본 연구는 벼의 세균병 중 치명적인 흰잎마름병을 유발하는 Xanthomonas oryzae pv. oryzae를 검출할 수 있는 프라이머를 개발하기 위해 실시하였다. X. o. pv. oryzae str. KACC10331의 hpaA유전자 염기서열로부터 흰잎마름병만을 특이적으로 검출할 수 있는 프라이머를 제작하여 중합효소연쇄반응에 사용하였다. 개발된 특이 프라이머는 X. o. pv. oryzae str. KACC10331과 X. campestris pv. vesicatoria, X. campestris pv. campestris, X. axonopodis pv. citri 그리고 X. axonopodis pv. glycines의 phaA유전자 염기서열의 상동성을 비교하여, 그 중 X. o. pv. oryzae만이 가지는 특이적인 부분을 바탕으로 각각 20-mer인 XOF와 XOR를 제작하였다. 제작된 프라이머를 이용하여 중합효소 연쇄반응을 실시한 결과 반응 후 생성된 단편의 크기는 534-bp였다. 반응 후 생성된 단편은 Southern hybridization을 통하여 Xanthomonas 균주들의 hpaA유전자 존재 여부 및 그 상동성을 비교분석하기 위해 사용하였다. 또한 제작된 프라이머를 이용하여 흰잎마름병에 감염된 벼 잎에서의 검출 여부를 확인하였고 X. o. pv. oryzae의 순수 균주 배양액을 중합효소연쇄반응에 이용하여 검출한계를 검정하였다. 본 연구에서 제작된 프라이머를 사용한 중합효소연쇄 반응 방법은 X. o. pv. oryzae의 검출 뿐만 아니라 흰잎마름병의 발생 예찰에 매우 유용할 것으로 판단 되었다.
Plant-pathogenic bacteria including Xanthomonas spp. carry genetic diversity in composition of avirulence genes for interaction with their host plants. Previously, we reported genetic diversity of avirulence genes in X. axonopodis pv. glycines. In this study, we determined genetic diversity of five avirulence genes, avrBs1, avrBs2, avrBs3, avrBs4, and avrRxv, in three other Xanthomonas species isolated in Korea by genomic southern hybridization. Although Korean races of X. campestris pv. vesicatoria that were isolated from year 1995 to 2002 had the same avirulence gene patterns as those that already reported, there was race shift from race 3 to race 1 by acquisition of avrBs3 genes. X. campestris pv. campestris isolated from Chinese cabbage, but not from cabbage or radish, carried two avrBs3 genes, and one of them affected HR-eliciting ability of this bacterium in broccoli. X. oryzae pv. oryzae carried eight to thirteen avrBs3 gene homologs, and this bacterium showed dynamic changes of resistance patterns in rice probably by losing or obtaining avrBs3 genes. These results indicate that avrBs3 gene is more diverse in Xanthomonas spp. than other four avirulence genes and also host ranges of these bacteria can be easily changed by loss or acquisition of avrBs3 genes.
A semiselective agar medium (XCO) was developed for the isolation of bacterial blight pathogen, Xanthomonas campestris pv. oryzae, from rice seed. The medium contained yeast extract 1.0 g, peptone 2.0 g, sucrose 5.0 g, sodium glutamate 1.0 g, FeSO4.7H2O 0.05 g, Fe.EDTA 1 mg, cephalexin 20 mg, Evan blue (0.1%) 1.5 ml, bromcresol purple (0.1%) 2.5ml, cycloheximide 100 mg and agar 15.0 g per liter. Colonies of X. c. pv. oryzae were 4~5 mm in diameter, smooth, round, blue (darker center) and convex after 6 days incubation at 28$^{\circ}C$. The recovery of 6 isolates of X. c. pv. oryzae on the XOC medium ranged from 81% to 120% (mean 98.2%) in comparison to Wakimoto's medium. The number of saprophytic bacteria from 10 rice seed lots on XCO medium was reduced to 70.4% of that on Wakimoto's medium. The recovery of X. c. pv. oryzae added to rice seed on XOC medium ranged from 67% to 87% (mean 75.6%) of that on Wakimoto's medium.
