg dose of carbon tetrachloride were given. At 24 hr after a single dose of 0.1 mι CC1$_4$/kg weight, methanol extract of Hedera rhombea leaves was administered with 100, 500 mg/kg weight. Assays of 7-ethoxyresorufin-Ο-deethylation(EROD),7-benzyloxyresorufin-Ο-deathylation(BROD),4-nitro-phenol-UDP-glucuronosyltransferase(UDPGT), Western blot and RNA slot blot were used as representatives of the activities of cytochrome P-450 enzymes. The change of the activity of CYP1A1 form measured by EROD assay and Western analysis using 1-7-1 monoclonal antibody was not observed. The activity CYP2B1 form by BROD assay and using 2-66-3 monoclonal antibody was remarkably increased. Elevated level of CYP2B1 mRNA was shown by slot hybridization with 2B1-specific probe. Administration of methanol extract of Hedera rhombea leaves reversed the enzyme activity and the level of mRNA, which suggest the chemoprotective effect of methanol extracts of Hedera rhombea leaves to carbon tetrachloride hepatotoxlcity.
Kim, Te Ha;Kim, Dongbum;Lee, Heesu;Kwak, Min Hyung;Park, Sangkyu;Lee, Younghee;Kwon, Hyung-Joo
BMB Reports
/
v.52
no.11
/
pp.635-640
/
2019
CpG-DNA triggers the proliferation and differentiation of B cells which results in the increased production of antibodies. The presence of bacteria-reactive IgM in normal serum was reported; however, the relevance of CpG-DNA with the production of bacteria-reactive IgM has not been investigated. Here, we proved the function of CpG-DNA for the production of bacteria-reactive IgM. CpG-DNA administration led to increased production of bacteria-reactive IgM both in the peritoneal fluid and serum through TLR9 signaling pathway. When we stimulated B cells with CpG-DNA, production of bacteria-reactive IgM was reproduced in vitro. We established a bacteria-reactive monoclonal IgM antibody using CpG-DNA stimulated-peritoneal B cells. The monoclonal IgM antibody enhanced the phagocytic activity of RAW 264.7 cells against S. aureus MW2 infection. Therefore, we suggest that CpG-DNA enhances the antibacterial activity of the immune system by triggering the production of bacteria-reactive IgM. We also suggest the possible application of the antibodies for the treatment of antibiotics-resistant bacterial infections.
결핵성 병변의 단순 x-ray 촬영이나 CT, MRI 소견은 매우 다양하며, 결핵과 전이암 혹은 원발성 암과 감별이 어려운 경우가 있어 결핵으로 확진하기 위하여서 조직 생검이나 수술 등 침습적인 진단 방법을 이용하여야 하였다. 그러므로 이러한 결핵 병변을 비 침습적인 방법으로 정확히 감별할 수 있는 방법을 연구하던 바, 결핵균에 대한 항체를 동위원소에 부착시켜 신티그래피로 진단할 수 있는지의 가능성을 동물실험을 통하여 알아보고자 하였다. 15마리의 가토에서 M.tuberculosis H37Rv를 슬관절에 주입시켜 결핵병변을 유발시키고, 대조군으로 2마리의 가토의 고환에 T.pallidum을 주입하여 매독병변을 유발시킨 후 M.bovis BCG에 대한 특이항체 (specific polyclonal antibody)와 정상 가토의 immunoglobulin을 I-131에 부착시켜 각각의 가토에 주입하여 preset time 10분간 감마카메라로 주사한 결과 다음과 같은 결과를 얻었다. (1) 8마리의 결핵에 감염된 가토에 M.bovis BCG에 대한 $F(ab')_2$를 1 mCi의 I -131 labeling 시킨후 주사한 결과 모두에서 주사후 2시간 부터 72시간까지 병소가 hot uptake으로 보였으며 주사후 24 시간에 가장 높은 target/background ratio를 보였다. (2) 2마리의 매독에 감염된 가토에서 anti-BCG $F(ab')_2$를 주사한 결과 2시간에서는 병소에 hot activity를 보였으나 24시간부터 급격히 activity가 감소하였다. (3) $F(ab')_2$ 대신에 intact antibody를 결핵에 감염된 가토에 투여한 결과 specific polyclonal antibody나 정상가토의 immunoglobulin 모두 결핵병소에 96시간까지 hot uptake를 보였다. 그러므로 결핵균에 대한 specific antibody fragment를 이용하면 방사면역 신티그램으로 진단이 가능하리라 사료되었고, intact antibody를 사용할 경우 sensitivity는 높으나 specificity는 적을 것으로 사료되었다.
