제지폐수의 효율적인 생물학적 처리와 폐수특성에 적합한 미생물제제의 개발을 위하여 토양 및 산업폐수로부터 방향족 화합물에 분해활성이 높은 KN11, KN13 및 KN27 균주와 세포 외 섬유소 가수분해효소 생산 균주 GT21 등의 균주를 분리하였다. 형태학적, 생리학적 및 생화학적 분류를 통해 이들 분리주 KN11, KN13, KN27 및 GT21 등은 Acinetobacter sp., Neisseria sp., Bacillus sp., Pseudomonas sp.와 유사한 것으로 판명되어 최종적으로 각각 Acinetobacter sp. KN11, Neisseria sp. KN13, Bacillus sp. KN27, Pseudomonas sp. GT21로 명명하였다. 제지폐수 중 난분해성 물질과 COD 증가원인 물질을 분석하고자 GC/MS를 이용하여 방향족 화합물 및 그 유도체들을 검출하였다. 분리균주 Acinetobacter sp. KN11, Neisseria sp. KN13, Bacillus sp. KN27 및 Pseudomonas sp. GT21의 균체로 구성된 미생물제제 J30을 제조하여 제지폐수의 효율적 처리를 위한 연구에 사용하였다. 미생물제제 J30의 제지폐수에서 COD 제거를 위한 최적온도와 pH는 각각 $30^{\circ}C$와 7.5였으며 배양 60시간에서 최대의 COD 제거효율을 나타내었다. 실험실 규모의 pilot plant에서 미생물제제 J30의 COD 제거효율은 87%의 높은 제거효율을 나타내었다.
SOON-DUCK HONG;SHIN, WOO-CHANG;DONG-SUN LEE;TAE-HO KIM;JU-HYUNG WOO;JIN-MAN LEE;JONG-GUK KIM
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제5권2호
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pp.80-86
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1995
The bacterial strain WC-17 able to produce chitinase was isolated from soil using an enrichment technique. The isolated strain was identified as Acinetobacter sp. judging by their morphological and physiological characterisitics. The optimal culture conditions for the production of chitinase of Acinetobacter sp. WC -17 are 1.5% colloidal chitin and 1 % tryptone at $30^{\circ}C$ with pH 6.5. Since the enzyme was rapidly produced in a culture supplied with chitin, glucose, or N-acetylglucosamine but not with other polymers and monosaccharide, the enzyme was considered to be an inducible enzyme. Notably N- acetylglucosamine and glucose were found to be effective inducers at low concentrations but repressors at excessive concentrations. The cultural supernatant of Acinetobacter sp. WC-17 inhibited the growth of phytopathogenic fungi such as P.oryzae, R.solani, and F.solani. Among the phytopathogenic fungi tested, P.oryzae was the most sensitive. The conventional agar plate (PDA containing 1 % colloidal chitin) method also produced the same result.
Indole and its derivatives form a class of toxic recalcitrant environmental pollutants, Abacte-rium, strain KL-9 was isolated from soil with indole as a sole source of carbon and nitrogen. KL-9 was identified as Acinetobacter sp. on the basis of 16 S rRNA gene sequence, fatty acid and quinone compositions. This identification was also confirmed by the ability of carbon source utilization and other biochemical tests. The growth of Acinetobacter sp. KL-9 was fastest with 0.3mg/ml of indole as was inhibited by higher than 0.5mg/ml of indole in the medium, KL-9 with indole also produced indigo. The formation of indigo was stimulated inthe presence of glucose, which is not a growth-suppoting carbon source for KL-9. Additional biotransformation evidence showed that anthranilate is an intermediate for the degradation of indole KL-9.
일산화탄소를 유일한 탄소 및 에너지원으로 이용하여 성장한 Acinetobacter sp. 1의 일산화탄소 산화를 전자전달계를 조사하였다. 이 세균은 a, b, c, 그리고 o형의 사이토크롬을 소유하고 있었고, UQ 10은 이 세균의 생리적인 전자수용제로 작용할 수 없음이 밝혀졌다. 이 세균에 존재하는 사이토크롬들 중에서 b와 o는 일산화탄소 산화와 연관되어 있으나 a와 c는 관계가 없었으며, NAD(P)도 이 세균의 일산화탄소 산화와 무관한 것으로 밝혀졌다.
Carbon monoxide dehydrogenase (CO-DH) was found to be present in Acinetobacter sp. strain JC1 grown on CO and also on methylotrophic and heterotrophic substrates, except for pyruvate and nutrient broth. The amounts of CO-DH in cells grown on methylamine, glucose, galactose, and succinate were comparable to that of the CO-grown cells. CO-DH activity, however, was onot deteted by the dye-linked assay method in cell extracts prepared from cells grown on organic substrates, except on ethanol and succinate. THe activity was detected when the CO-DH was stained by activity using CO as a substrate. CO-DHs in cells grown on different substrates were found to be identical in immunological properties.
일산화탄소를 이용하여 자가영양적으로 성장한 Acinetobacter sp. 1 의 세포추출액은 혐 기성 실험조건하에서 thionin, methylene blue, 2,6-dichlorophenol-indophenol둥올 일산화탄소의 산회를 위한 전자수용체로 사용할 수 있었으나 NAD, NADP, FAD, 또는 FMN등은 천자수용체로 이용하지 못하였다. 이 세균에 존재하는 일산화탄소 산화효소는 유도효소로 밝혀졌고, pH 7.5와 $60^{\circ}C$에서 최대의 활성을 나타내었다. 이 효소의 활성화에너지는 6.1kcal/mol (25.5 kJ/mol)이며 일산화탄소에 대한 Km값은 $154{\mu}M$로 밝혀졌다. 그리고 잘 알려진 몇가지 금속 chelat tIng agent와 2가의 양이온들은 이 효소의 활성에 거의 영향을 미치지 않았는데 $Cu^{2+}$ 이온만은 이 효소의 활성을 완전히 억제시켰다. 또한 이 효소는 포도당과 숙신산에 의해 활성이 저해되었으며, hydrogenase의 활성도 나타내었다. 그리고 Acinetobacter sp. 1의 일산화탄소 산화효소는 Pseudomonas carboxydohydrogena의 일산화탄소 산화효소와 연역학적인 연관성이 없는 것으로 나타났다.
