Mistletoe (Viscum album) is a common name for many species of semi-parasitic plants which grow on deciduous trees all over the world. In this study, the immunomodulatory activity of the water-extract of Korean mistletoe fruits (KMFWE), was investigated on murine peritoneal macrophages. The culture supernatants of KMF-WE-stimulated murine peritoneal macrophages showed the increased production of IFN-$\gamma$, IL-$1{\beta}$ and TNF-$\alpha$, in a dose-dependent manner. KMF-WE also induced chemokine production from murine peritoneal macrophages such as RANTES, MCP-1, MIP-$1{\alpha}$ and MIP-$1{\beta}$, as well as nitric oxide (NO) production, in a dose-dependent manner. The gel filtration fraction revealed F-1, which is the early-eluted and high molecular weight product, is the major fraction of KMF-WE to activate the murine peritoneal macrophage to induce cytokines, chemokines and NO. The nature of F-1 fraction needs to be examined in detail in further studies to define the regulatory mechanisms of cytokine or chemokine induction by KMF-WE on macrophages. These results suggest that KMF-WE possess a potent immunostimulant activity and can be a promising candidate available for development of immunomodulators.
To evaluate the immunomodulatory activity of a water extract (KMF-WE) of Korean mistletoe (Viscum album var. coloratum) fruit, we examined its ability to induce humoral and cellular immune response against keyhole limpet hemocyanine (KLH). Immunized mice with KLH admixed with KMF-WE (KLH/KMF-WE) showed significant induction of KLH-specific antibodies compared to mice immunized with KLH alone. The assay for determining isotypes of antibodies revealed that KMFWE augmented KLH-specific-IgG1 and -IgG2a production. In vitro T lymphocyte proliferation analysis against KLH revealed that the splenocytes of mice immunized with KLH/KMF-WE showed a significantly higher proliferative ability than those from mice immunized with KLH alone. The culture supernatants of splenocytes, which were harvested from mice immunized with KLH/KMF-WE, showed higher levels of both Th-1 type (IL-2, IFN-${\gamma}$) and Th-2 type (IL-4) cytokines in response to KLH stimulation compared to those from mice immunized with KLH alone. Also, in delayed-type hypersensitivity (DTH) assay, mice immunized with KLH/KMF-WE showed a significantly higher reaction to KLH than mice treated with KLH alone. These results suggest that KMF-WE possess immunoadjuvant activity to enhance both antigen-specific humoral and cellular immune responses against protein antigens (KLH).
Korean mistletoe lectin (KML) is the major component found in Viscum album var. (coloratum), displaying anti-cancer and immunostimulating activities. Even though it has been shown to boost host immune defense mechanisms, the regulatory roles of KML on the functional activation of macrophages have not been fully elucidated. In this study, regulatory mechanism of KML on macrophage-mediated immune responses was examined in terms of KML-mediated signaling event. KML clearly induced mRNA expression of tumor necrosis factor (TNF)-$\alpha$, the generation of reactive oxygen species (ROS) and phagocytic uptake in RAW264.7 cells. All of these events were strongly suppressed by U0126, whereas TNF-$\alpha$ mRNA was not diminished by SB203580 and SP600125, indicating ERK as a central enzyme managing KML-induced up-regulation of macrophage functions. Indeed, KML strongly induced the phosphorylation of ERK in a time-dependent manner without altering its total level. Therefore, these data suggest that ERK may be a major signaling enzyme with regulatory property toward various KML-mediated macrophage responses.
Research has found that the management of the host plant is essential to mistletoe cultivation. A Trunk injection test on the host plant that contained a mixture of indole-3-butryc acid (IBA) and liquid fertilizer was conducted with respect to the improvement of the one year survival rate of mistletoe. As a result, the trunk injection experiments showed the effect of the IBA and liquid fertilizer mixture in all treatments. This mixture was effective to increase the survival rate of mistletoe by 20% with the IBA at 100 mg/L and Hyponex at 100 mg/L. The examination proved that the host plant fertilizer effect was the most effective treatment for organic fertilizer with 60% added NPK (4-2-1). Its effects were higher compared to the control at the length and diameter of one-years-old branches in the host plant, even when the parasitic mistletoe improved its growth in length, diameter, and number of branches. Comparing the control and host plant fertilizer, the latter was the most effective way to process 20 kg per a treatment effect in the experimental site and to process at any time after the inoculation. This treatment is effective to improve the growth of mistletoe by watering the host plant three times per week. Therefore, the management of the host plant is an essential element in the successful cultivation of mistletoe, not only to supply fertilizer and plant hormones to the host plant in the initial inoculation time but also to provide organic fertilizer and irrigation for the host plant.
