본 실험에서는 애기달맞이꽃(Oenothera laciniata Hill)를 80% EtOH로 추출하고 추출물을 극성에 따른 용매 분획을 실시하여 분리된 분획의 총 페놀화합물 함량과 DPPH radical 소거, xanthine oxidase 저해활성, superoxide 소거활성 및 nitric oxide 소거활성 및 세포독성 등의 생리 활성을 측정하였다. 본 연구를 통해 애기달맞이꽃은 산소 유리기의 자유기를 소거할 수 있는 우수한 생리 활성물질을 다수 함유하고 있음을 확인 할 수 있었으며 분획 레벨에서의 활성이 대조구 성분 못지않게 우수하게 나타났다. 또한 총 폴리페놀 함량과 세포독성이 가장 높게 나타난 EtOAc 분획물을 농도별로 HL-60세포에 처리한 결과, 세포성장 억제는 농도 의존적으로 나타났으며, 따라서 세포성장 억제효과가 apoptosis 유도에 의한 것이지를 확인하고자, apoptosis 유도에 의하여 나타나는 현상의 하나인 DNA 단편화 현상을 비롯하여 세포 형태학적 변화 및 유동세포분석기를 통한 DNA content을 측정하였다. 그 결과, 애기달맞이꽃 추출물에 의한 세포증식 억제효과는 apoptosis유도에 의해 세포사멸이 일어남을 확인할 수 있었다.
쑥갓의 항산화 활성을 알아보기 위해 쑥갓 총 메탄올추출물의 아질산염 소거작용과 SOD 유사활성을 측정하였다. 아질산염 소거작용과 SOD 유사활성을 가지고 있는 총 메탄올 추출물로부터 클로로포름, n-부탄올 및 물 분획물을 제조하여 각각의 활성을 측정하였다. pH가 1.5일 때의 클로로포름 분획물의 $IC_{50}$값은 39ppm으로 가장 우수한 아질산염 소거작용을 보였으며, vitamin C와 chlorogenic acid의 $IC_{50}$값이 15ppm과 36ppm일 때 클로로포름 분획물은 양성대조군인 chlorogenic acid와 동등한 소거작용을 보였다. 아질산염 소거작용에 대하여 유의성 있게 높은 활성을 나타낸 클로로포름 분획물을 silica gel 컬럼크로마토그래피와 sephadex LH-20 컬럼크로마토그래피를 이용하여 분획의 활성성분인 compound I을 분리하였다. 분리된 compound를 $^{1}H-NMR$과 $^{13}C-NMR$ spectral data를 통하여 구조를 동정한 결과 compound I은 ${\beta}-sitosterol-O-{\beta}-D-glucoside$임을 확인하였다. Compound I과 그 aglycone인 ${\beta}-sitosterol$의 아질산염 소거작용과 SOD 유사활성은 다소 차이가 있었다. 양성대조군으로 사용한 vitamin C와 chlorogenic acid의 $IC_{50}$값이 pH 1.5에서 각각 15ppm과 36ppm일때 compound I의 $IC_{50}$값이 335ppm, ${\beta}-sitosterol$의 $IC_{50}$값이 41ppm으로 가수분해된 aglycone이 아질산염 소거작용이 훨씬 높았다. SOD 유사활성의 경우 vitamin C와 chlorogenic acid의 $EC_{50}$ 값은 38ppm, 449ppm으로 이와 비교시 ${\beta}-sitosterol$과 배당체의 $EC_{50}$ 값은 1,291ppm과 2,000ppm 이상으로 나타났다.