The present study was undertaken to evaluate rosette formation and NK activity of splenic lymphocytes in 3-methylcholanthrene (MCA) treated mice. Mice were sensitized iv with 0.1ml of 1% sheep red blood cell (SRBC) suspension were treated with a single ip injection of olive oil alone or with different doses of MCA in oil at various time before or after sensitization, and were challenged at 4 days after SRBC. Rosette formation and NK activity of splenic lymphocytes were measured at 24 hours after challenge. Erythrocyte(E) rosette formation of splenic lymphocytes was significantly depressed in mouse treated with large dose of MCA (5~50mg) regardless of injecting time. But, there was no difference in the response between the treated with small dose of MCA (0.5mg). Whereas erythrocyte-antibody(EA) rosette or erythrocyte-antibody-complement(EAC) rosette forming cells were significantly depressed by MCA. Under small dose of MCA (0.5mg), any difference of NK activity was not observed in all course of injecting time. But, under large dose of MCA, the activity was markedly inhibited to about half the values seen in control and this suppression was transient, resulting that the normal level was reached again 19 days after MCA. These results, which conform with the predictions of immunosuppression hypothesis, suggest that MCA inhibits immunological responses including NK activity and thereby allows the outgrowth of antigenic neoplastic cells.
With strong biotin binding affinity ($K_D=10^{-14}M$), the tetrameric feature of streptavidin could be used to increase the antigen binding activity of a camel heavy chain (VHH) antibody through their fusion, here stained with biotinylated horseradish peroxidase and subsequent immunoassays ELISA and Western blot analysis. For this application, we cloned the streptavidin gene amplified from the Streptomyces avidinii chromosome by PCR, and this was fused to the gene of the 8B9 VHH antibody which is specific to green fluorescent protein (GFP) antigens. To express a soluble fusion protein in Escherichia coli, we used the pUC119 plasmid-based expression system which uses the lacZ promoter for induction by IPTG, the pelB leader sequence at the N-terminus for secretion into the periplasmic space, and six polyhistidine tags at the C-terminus for purification of the expressed proteins using an $Ni^+$-NTA-agarose column. Although streptavidin is toxic to E. coli because of its strong biotin binding property, this soluble fusion protein was expressed successfully. In SDS-PAGE, the size of the purified fusion protein was 122.4 kDa in its native condition and 30.6 kDa once denatured by boiling, suggesting the tetramerization of the monomeric subunit by non-covalent association through the streptavidin moiety fusing to the 8B9 VHH antibody. In addition, this fusion protein showed biotin binding activity similar to streptavidin as well as GFP antigen binding activity through both ELISA and Western blot analysis. In conclusion, the protein resulting from the fusion of an 8B9 VHH antibody with streptavidin was successfully expressed and purified as a soluble tetramer in E. coli; it showed both biotin and GFP antigen binding activity suggesting the possible production of a tetrameric and bifunctional VHH antibody.
본 웹사이트에 게시된 이메일 주소가 전자우편 수집 프로그램이나
그 밖의 기술적 장치를 이용하여 무단으로 수집되는 것을 거부하며,
이를 위반시 정보통신망법에 의해 형사 처벌됨을 유념하시기 바랍니다.
[게시일 2004년 10월 1일]
이용약관
제 1 장 총칙
제 1 조 (목적)
이 이용약관은 KoreaScience 홈페이지(이하 “당 사이트”)에서 제공하는 인터넷 서비스(이하 '서비스')의 가입조건 및 이용에 관한 제반 사항과 기타 필요한 사항을 구체적으로 규정함을 목적으로 합니다.
제 2 조 (용어의 정의)
① "이용자"라 함은 당 사이트에 접속하여 이 약관에 따라 당 사이트가 제공하는 서비스를 받는 회원 및 비회원을
말합니다.
② "회원"이라 함은 서비스를 이용하기 위하여 당 사이트에 개인정보를 제공하여 아이디(ID)와 비밀번호를 부여
받은 자를 말합니다.