철 스트레스($2{\mu}M$ 이하 농도) 하에서 시데로포어를 생산하는 균주를 토양에서 분리하여 16S rDNA 염기 서열 분석과 생화학적, 생리학적 분석 및 전자 현미경 관찰 등으로 동정한 결과, Acinetobacter sp.로 밝혀졌다. 시데로포어의 카테콜 특성은 Arnow법으로 조사되었다. 철을 제한한 배지에서 균주를 배양한 결과, $36^{\circ}C$에서도 잘 자랐지만 시데로포어 생산은 $28^{\circ}C$에서 높았다. $36^{\circ}C$에서는 시데로포어 생산이 강하게 억제되었다. $10{\mu}M\;FeCl_3$를 첨가한 배지에서는 시데로포어 생산이 완전히 억제되었다. 균주 상등액을 부탄올 추출 후, Sephadex LH-20 컬럼 크로마토그래피와 HPLC를 이용하여 시데로포어를 분리, 정제하였다. 분리, 정제된 시데로포어의 구조는 HPLC, TLC와 IR 분석 결과로부터 2,3-dihydroxybenzoic acid로 확인되었다.
This study was initiated to evaluate the inhibitory effect of selected heavy metals on the growth of Acinetobacter sp. Down as one of the phosphorus accumulating microorganisms (PAO) involved in the enhanced biological phosphorus removal (EBPR) process of the wastewater treatment plant. Acinetobacter sp. was initially selected as a starting model microorganism and was grown under aerobic condition for this experiment. The heavy metals selected and investigated in this study were cadmium (Cd), copper (Cu), mercury (Hg), nickel (Ni), and zinc (Zn). Median $(IC_{50})$ and threshold $(IC_{10})$ inhibitory concentrations for Cd, Cu, Hg, Ni, and Zn were 2.95 and 1.45, 4.92 and 2.53, 0.03 and 0.02, 1.12 and 0.43, 14.84 and 5.46 mg $L^{-1}$, respectively. We demonstrated that most of heavy metals tested in the experiment inhibited the growth of Acinetobacter sp. in the range of predetermined concentrations. Based on the data obtained from the experiment, Hg was the most sensitive to Acinetobacter sp., then Ni, Cd, Cu, and Zn in order.
토착 미생물은 친환경적 정화에 중요한 역할을 한다. 원유(crude oil)를 분해하는 80균주를 인천 연안에서 분리하고 oil film collapsing방법을 이용하여 유화능이 있는 12균주를 선별하였다. 이들 균주에 대해 ${\rho}$-nitrophenyl butylrate를 기질로 이용하여 리파아제(lipase)활성과 n-hexanedecane을 기질로 이용하여 유화(emulsification)활성을 측정하여 원유 분해 활성이 좋은 Incheon9를 선별하고 gas chromatography (FID)로 paraffine계 탄화수소를 감소시키는 것을 확인하였다. 이 균주의 16s rRNA유전자 분석을 통해 Acinetobacter sp.로 동정하고 NCBI에 등록하여 accession code (KF548540)를 부여 받았다. Acinetobacter sp. Incheon9의 성장과 유화능이 최적 배양 조건은 $20^{\circ}C$, pH 7, 1% NaCl였으며 대수증식기 기간에 가장 높은 유화능을 보였으며 탄화수소가 짧은 trybutyrin에서 분해능력이 좋았다. 이번 연구결과는 환경오염에 활용 가능한 미생물자원군의 확보를 위한 연구였으며 추후 활용을 위해서는 실제 환경에서 동일한 활성을 가지는지 여부에 대한 연구가 추가로 진행되어야 할 것이다.
본 연구는 근권 토양 및 뿌리에 존재하는 근권 미생물 중 미생물 제제로 적합한 균주를 선별하기 위해서 미네랄 가용화능, 10종의 식물 병원성 곰팡이에 대한 항진균 활성 및 식물 생장 촉진 활성을 평가하였다. 결과적으로 불용성 인산, 탄산칼슘, 규소 및 아연 가용화능과 질소고정능, siderophore, indole-3-acetic acid와 aminocyclopropane-1-carboxylate deaminase 생성능 및 7종의 식물 병원성 곰팡이에 대해 항진균 활성을 갖는 DDP346을 선별하였다. 선별된 DDP346은 Acinetobacter pittii DSM21653 (NR_117621.1)와 99.9% 이상의 높은 상동성을 보였으며, 16S rRNA 염기서열을 바탕으로 계통도를 분석한 결과에서도 Acinetobacter pittii와 높은 유연관계를 나타내었다. DDP346의 생장 조건은 온도(10-40 ℃), pH (5-11) 염농도(0-5%) 범위로 확인하였다. 또한 pH 변화와 가용화된 인산 함량 간에 음의 상관계수(r2= -0.913, p <0.01)를 나타내는 것을 확인하였는데, 이는 배양 중에 생성되는 유기산에 의한 것으로 추정된다. 결과적으로 미네랄 가용화능, 식물 병원성 곰팡이에 대한 항진균 활성 및 식물 생장 촉진 활성 평가를 통해 Acinetobacter sp. DDP346을 다목적 미생물 제제로써 활용 가능성을 제시한다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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