Jiaweicitaowan (JWCTW) has been used to inhibit recurrence and metastasis of cancer in clinical practice. Further study has shown its anti-metastatic and anti-angiogenic effects. By applying in vitro and in vivo anti-angiogenic evaluation model, the author assayed the each ingredients of JWCTW. The author performed the following experiments and the results are listed as below: Cell viability assay showed that the viability was almost identical between that of the control and that of the ingredients extract 40 ${\mu}g/m{\ell}$ treated, except of hexane fraction of Curcumae Radix (40 ${\mu}g/m{\ell}$, 2.0% of control), ethylacetate fraction (40 ${\mu}g/m{\ell}$, 26.7%), butanol fraction (20 ${\mu}g/m{\ell}$, 87.2%; 40 ${\mu}g/m{\ell}$, 12.5%) of Cremastrae appendiculatae Tuber, water fraction of Persicae Semen (40 ${\mu}g/m{\ell}$, 82.7%), ethylacetate fraction of Hippocampus (40 ${\mu}g/m{\ell}$, 85.3%). The results of gelatin zymogram assay showed that the ingredients of JWCTW decreases the gelatinolytic activity of MMP-9 from ECV304, at the concentration of 10 ${\mu}g/m{\ell}$. In in vitro invasion assay, the ingredients of JWCTW effectively inhibited the invasion of cancer cells as compared with the control (+PMA) groups. In capillary-like tube formation assay, the hexane and ethylacetate fractions of Curcumae Radix, Cremastrae appendiculatae Tuber and Persicae Semen showed the dramatic inhibition effects on tube formation of ECV304 at the concentration of 40 ${\mu}g/m{\ell}$. In ex vivo rat aortic ring assay, the hexane and ethylacetate fractions of Curcumae Radix, Cremastrae appendiculatae Tuber and Persicae Semen showed the inhibition effects on angiogenesis of rat aorta at the concentration of 40 ${\mu}g/m{\ell}$. According to the above research, the anti-angiogenic effects of the ingredients of JWCTW was proved and it suggested that the more effective prescription for anti angiogenesis could be developed.
노루궁뎅이 버섯 균사체를 인진쑥 배지에 배양시킨 배양물(HEAC)을 여러 농도의 에탄올-물의 용액으로 추출하고, 쥐에서 위염 유발시약(0.15 M 염산-에탄올 용액)에 의한 위점막 손상에 대하여 추출물들의 위염 억제효과실험을 실시하였다. 그 중 80% 에탄올 추출물은 위염에 대하여 67.7%로 우수한 억제효과를 나타내었다. 용매별 분획으로 HEAC의 80%에탄올 추출물을 노르말 헥산, 염화메틸렌, 초산에틸, 노르말 부탄올과 증류수를 이용하여 5가지 분획으로 분리하였다. 그 결과, 노르말 헥산과 염화메틸렌 분획들이 위염에 대하여 우수한 억제효과를 나타내었다. 이에 따라 염화메틸렌 추출물에 대하여 GC/MS, HPLC, IR and NMR($^1H$, $^{13}C$)을 이용하여 생리활성 주성분의 구조를 확인한 결과 ethyl linoleate임을 확인하였다. 또한, HEAC의 80% 에탄올 추출물과 ethyl linoleate의 $ED_{50}$값이 각각 22.6과 6.4 mg/kg을 나타내어 대조약제인 stillen (44.2 mg/kg)과 selbex (46.5 mg/kg) 보다 우수한 억제효과가 있음을 확인하였다. 그러므로, HEAC의 80% 에탄올 추출물과 ethyl linoleate는 염산-에탄올에 의하여 유발된 위염에 대하여 우수한 억제효과를 가지고 있으며, 새로운 위염, 위궤양 치료제로 개발될 수 있을 것으로 기대된다.
Wang, Hua-Qian;Li, Dong-Li;Lu, Yu-Jing;Cui, Xiao-Xing;Zhou, Xiao-Fen;Lin, Wei-Ping;Conney, Allan H.;Zhang, Kun;Du, Zhi-Yun;Zheng, Xi
Asian Pacific Journal of Cancer Prevention
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제15권21호
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pp.9341-9346
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2014
Acanthopanax trifoliatus (L) Merr (AT) is commonly used as an herbal medicine and edible plant in some areas of China and other Asian countries. AT is thought to have anticancer effects, but potential mechanisms remain unknown. To assess the anticancer properties of AT, we exposed prostate cancer cells to AT extracts and assessed cell proliferation and signaling pathways. An ethanol extract of AT was suspended in water followed by sequential extraction with petroleum ether, ethyl acetate and n-butanol. PC-3 cells were treated with different concentrations of each extract and cell viability was determined by the MTT and trypan blue exclusion assays. The ethyl acetate extract of the ethanol extract had a stronger inhibitory effect on growth and a stronger stimulatory effect on apoptosis than any of the other extracts. Mechanistic studies demonstrated that the ethyl acetate extract suppressed the transcriptional activity of NF-${\kappa}B$, increased the level of caspase-3, and decreased the levels of phospho-Erk1/2 and phospho-Akt. This is the first report on the anticancer activity of AT in cultured human prostate cancer cells. The results suggest that AT can provide a plant-based medicine for the treatment or prevention of prostate cancer.