겨우살이의 캘러스 형성 및 종자 발아 와 haustorium 발달에 요구되는 환경요인 및 생장조절제의 영향을 조사하였다. 아울러 종자의 인위부착을 통한 식물체 재생 체계를 확립하였다. 겨우살이 조직관찰 결과 종자에는 1개 또는 2개의 막대모양의 접합자배가 존재하며 종자의 외부에 위치한 유근 부위에 주로 세포분열이 왕성한 세포층이 존재하며 반대로 자엽은 종자 내부에 위치하며 상대적으로 분열능을 가진 세포수가 감소하였다. 겨우살이 종자 발아 와 haustorium 발달에 요구되는 여러 요인 중에서 광의 요구도가 절대적이었다. 본 실험에 조사된 다른 배양 환경요인 및 생장조절제들은 광의 효과를 대체하지 못하였으며 ethylene의 경우 발아촉진 효과가 3배 이상 증가함을 알 수 있었다. 여러 조직 중에서 오로지 겨우살이 화아로부터 캘러스 형성이 가능하였으며 캘러스 형성빈도는 $0.1\;mgl^{-1}$ IAA가 첨가된 B5 배지에 배양 시 27.3%로 가장 높았다. 본 연구에서 확립된 겨우살이 캘러스 배양 및 종자 인위 부착을 통한 식물체 재생체계는 겨우살이의 유용물질 생산 연구 및 대량증식 연구분야에 활용이 가능할 것으로 기대된다.
The present study was undertaken to investigate the effects of mistletoe (Viscum album var. coloratum) growing on Carpinus laxiflora BL. on proliferation and differentiation of HL-60 acute promyelocytic leukemia cells. Aqueous extract and its $(NH_2)_2SO_4$ saturated fractions of the mistletoe exhibited potent anti-proliferation activity against HL-60 cells. Moreover, when HL-60 cells were treated with 0~30% and 30~70% $(NH_2)_2SO_4$ saturated fractions of the mistletoe, HL-60 expressed CD 66b or CD 14 cell surface antigens and showed activity to reduce nitroblue tetrazolium, indicating that mistletoe induces the differentiation of HL-60 into granulocytes or monocytes. To understand how mistletoe induces the differentiation, we investigated the expression of molecules for modulating the proliferation and differentiation of leukemia cells, such as c-Myc and myeloblastin. The 0~30% $(NH_2)_2SO_4$ saturated fraction of the mistletoe reduced the mRNA levels of c-Myc and myeloblastin in a time-dependent manner. The results indicate that the mistletoe induces the differentiation of HL-60 cells via the decrease of c-Myc and myeloblastin expressions. Thus, it is suggested that mistletoe has a therapeutic potential for the treatment of acute promyelocytic leukemia.
겨우살이 기생위치는 숙주목(상수리나무 등)의 종류에 관계없이 대부분 지면에서 5-10m높이의 일사량이 많은 상단부에 기생하였다. 줄기의 분화는 주경에서 2개씩 연속분지를 형성하였고, 잎은 정단줄기의 상단부에 2매씩 대생하였으며, 종실은 연황색의 7-8mm 크기의 장과였다. 겨우살이 화아분화는 초기 둥근 돔형의 화아정단이 형성되고 엽원기가 1, 2매 차례로 분화한 다음 심장형으로 발달하며 악편이 발생하였는데, 중앙부에서 먼저 진행되었고 이어 양측 면에 2개를 형성하였다. 잎은 이면의 표피 2-3층 아래에 기공과 공변세포가 관찰되었고, 겨우살이는 기주목의 흡착부에서 기주조직의 코르크층을 통과하여 목질부에 뿌리를 내리고 여러 갈래로 분지하여 생장하는 것을 확인하였다.
