• 한국미생물·생명공학회지
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• 제44권2호
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• pp.156-162
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• 2016

본 연구에서는 신규 해양성 한천분해균을 분리하고, 이 균주가 생성하는 한천분해효소의 특성을 조사하였다. 경상남도 남해군 미조면 연안에서 채취한 해수를 Marine agar 2216 배지에 도말하여 한천분해세균을 선별하였다. 선택된 한천분해균주는 16S rDNA 염기서열분석을 통해 Maribacter 속 세균과 99% 유사하여 Maribacter sp. SH-1으로 명명하였다. 세포외로 분비되는 agarase는 Maribacter sp. SH-1 균주 배양액에서 획득하였으며, 이를 이용하여 특성을 조사하였다. Maribacter sp. SH-1 균주의 한천분해효소는 20, 30, 40, 50 및 60℃ 에서 각각 56, 62, 94, 100, 8%의 상대활성을 나타냈으며, pH 5, 6, 7 및 8에서 각각 15, 100, 60, 21%의 상대활성을 나타냈다. 세포외 agarase는 50℃ , pH 6인 20 mM Tris-HCl buffer를 사용하는 조건에서 최대활성(231 units/l)을 보였다. 한천이 sol 상태로 존재하는 50℃에서 최적활성을 보여 이 효소는 응용 가능성이 높다고 할 것이다. 효소 활성은 20, 30 및 40℃에서 30분 동안 열처리하였을 때 약 90% 이상의 상대활성을 보였다. TLC 분석 결과, Maribacter sp. SH-1 균주의 한천분해효소는 한천올리고당인 neoagarohexaose (34.8%), neoagarotetraose (52.2%) 및 neoagarobiose (13.0%)를 생성하는 것으로 보아 β-agarase로 확인되었다. 따라서 Maribacter sp. SH-1 균주와이 균주가 생산하는 β-agarase는 보습효과, 미백효과, 세균성장 억제 혹은 전분노화 방지 등의 기능을 가지는 한천올리고당의 생산에 유용할 것으로 기대된다.

• 생명과학회지
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• 제29권2호
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• pp.158-163
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• 2019

이 연구의 목적은 agarase를 생산하는 새로운 해양 박테리아를 분리하는 것이다. Agarase는 agarose를 가수분해하여 다양한 생리활성을 가지는 agarooligosaccharides 또는 neoagarooligosaccharides를 생성할 수 있다. 전라남도의 여수연안에서 채취한 해수로부터 DH-3 균주를 분리하였다. DH-3 균주는 16S rDNA 서열분석을 통하여 Persicobacter sp. DH-3로 명명하였다. 세포 외로 분비된 효소는 Persicobacter sp. DH-3의 배양액으로부터 얻었으며, 특성연구에 사용하였다. 20, 30, 40, 50, 60 및 $70^{\circ}C$에서의 온도별 상대활성은 각각 50, 55, 70, 100, 90 및 50%였다. pH 5, 6, 7 및 8에서의 pH별 상대활성은 각각 75, 100, 90, 75%였다. 본 효소는 20 mM Tris-HCl 완충액에서 pH 6.0 및 $50^{\circ}C$에서 최대활성을 나타내었다. 본 효소는 한천이 액체상태로 존재하는 $50^{\circ}C$에서 최대활성을 나타내었으므로 산업적으로 유용한 효소로 판단된다. 본 효소는 20, 30 및 $40^{\circ}C$에서 2시간 동안 열처리하여도 80% 이상의 잔존활성을 보였다. TLC 분석결과, Persicobacter sp. DH-3 균주의 한천분해효소는 네오한천올리고당인 neoagarohexaose와 neoagarotetraose를 생성하였으므로 ${\beta}$-agarase로 확인되었다. Zymogram 분석결과, Persicobacter sp. DH-3는 적어도 45, 70 및 140 kDa 크기의 3종류 이상의 한천분해효소를 생산하는 것을 확인할 수 있었다. 그러므로, Persicobacter sp. DH-3 유래 agarase는 기능성을 가진 neoagarooligosaccharides의 생산에 활용될 수 있을 것으로 기대된다.