벼 흰빛잎마름병균주 Q7472와 Q7502의 항혈청을 사용하여 우리나라에서 수집한 벼 흰빛잎마름병균의 혈청형을 한천gel내 확산법에 의해 분류한 결과, 71균주중 65균주가 혈정형 A형, 5균주가 B-I, 1균주가 B-II형에 속하였다. 혈청형A에 속하는 균주는 $0.1-1\%$의 $CaCl_2$용액에서 자기의집이 거의 일어나지 않았으나 혈청형 B-I과 B-II에 속하는 균주는 심한 자기의집이 일어나 혈청형과 자기의집 사이에는 밀접한 관계가 있었다. 흰빛잎마름병균은 혈청학적 방법에 의해 쉽게 검색될 뿐만 아니라 한천gel내 확산법에 의해 벼 세균성줄무늬병균인 X.campestris pv. olyzicola의 부생세균인 E. herbicola와도 쉽게 구별되었다. 흰빛잎마름병균 검출은 병반을 NaCl용액에 넣은 후에 착압하거나 $100^{\circ}C$에서 1시간 열처리 후 착압한 즙액을 한천gel내 확산법에 의해 항혈청과 반응시킴으로써 가능하였으며, 병반이 적을때는 PSA배지에서 배양한 후 사용하면 효과적이었다.
Most major plant pathogenic bacteria in Korea belong to Xanthomonas spp.. Xanthomonas oryzae pv. oryzae is a major pathogen in rice, X. campestris pv. vesicatoria in pepper, X. axonopodis pv. giycines in soybean, X. campestris pv. campestris in cabbage, and X. axonoposid pv. citri in tangerin. Host specificity of the bacterial pathogen depends on the avirulence gene in the pathogen and the corresponding resistance gene in host plants. Many avirulence genes in bacteiral pathogen located on the native plasmids. However, the presence of the native plasmids in Xanthomonas spp. was not investigated well. In order to study the host specificity, we isolated native plasmids from Xanthomonas spp. and compared those plasmids each other, The presence of the native plasmids and the characteristics of the plasmids depended on the bacterial strains. In the X. axonopodis pv. glycines, most strains carried native plasmids but some strains did not. Some strains carry about 60 kb native plasmids including 3 different aviurlence genes. We will discuss the characteristics of the native plasmids isolated from the Xanthomonas spp.
Cyclic AMP receptor-like protein (Clp), is known to be a global transcriptional regulator for the expression of virulence factors in Xanthomonas campestris pv. campestris (Xcc). Sequence analysis showed that Xanthomonas oryzae pv. oryzae (Xoo) contains a gene that is strongly homologous to the Xcc clp. In order to determine the role of the Clp homolog in Xoo, a marker exchange mutant of $clp_{xoo4158}$ was generated. Virulence and virulence factors, such as the production of cellulase, xylanase, and extracellular polysaccharides (EPS) and swarming motility were significantly decreased in the $clp_{xoo4158}$ mutant. Moreover, the mutation caused the strain to be more sensitive to hydrogen peroxide and to over-produce siderophores. Complementation of the mutant restored the mutation-related phenotypes. Expression of $clp_{xoo4158}$, assessed by reverse-transcription realtime PCR and clp promoter activity, was significantly reduced in the rpfB, rpfF, rpfC, and rpfG mutants. These results suggest that the clp homolog, $clp_{xoo4158}$, is involved in the control of virulence and resistance against oxidative stress, and that expression of the gene is controlled by RpfC and RpfG through a diffusible signal factor (DSF) signal in Xanthomonas oryzae pv. oryzae KACC10859.