The aim of this research was to investigate the chemical components of C30 compounds, especially triterpenoids in Korean native mistletoes of Korthalsella japonicus Engler parasiting to Camellia japonica L., Viscum album var. coloratum (Kom.) Ohmi, to Quercus acutissima Carruth. and Loran-thus yadoriko Sieb. to Neolitsea sericea (BI.) Koidz. For the identification of triterpenoidal components, alkaline hydrolyzates of mistletoes meals were analyzed by TLC, GC, and GC/MS. The content of oleanolic acid and ursolic acid derivatives were highest in K. japonica. In V. album, there was no big difference between leaves and twigs in content. but oleanolic acid in leaves. and olean-12-en-$3{\beta}$-ol and lup-20(29)-en-3-one in twigs were prominent. Similiar to V. album in L. yadoriki there was no difference between leaves and twigs in content, and both olean-12-en-$3{\beta}$-ol, lup-20(29)-en-3-one and urs-12-en-$3{\beta}$-ol in leaves, lup-20(29)-en-3-one in twigs were abundant. Triterpenoids as olea-12-en-$3{\beta}$-ol, lupe-20(29)-en-3-one, 3-oxo-urs-12-en-24-oic acid, and $21{\beta}$-A'-neogam-macer-22(29)-en-3-ol acetate were common in all samples tested. whereas ursolic acid only in P. japonicus and ursenol in L. yadoriki were detected. And P. japonicus had the largest number of triterpenoids and showed the highest in biological activity. So it is noted that Korean mistletoes tested in the study had three types of triterpenoid, oleanane, lupane, and ursane, irrespective of hosts, sampling positions and species.
수요증가가 예상되는 겨우살이의 인공번식을 위한 기초자료로 활용하고자 겨우살이의 분포지역의 기주수종과 서식지 환경을 조사하여 분석하였다. 겨우살이의 자생지는 전국에 분포하고 있었으며, 기주식물로는 졸참나무와 같은 참나무류가 대부분이였고 밤나무, 벚나무, 오리나무, 돌배나무 등에서 볼 수 있었다. 군락지의 같이 자생하는 침엽수인 소나무, 잣나무와 활엽수인 느티나무, 감나무, 고로쇠나무, 단풍나무, 뽕나무, 은행나무에서는 관찰되지 않았다. 자생지의 고도는 해발 $0{\sim}1200\;m$까지 잘 생육되고 방향과 지형을 가리지 않고 기주식물이 잘 생육 할 수 있는 곳이면 전국에서 재배가 가능할 것으로 판단되었으며, 종자 전파는 조류에 의함이 확인할 수 있었다. 겨우살이의 기생은 흡기 발생부터 기주식물의 표피 또는 조직성분에 따라 영향이 있을 것으로 생각되며 인공재배 연구의 좋은 성과를 위해 겨우살이가 잘 기생하는 기주식물의 기주 특이성에 대한 연구가 이루어져야 할 것으로 사료된다.
본 연구는 상기생, 진피, 국화 및 맥문동 혼헙물이 혈관건강을 증진 시킬 수 있는 건강차를 개발하는데 기초 자료를 확보하고자 한다. 이에 따라 상기생, 진피, 국화 및 맥문동의 혼합 조성물이 농도별로 수축혈관에 미치는 영향과 농도에 따른 조성물이 세포생존율에 미치는 영향을 통해 안정성을 검증하였다. 조성물의 농도가 높을수록 혈관의 이완효과가 큰 것으로 나타났으며, 본 조성물이 혈관의 수축 이완에 영향을 미칠 수 있음을 확인하였다. 또한 세포생존율이 대조군보다 높게 나타나 정상 간과 신장 세포의 성장에 유익한 경향을 보임을 알 수 있었다. 본 연구의 결과는 향후 한약자원을 활용한 차별화된 건강차 개발의 기초자료이며, 개발된 차로 혈관 수축률 억제 기전연구가 이루어진다면 동양의 한약자원을 활용한 현대화된 분석법을 통해 융복합적 방법으로 건강차 개발에 기초자료로 제공하고자 한다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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