• KSBB Journal
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• 제13권5호
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• pp.524-529
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• 1998

An agarase was partially purified from the culture broth of marine bacterium Bacillus cereus ASK202. Optimal pH and temperature of this agarase were found to be 7.0 and 40$^{\circ}C$, respectively. The maximum productivity of agarooligosaccharides was obtained from 0.3 %(w/v) agar by using of 1 unit agarase. As the results of TLC and HPLC analysis, these oilgosaccharides consisted of neoagarobiose, neoagarotetraose and neoagarohexaose. Under the optimal reaction conditions, 77.5 %(w/v) neoagarobiose and 6.2 %(w/v) neoagarotetraose were produced from agar and the conversion yield of total agarooligosaccharides was 83.7 %(w/v) after for 2 h reaction at 40$^{\circ}C$.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제23권6호
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• pp.665-670
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• 1995

A marine bacterium which produces extracelluar agarase was isolated from sea water. Isolated strain was identified as Pseudomonas sp. by the morphological and biochemical properties (1). HindIII restriction fragment of 3.2 kb from Pseudomonas genomic DNA was cloned into pUC19 to obtain recombinant plasmid pJA1 which enables E. coli JM83 to produce agarase. Most of agarase produced in E. coli was secreted into the culture medium. The enzyme (pJA1) showed the highest agarase activity during the stationary phase (20 hrs) of E. coli. The optimum temperature and pH were 40$\circ$C and 7.8, respectively. Restriction gene map anlaysis revealed that it has different restriction pattern with three kind of agarase gene reported.

• KSBB Journal
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• 제14권3호
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• pp.351-357
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• 1999

A marine bacterium Bacillus cereus ASK202, agarase producing strain, was treated with some mutagenic agents, ultraviolte(UV), 1-methyl-3-nitro-1-nitrosoguanidine(NTG), and ethyl methane sulfonate(EMS), several times for the increasing of the agarase production After mutagen treatment, we isolated one mutant strain treated with NTG showed the highest stability and agarase productivity and named as Bacillus cereus ASK202-N3. This Bacillus cereus ASK202-N3 strain was well grown in the modified marine medium containing 0.5%(w/v) agar, 0.3%(w/v) yeast extract, and 5.0%(w/v) NaCl, and the optimal initial pH, temperature and culture time were 7.8, $25^{\circ}C$ and 32h, respectively. In the optimal culture conditions, the agarase production was increased to 5.3 fold(850units/L) compared to that of the wild type.

• 한국해양바이오학회지
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• 제2권3호
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• pp.142-148
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• 2007

Agar로부터 oligosaccharides를 제조하기 위하여 효소 (agarase)를 이용한 분해법이 시도되면서 agarase의 균주의 분리 및 유전자에 대한 많은 연구가 수행되고 있다. 본 연구에서는 해양으로부터 agarase를 생성하는 균주를 분리 동정하고 균주의 특성을 조사하였다. 분리된 균주는 AS-3균주는 16S rDNA 염기서열분석에 의하여 Algibacter lectus AS-3로 동정되었다. 정제된 효소의 최적 활성 조건 및 agar 분해산물의 항산화활성을 조사하였다. 분리된 균주의 최적배양조건은 marine broth 2216에서 온도 $27^{\circ}C$, pH 7일 때 가장 균주의 생육이 높았다. Agarase 효소는 salt 침전, ion exchange와 gel filtration chromatography에 의해 9.6 units/mg으로 6.9배 정제되었다. 최적 효소활성은 온도 $40{\sim}50^{\circ}C$, pH 7일 때 나타났다. Agar 첨가한 배지에 agar 분해균을 접종한 후 분해산물의 시간에 따른 항산화활성은 12시간 배양 후 62%의 가장 높은 전자소거능 (EDA)을 나타내었다.

• 한국생물공학회:학술대회논문집
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• 한국생물공학회 2005년도 생물공학의 동향(XVII)
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• pp.340-342
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• 2005

한천분해 세균은 제주 연안의 해수로부터 분리되어졌다. 균주는 Gram 음성 간균이며, 절대 호기성 세균이다. 균주는 agarase를 생성하여 한천을 분해하는 것으로 관찰되었다. 균주의 생화학적 특성과 16S rRNA 유전자 염기서열 분석한 결과 Agarivorans속으로 동정 되었다. 그래서 Agarivorans sp. JA1이라 명명하였다. agarase의 최적 생산을 위한 agar농도는 0.5%이며, pH, 온도와 NaCl 농도는 각각 pH 7, $25^{\circ}C$ $^{\sim}$ $30^{\circ}C$와 2%였다. 유기태과 무기태는 각각 yeast extract와 $NaNO_3$를 첨가 할 경우 agarase 생성이 가장 좋은 것으로 사료되었다. Agarase의 최적 생산 활성 측정은 DNS법(3,5-dinitrosalicyclic acid procedure)을 이용하여 환원당 값을 산출하였고, 50000(U/L)이상 나왔다.