수삼으로부터 용매추출, 용매분획 및 silica gel column chromatography를 반복하여 ginsenoside $Rg_1$을 분리하였다. Ginsenoside $Rg_1$의 결정특성, 녹는점, 비선광도, IR 데이터, FAB/MS 데이터, TLC에서의 Rf 값, HPLC에서의 r.t. 및 NMR 데이터를 표준화한 조건으로 측정하여 문헌 값과 비교 고찰하였다. 특히 ginsenoside $Rg_1$의 $^{1}H-$ 및 $^{13}C$-NMR 데이터를 HSQC 및 HMBC와 같은 2D-NMR 실험을 통하여 정확하게 동정하였다.
In the present study, vasorelaxant effect of the extract of seeds of Oenothera odorata (SOO) and its possible mechanism responsible for this effect were examined in vascular tissues isolated from rats. Changes in vascular tension, 3',5'-cyclic monophosphate (cGMP) levels were measured in thoracic aorta rings from rats. Methanol extract of seeds of Oenothera odorata relaxed endothelium-intact thoracic aorta in a dose-dependent manner. A dose-dependent vascular relaxation was also revealed by treatment of ethylacetate, n-butanol, and H2O (aqua extract of seeds of Oenothera odorata , ASOO) extracts partitioned from methanol, but not by hexane extract. However, the vascular relaxation induced by ASOO were abolished by removal of endothelium of aortic tissues. Pretreatment of the endothelium-intact vascular tissues with NG-nitro-L-arginine methyl ester (L-NAME) or 1H-[1,2,4]-oxadiazole-[4,3-α]-quinoxalin-1- one (ODQ) significantly inhibited vascular relaxation induced by ASOO. Moreover, incubation of endothelium-intact aortic rings with ASOO increased the production of cGMP. However, ASOO-induced increases in cGMP production were blocked by pretreatment with L-NAME or ODQ. The vasorelaxant effect of ASOO was attenuated by tetraethylammonium (TEA), 4-aminopyridine, and glibenclamide attenuated. On the other hand, the ASOO-induced vasorelaxation was not blocked by verapamil, and diltiazem. Taken together, the present study demonstrates that ASOO dilate vascular smooth muscle via endothelium-dependent NO-cGMP signaling pathway, which may be closely related with the function of K+ channels.
본 연구에서는 전복을 동결 건조시킨 후 전복의 지방산을 비교 분석하였고 세포독성 활성 및 세포 내 활성산소종 생성 억제 효과를 측정하여 전복의 생리활성을 알아보고자 하였다. 지방산 조성 변화를 살펴보면 포화지방산들 내에서는 16:0의 함량이 건조 전복에서 높았고 불포화지방산들 내에서는 건조 전복의 경우 낮은 함량의 20:4n-6와 높은 함량의 22:6n-3를 나타내었다. 전복 A+M 추출물을 0.05 및 0.1 mg/ml 첨가농도로 HT-29 암세포에 처리했을 때 24%의 세포독성 효과를 나타내었다(p<0.05). MeOH 추출물의 경우 A+M 추출물과 비교했을 때 세포독성 효과가 낮았다. 건조 전복의 각 분획물을 농도별로 처리하였을 때, 농도의존적으로 세포독성 활성을 나타내었고, 특히 85% aq. MeOH 분획물에 의한 세포독성 활성이 가장 높았다(p<0.05). 세포 내 활성산소종 생성 억제효과에서 낮은 농도에서는 MeOH 추출물보다는 A+M 추출물에 의한 저해효과가 높았으며 분획물들 간 큰 차이는 없으나 85% aq. MeOH 분획물에 의한 생성 억제효과가 다소 높아 36%의 활성산소종 억제효과를 나타내었다.