③ "회원 아이디(ID)"라 함은 회원의 식별 및 서비스 이용을 위하여 자신이 선정한 문자 및 숫자의 조합을
말합니다.
④ "비밀번호(패스워드)"라 함은 회원이 자신의 비밀보호를 위하여 선정한 문자 및 숫자의 조합을 말합니다.
제 3 조 (이용약관의 효력 및 변경)
① 이 약관은 당 사이트에 게시하거나 기타의 방법으로 회원에게 공지함으로써 효력이 발생합니다.
② 당 사이트는 이 약관을 개정할 경우에 적용일자 및 개정사유를 명시하여 현행 약관과 함께 당 사이트의
초기화면에 그 적용일자 7일 이전부터 적용일자 전일까지 공지합니다. 다만, 회원에게 불리하게 약관내용을
변경하는 경우에는 최소한 30일 이상의 사전 유예기간을 두고 공지합니다. 이 경우 당 사이트는 개정 전
내용과 개정 후 내용을 명확하게 비교하여 이용자가 알기 쉽도록 표시합니다.
제 4 조(약관 외 준칙)
① 이 약관은 당 사이트가 제공하는 서비스에 관한 이용안내와 함께 적용됩니다.
② 이 약관에 명시되지 아니한 사항은 관계법령의 규정이 적용됩니다.
제 2 장 이용계약의 체결
제 5 조 (이용계약의 성립 등)
① 이용계약은 이용고객이 당 사이트가 정한 약관에 「동의합니다」를 선택하고, 당 사이트가 정한
온라인신청양식을 작성하여 서비스 이용을 신청한 후, 당 사이트가 이를 승낙함으로써 성립합니다.
② 제1항의 승낙은 당 사이트가 제공하는 과학기술정보검색, 맞춤정보, 서지정보 등 다른 서비스의 이용승낙을
포함합니다.
제 6 조 (회원가입)
서비스를 이용하고자 하는 고객은 당 사이트에서 정한 회원가입양식에 개인정보를 기재하여 가입을 하여야 합니다.
제 7 조 (개인정보의 보호 및 사용)
당 사이트는 관계법령이 정하는 바에 따라 회원 등록정보를 포함한 회원의 개인정보를 보호하기 위해 노력합니다. 회원 개인정보의 보호 및 사용에 대해서는 관련법령 및 당 사이트의 개인정보 보호정책이 적용됩니다.
제 8 조 (이용 신청의 승낙과 제한)
① 당 사이트는 제6조의 규정에 의한 이용신청고객에 대하여 서비스 이용을 승낙합니다.
② 당 사이트는 아래사항에 해당하는 경우에 대해서 승낙하지 아니 합니다.
- 이용계약 신청서의 내용을 허위로 기재한 경우
- 기타 규정한 제반사항을 위반하며 신청하는 경우
제 9 조 (회원 ID 부여 및 변경 등)
① 당 사이트는 이용고객에 대하여 약관에 정하는 바에 따라 자신이 선정한 회원 ID를 부여합니다.
② 회원 ID는 원칙적으로 변경이 불가하며 부득이한 사유로 인하여 변경 하고자 하는 경우에는 해당 ID를
해지하고 재가입해야 합니다.
③ 기타 회원 개인정보 관리 및 변경 등에 관한 사항은 서비스별 안내에 정하는 바에 의합니다.
제 3 장 계약 당사자의 의무
제 10 조 (KISTI의 의무)
① 당 사이트는 이용고객이 희망한 서비스 제공 개시일에 특별한 사정이 없는 한 서비스를 이용할 수 있도록
하여야 합니다.
② 당 사이트는 개인정보 보호를 위해 보안시스템을 구축하며 개인정보 보호정책을 공시하고 준수합니다.
③ 당 사이트는 회원으로부터 제기되는 의견이나 불만이 정당하다고 객관적으로 인정될 경우에는 적절한 절차를
거쳐 즉시 처리하여야 합니다. 다만, 즉시 처리가 곤란한 경우는 회원에게 그 사유와 처리일정을 통보하여야
합니다.