• 생명과학회지
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• 제25권11호
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• pp.1273-1279
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• 2015

경상남도 남해군 연안의 해수를 이용하여 신규의 한천분해 해양성세균을 분리하고 한천분해효소의 특징을 분석하였다. Marine agar 2216 배지에서 분리한 SH-1 균주는 16S rRNA 유전자 염기서열분석을 통해 Simiduia 속 세균과 99% 유사하여 Simiduia sp. SH-1으로 명명하였다. Simiduia sp. SH-1 균주가 생성하는 한천분해효소는 성장의존성 산물로 판단되었으며 정체기부터 효소활성이 감소되었다. 한천분해효소는 pH 7.0(20 mM Tris-HCl buffer), 30℃에서 최대활성(698.6 units/l)을 나타내었다. 효소의 활성은 30℃에서 최적이었고 이후 온도가 증가함에 따라 활성이 감소하였으며, 40℃와 50℃에서 각각 약 90%와 75%의 상대활성을 보였으나 내열성은 보이지 않았다. 최적 pH인 pH 7.0에 비해 pH 6.0에서는 오차범위 내에서 조금 낮은 활성을 보였으며 pH 5.0과 pH 8.0에서는 각각 80%와 75% 정도의 상대활성을 보였다. TLC 분석을 통하여 Simiduia sp. SH-1 균주가 생성하는 한천분해효소는 agarose를 분해하여 피부의 미백활성, 전분노화의 방지 및 세균성장의 억제 등의 유용한 효과를 가지는 기능성 한천올리고당인 neoagarotetraose와 neoagarobiose를 최종적으로 생성하는 β-agarase로 확인되었다. 따라서, Simiduia sp. SH-1 균주와 이 균주가 생산하는 β-agarase는 산업적 생산에 유용하게 활용될 수 있을 것으로 기대된다.

• 생명과학회지
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• 제26권2호
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• pp.198-203
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• 2016

본 연구에서는 많은 생리활성 기능을 갖는 한천올리고당과 네오한천올리고당을 생산할 수 있는 agarase를 생성하는 신규 해양성 세균을 분리하고, 이 균주가 생성하는 한천분해효소의 특성을 조사하였다. 한천분해활성을 가진 신규의 SH-2 균주는 경상남도 남해군 연안에서 채취한 해수에서 분리하였으며, 16S rDNA 염기서열분석을 통해 Marinomonas 속 세균과 약 99% 유사하여 Marinomonas sp. SH-2로 명명하였다. Agarase는 Marinomonas sp. SH-2 균주의 배양액으로부터 추출하였으며, 한천분해활성을 측정한 결과, pH 6.0의 20 mM Tris-HCl buffer를 사용할 경우 30℃에서 최고 활성(170.2 units/l)이 나타났다. 하지만, 40℃ 이상의 온도에서 0.5시간 이상 처리할 경우 효소의 잔존활성이 40% 이하로 감소하는 것으로 보아 이 효소는 내열성을 가지지 않는다고 판단되었다. 효소의 가수분해산물을 TLC로 분석한 결과, Marinomonas sp. SH-2으로부터 생성되는 효소는 아가로스를 분해하여 neoagarohexaose와 neoagarotetraose를 생성하여 β-agarase로 확인되었다. 따라서 Marinomonas sp. SH-2와 이 균주의 한천분해효소는 식품, 화장품, 의약품 연구 등에 실용적으로 적용할 수 있을 것이다.

• KSBB Journal
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• 제13권4호
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• pp.378-382
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• 1998

Agar hydorlysates or agarooligosaccharides from agar prepared by Cytophaga agarase showed eight spots on TLC plate and the degree of polymerization of the spots were in the reange of 2.5 - 6.5. Each component of the hydrolysate as tested the several functionalities such as antimicrobial activity, anticavity activity, and anticoagulant activity. The anticativity activity and anticoagulant acitvity were found in all fractions of hydrolysates and several spot on TLC, whereas the anticoagulant activity was very low.