포스포리파제 D(PLD)는 알코올 존재 하에서 포스파티딜 전달반응이 일어나며 동시에 PLD의 전체 반응속도도 증가하는 것으로 알려져 있다. 이 포스파티딜 전달반응을 자세히 구명하기위해 본 실험에서는 양배추에서 정제한 ${\alpha}$-type PLD를 가지고 여러 종류의 알코올 존재 하에서 포스파티딜 전달반응의 반응속도를 검토하였다. 실험 결과 검토한 1차 알코올들에 의해 PLD의 포스파티딜 전달반응 속도는 기대했던 대로 크게 증가하였다. 부탄올의 경우 2차 반응속도는 $33.33{\pm}1.33M^{-1}sec^{-1}$로 얻어졌으며, 이 전달반응 속도를 물의 농도를 고려한 가수분해 속도($0.078M^{-1}sec^{-1}$)와 비교하면 무려 400배 이상의 격차를 보여주었다. 알코올의 $pK_a$과 포스파티딜 전달반응 속도와의 자유에너지 선형 관계로부터 브뢴스테드 ${\beta}_{nu}$ 값 $0.12{\pm}0.03$을 얻었다. 비교적 적은 ${\beta}_{nu}$ 값으로 미루어보아 끊어지는 포스파티딜-효소 중간체(E-P)의 전이상태는 상당히 해리된 상태일 것으로 추정된다. 이들 결과와 양배추 PLD의 활성부위의 히스티딘 잔기를 참작하여 양배추 PLD의 반응메커니즘을 제안하였다.
다양한 기능성을 갖는 산수유를 대상으로 새로운 식품개발 및 천연 보존료 개발의 일환으로 물, 에탄올, 에칠아세테이트로 추출한 항균활성 물질을 몇종의 병원균과 식중독균 식품과 관련이 있는 세균, 젖산균 및 효모 등 10개 균주에 대하여 항균활성 검색을 하였으며, 항균력 이 강한 산수유 에탄올 추출물을 용매 계통분획하여 각 분획별 항균활성을 조사하였다. 또한 에탄을 추출물의 최소저해농도, 추출물에 함유된 항균성물질의 열안정성 pH등을 조사하였다. 산수유 과육과 씨 추출물의 항균활성은 에탄을 추출물과 물 추출물이 10균주중 세균에 대하여 항균활성이 강하였으나, 젖산균 및 효모에 대해서는 항균활성이 나타나지 않았다. 산수유의 에탄올 추출물을 핵산, 디에칠에테르, 에칠아세테이트 및 물로 용매계통분획하여 얻은 각 분획물의 항균활성은 에칠아세테이트와 물층에서 강한 항균활성을 보였고 균주별로 일반세균은 항균활성이 나타났으며, 효모와 젖산균에서는 항균활성이 나타나지 않았다. 산수유 과육과 씨의 에탄올 추출물의 최소저해농도는 세균이 0.25 mg/mL이었고, 효모와 젖산균 이 2 mg/mL이었다. 산수유의 과육 에탄을 추출물 농도의 영향은 B. subtilis는 0.25 mg/mL 이하의 농도에서는 균 증식이 증가되었으나 0.5 mg/mL 농도에서는 억제되었다. E. coli는 0.25 mg/mL이하의 농도에서는 배양 16시간까지 균 증식이 억제되다가 그 이후 서서히 증가되었다 산수유의 에탄을 추출물에 함유되어 있는 항균활성 물질은 121$^{\circ}C$에서 15분간 가열한 후에도 그 활성이 유지된 것으로 보아 열에 안정하였으며, pH의 변화에도 항균활성의 변화가 거의 없는 것으로 나타났다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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