제 11 조 (회원의 의무)
① 이용자는 회원가입 신청 또는 회원정보 변경 시 실명으로 모든 사항을 사실에 근거하여 작성하여야 하며,
허위 또는 타인의 정보를 등록할 경우 일체의 권리를 주장할 수 없습니다.
② 당 사이트가 관계법령 및 개인정보 보호정책에 의거하여 그 책임을 지는 경우를 제외하고 회원에게 부여된
ID의 비밀번호 관리소홀, 부정사용에 의하여 발생하는 모든 결과에 대한 책임은 회원에게 있습니다.
③ 회원은 당 사이트 및 제 3자의 지적 재산권을 침해해서는 안 됩니다.
제 4 장 서비스의 이용
제 12 조 (서비스 이용 시간)
① 서비스 이용은 당 사이트의 업무상 또는 기술상 특별한 지장이 없는 한 연중무휴, 1일 24시간 운영을
원칙으로 합니다. 단, 당 사이트는 시스템 정기점검, 증설 및 교체를 위해 당 사이트가 정한 날이나 시간에
서비스를 일시 중단할 수 있으며, 예정되어 있는 작업으로 인한 서비스 일시중단은 당 사이트 홈페이지를
통해 사전에 공지합니다.
② 당 사이트는 서비스를 특정범위로 분할하여 각 범위별로 이용가능시간을 별도로 지정할 수 있습니다. 다만
이 경우 그 내용을 공지합니다.
제 13 조 (홈페이지 저작권)
① NDSL에서 제공하는 모든 저작물의 저작권은 원저작자에게 있으며, KISTI는 복제/배포/전송권을 확보하고
있습니다.
② NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 상업적 및 기타 영리목적으로 복제/배포/전송할 경우 사전에 KISTI의 허락을
받아야 합니다.
③ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 보도, 비평, 교육, 연구 등을 위하여 정당한 범위 안에서 공정한 관행에
합치되게 인용할 수 있습니다.
④ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 무단 복제, 전송, 배포 기타 저작권법에 위반되는 방법으로 이용할 경우
저작권법 제136조에 따라 5년 이하의 징역 또는 5천만 원 이하의 벌금에 처해질 수 있습니다.
제 14 조 (유료서비스)
① 당 사이트 및 협력기관이 정한 유료서비스(원문복사 등)는 별도로 정해진 바에 따르며, 변경사항은 시행 전에
당 사이트 홈페이지를 통하여 회원에게 공지합니다.
② 유료서비스를 이용하려는 회원은 정해진 요금체계에 따라 요금을 납부해야 합니다.
제 5 장 계약 해지 및 이용 제한
제 15 조 (계약 해지)
회원이 이용계약을 해지하고자 하는 때에는 [가입해지] 메뉴를 이용해 직접 해지해야 합니다.
제 16 조 (서비스 이용제한)
① 당 사이트는 회원이 서비스 이용내용에 있어서 본 약관 제 11조 내용을 위반하거나, 다음 각 호에 해당하는
경우 서비스 이용을 제한할 수 있습니다.
- 2년 이상 서비스를 이용한 적이 없는 경우
- 기타 정상적인 서비스 운영에 방해가 될 경우
② 상기 이용제한 규정에 따라 서비스를 이용하는 회원에게 서비스 이용에 대하여 별도 공지 없이 서비스 이용의
일시정지, 이용계약 해지 할 수 있습니다.
제 17 조 (전자우편주소 수집 금지)
회원은 전자우편주소 추출기 등을 이용하여 전자우편주소를 수집 또는 제3자에게 제공할 수 없습니다.
제 6 장 손해배상 및 기타사항
제 18 조 (손해배상)
당 사이트는 무료로 제공되는 서비스와 관련하여 회원에게 어떠한 손해가 발생하더라도 당 사이트가 고의 또는 과실로 인한 손해발생을 제외하고는 이에 대하여 책임을 부담하지 아니합니다.
제 19 조 (관할 법원)
서비스 이용으로 발생한 분쟁에 대해 소송이 제기되는 경우 민사 소송법상의 관할 법원에 제기합니다.
[부 칙]
1. (시행일) 이 약관은 2016년 9월 5일부터 적용되며, 종전 약관은 본 약관으로 대체되며, 개정된 약관의 적용일 이전 가입자도 개정된 약관의 적용을 받습니다.