Kim, Seung-Hwan;Cheng, Jinhua;Yang, Seung Hwan;Suh, Joo-Won;Song, Eun-Sung;Kang, Lin-Woo;Kim, Jeong-Gu
Journal of Applied Biological Chemistry
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제58권3호
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pp.253-258
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2015
Xanthomonas oryzae pv. oryzae (Xoo), X. campestris pv. vesicatoria (Xcv), and Pectobacterium carotovorum pv. carotovorum (Pcc) are the causative agents of bacterial blight in rice, bacterial spot in pepper, and bacterial soft rot in carrot and cabbage, respectively. To isolate novel microbial extracts with antimicrobial activities against these bacteria, approximately 5,300 different Streptomyces extracts were prepared and tested. Microbial cultures from various Streptomyces strains isolated from the Jeju Island, Baekam, Mankyoung river, Jiri mountain etc. in Korea were extracted into three different factions -secreted hydrophobic, secreted hydrophilic, and mycelia- using ethyl acetate, water, and methanol. Initially, 34, 29, and 10 extracts were selected as having antibacterial activities against Xoo, Xcv, and Pcc, respectively. Extracts 1169G4, 1172E9, and 1172E10 had the highest growth inhibition activities against both Xoo and Xcv, and extracts 1151H7 and 1152H7 showed the highest growth inhibition activities against Pcc.
Xanthomonas oryzae pv. oryzae causing bacterial leaf blight disease in rice produces and secretes Hpa1 protein that belongs to harpin protein family. Previously it was reported that Hpa1 induced defense responses when it was produced in tobacco. In this study, we expressed hpa1 gene in rice and Arabidopsis to examine the effects of Hpa1 expression on disease resistance to both fungal and bacterial pathogens. Expression of hpa1 gene in rice enhanced disease resistance to both X. oryzae pv. oryzae and Magnaporthe grisea. Interestingly, individual transgenic rice plants could be divided into four groups, depending on responses to both pathogens. hpa1 expression in Arabidopsis also enhanced disease resistance to both Botrytis cineria and Xanthomonas campestris pv. campestris. To examine genes that are up-regulated in the transgenic rice plants after inoculation with X. oryzae pv. oryzae, known defense-related genes were assessed, and also microarray analysis with the Rice 5 K DNA chip was performed. Interestingly, expression of OsACS1 gene, which was found as the gene that showed the highest induction, was induced earlier and stronger than that in the wild type plant. These results indicate that hpa1 expression in the diverse plant species, including monocot and dicot, can enhance disease resistance to both fungal and bacterial plant pathogens.
백엽고병에 대한 저항성품종으로 알려진 밀양 30호의 이병화원인을 구명하기 위하여 수원, 밀양, 해남산에 대한 최고분얼기, 출수기엽과 기본식물에 대한 각균군의 균주별 저항성 관계를 조사한 결과 가. $1979\~'81$년 전국에서 이병된 밀양 30호의 침해균군 비친화성으로 밝혀진 I, II균군의 균주가 다수분리되었다. 나. 산지 및 생육시기별 저항성 정도의 차는 인정할 수 없었으나 II 균군의 특수균주(병원성 분화형)에 대해 침해받았음이 원인이었다. 다. 밀양 30호의 기본식물에서도 동일 균군 균주에 의해 반응이 일치되므로 품종보다 균주의 병원성 분화에 따른 이병화임을 알 수 있었다.
1980년부터 1984년까지 호남지역에서 분리한 719균주를 새로운 판별방법에 의해 균형을 분류한 결과 $K_1$형이 466균주($64.8\%$), $K_2$형이 116균주($16.1\%$), $K_3$형이 130균주($18.1\%$), $K_4$형이 7균주($1.0\%$)였으나, $K_5$형은 전혀 분리되지 않았다. $K_1,\;K_2$형과 $K_3$형은 대부분의 지역에서 분포되었으며 $K_4$형은 남서해안지역인 해남, 광양, 강진, 완도, 익산, 부안에서 분리되었다. 이병성 품종인 밀양23호, 낙동벼 등에서는 모든 균형이 분리되었으나 대부분이 $K_1$형이었고, $K_3$형이나 $K_4$형은 저항성 품종인 풍산벼, 백양벼, 삼강벼, 밀양 30호 등에서 분리비율이 높았다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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